黑曲霉糖化酶基因在毕赤酵母X33中的高效表达     

王强  徐义兵  郭春和  黄毓茂 《中国畜牧兽医》2012,39(4):21-24

为高效表达黑曲霉糖化酶基因,根据GenBank中糖化酶的氨基酸序列(登录号:AY652617),选用毕赤酵母(Pichia pastoris)密码子偏嗜性,全基因合成新的cDNA序列。改造后的基因克隆到pGAPZαA质粒中,获得重组分泌型酵母表达质粒pGAPZαA-EC,经限制性内切酶Bln Ⅰ酶切线性化后,电击转化入毕赤酵母细胞X33内。经高浓度博莱霉素抗性筛选,得到高拷贝转化子,PCR检测结果显示,糖化酶基因与毕赤酵母染色体稳定结合。糖化酶蛋白获得分泌表达,SDS-PAGE分析其分子质量约为80 ku,其表达量约为180 mg/L。表达产物经Starch-PAGE活性染色,显示其具有酶学活性。  相似文献   

混菌发酵苹果渣生产饲料蛋白的研究     

谢亚萍  张宗舟  蔺海明 《饲料博览》2011,(2)

试验利用太空诱变获得的优良菌种黑曲霉ZM-8和酿酒酵母、热带假丝酵母以及白地霉复配制成复合菌剂固体发酵苹果渣。通过正交试验获得了最适的培养基配方和复合菌剂的最佳配方。试验确定的最适培养基配方为硫铵7g、白糖4g、尿素2g、食盐4g,产物中粗蛋白的含量达26.4%,提高了312.50%。复合菌剂的最佳配方为黑曲霉突变株ZM-80.5g、酿酒酵母1.5g、白地霉1.0g、热带假丝酵母1.5g,产物中粗蛋白的含量达27.9%,提高了335.94%。  相似文献   

1株犬源致病性黑曲霉菌的分子鉴定及生物学特性研究     

李必富  王晓佳  杨金福  汤承 《河南农业大学学报》2011,45(2):188-191

从患皮肤病犬患病部位分离出1株真菌,对其培养特性、形态特征、致病性等生物学特性以及核糖体转录间隔区(rDNA-ITS)的分子特征进行研究.结果表明,该分离株具有曲霉菌的典型菌落和形态特征;经皮肤和腹腔接种途径感染免疫抑制小鼠,均出现与自然感染病例相似的皮肤病变;基于rDNA-ITS序列的分子鉴定证实该分离株为黑曲霉菌.  相似文献   

微波协同黑曲霉水解稻谷壳糖化工艺的优化     

李湘苏 《湖北农业科学》2011,50(7):1458-1461

以稻谷壳为原料,采用微波预处理协同黑曲霉水解稻谷壳制备还原糖。探讨了经过微波预处理后原料的粒度、酶液用量、水解温度和水解时间对还原糖得率的影响,并采用响应面法建立二次回归模型对水解工艺进行了优化,在水解温度为61℃、水解时间为18.8h、酶液用量为31U/g时,还原糖的平均得率可达到46.17%,比在相同工艺条件下未经微波处理的得率提高了96.22%。  相似文献   

解磷菌株黑曲霉PSFM发酵条件优化研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

梁艳琼  雷照鸣  贺春萍  郑肖兰  郑服丛 《广西农业科学》2011,42(3):240-245

【目的】利用液体培养法探究不同碳源、氮源、无机盐和微量元素浓度以及发酵时间、温度、初始pH、转速、接种量等条件对解磷菌解磷特性的影响,获得解磷菌的最佳发酵培养基和培养条件。【方法】采用单因素及正交试验法,对一株分离自土壤的解磷真菌黑曲霉（Aspergillus niger）PSFM菌株的基础发酵培养基和发酵条件（发酵时间0～10d、温度20～40℃、初始pH值3.0～11.0、接种量1%～11%、转速120～300rpm）进行优化,测定其发酵液吸光度值,以解磷量的高低作为评价发酵培养基及发酵条件优劣的指标。【结果】分别在无机磷和有机磷液体培养基、简单培养基（SP）、NBRIY、NBRIP、NBRIYP培养基中培养6d后,以无机磷液体培养基的PSFM菌株解磷能力最高,解磷量为526.42mg/L。在12种不同碳源培养基中,PSFM均能正常生长,其解磷能力由大到小依次为：木糖〉葡萄糖〉乳糖〉蔗糖〉麦芽糖〉半乳糖〉山梨糖〉甘露糖〉果糖〉可溶性淀粉〉鼠李糖〉甘油。以硝酸钠、尿素、酵母浸膏、氯化铵、硝酸镁、硝酸铵、色氨酸、乙酸铵、牛肉浸膏、胰-蛋白胨、甘氨酸、酪氨酸、丙氨酸和精氨酸为氮源时,硫酸铵为唯一氮源的解磷效果最好,菌株PSFM发酵液中有效磷含量最高（990.31mg/L）。菌株PSFM的解磷能力均随着最佳培养基中NaCl、KCl、MgSO4·7H2O、FeSO4·7H2O和MnSO4·7H2O浓度的增加呈先提高后降低趋势,当其浓度分别为0.03%、0.01%、0.03%、0.001%、0.001%时,菌株PSFM的解磷能力均最强。在不同发酵条件下,以发酵6d、温度28℃、初始pH6.0、5%接种量、转速300rpm的PSFM解磷能力最强,解磷量分别为599.24、528.23、603.69、530.57和731.48mg/L。【结论】最适合PSFM菌株的基础发酵培养基为无机磷液体培养基,碳源为1.0%木糖,氮源为0.10%硫酸铵,最佳无机盐配方为：NaCl0.10g/L、KCl0.70g/L、MgSO·47H2O 0.70g/L、FeSO4·7H2O 0.01g/L、MnSO·47H2O 0.01g/L;最佳培养条件为：温度28℃,初始pH6.0,转速180rpm,接种量5%,发酵时间为6d。  相似文献   

片烟黑曲霉菌株产纤维素酶的条件优化及酶的分离纯化     

范坚强  周彬  宋纪真  王金华  陈义强  王永泽 《浙江农业学报》2012,24(6):0

为降低烟叶燃吸的刺激味、改善口感、增加香气、提高烟叶品质,从烟叶表面筛选到一株产纤维素酶活性较高的黑曲霉,应用Plackett Burman试验确定4种显著因子,RSM法对4种显著因子进行了优化和分析,并对酶蛋白的分离纯化作了初步研究。结果显示：发酵产酶的最适碳源为玉米芯,氮源为NH4NO3,当玉米芯用量为13.4%,NH4NO3为0.4%,温度为30.4℃,pH为5.6时产酶比活力最高,可达40.02 U·mL-1。纤维素酶酶蛋白的硫酸铵盐析最佳饱和度为60%,经Sephadex G100凝胶柱层析纯化后的比活力提高了3.5倍,回收率为32.6%,达到较高水平。  相似文献   

黑曲霉TH-2蔗糖酶的分离纯化及部分性质研究     

黄洁  梁建荣  苏茉  高亚鹏  唐云明 《西南大学学报》2011,33(2)

实验室保存的菌种黑曲霉TH-2经柠檬酸-磷酸缓冲液抽提,DEAE-Sepharose离子交换层析和Superdex-200凝胶过滤层析,得到电泳纯的蔗糖酶.纯化后的蔗糖酶比活为135.90 U/mg,回收率为37.7%,提纯倍数为20.3倍.测得酶的相对分子质量为1.29×105,最适温度为65℃,最适pH值为4.4.以不同浓度蔗糖为底物测得Km值为23.1 mmol/L Ag+对其活性有很强的抑制作用,而Zn2+,Cu2+,Mn2+对其有激活作用.  相似文献   

黑曲霉变异株AU 55发酵菊芋汁产菊粉酶的研究     

郑彦山  吴祥云  王丽威  孔涛 《西北农业学报》2011,20(1):159-164

为提高菊粉酶活力,以菊芋汁为主要培养基成分,对一株产菊粉酶的黑曲霉(Aspergillus niger)变异株AU-55发酵产酶历程和发酵工艺条件进行研究。结果表明,菊芋汁中还原糖的含量为3.4 g.L-1,菊糖含量约为121.3 g.L-1;黑曲霉AU-55在基础发酵培养基中培养,发酵液中菊粉酶活力、糖度、酸度、菌体生物量随着发酵时间的不断延长而变化,96 h菊粉酶活力达到最大;菊芋汁添加量、玉米浆添加量、初始pH、接种量对黑曲霉AU-55菊粉酶活力的影响均显著,优化后的发酵工艺参数为:菊芋汁250.0 mL.L-1,玉米浆20.0 g.L-1,NH4H2PO45.0 g.L-1,MgSO4.7H2O 0.5 g.L-1,NaCl 3.0 g.L-1,初始pH 6.5,接种量35.0 g.L-1,30℃,200 r/min下,培养4 d,所得菊粉酶活力最高达42.3 U.mL-1。  相似文献   

一株植物内生菌的化感作用测定     

《现代农业科技》2017,(14)

采用培养皿培育法,检测加拿大一枝黄花内生黑曲霉CHH-S1发酵菌液对4种作物种子萌发及幼苗生长的影响。结果表明,内生黑曲霉的发酵液能降低油菜、油麦菜和芝麻种子的发芽率,不同浓度的菌液可显著抑制4种受体植物籽苗的鲜重、根长和可溶性蛋白含量的增长,并表现出一定的浓度依赖性。油麦菜和芝麻籽苗内可溶性多糖含量受菌液刺激而增高,苋菜和油菜幼苗中的多糖含量则受到明显抑制作用。以上结果表明,加拿大一枝黄花的内生菌具有良好的化感作用。  相似文献   

航天诱变混菌固态发酵玉米秸秆生产单细胞蛋白条件的优化   总被引：1，自引：0，他引：1  

马旭光  张宗舟 《中国饲料》2010,(13)

通过正交试验对啤酒酵母YB-6的接种时间、接种量和黑曲霉ZM-8与啤酒酵母YB-6共生发酵时间等因素的参数进行了优化。结果表明,啤酒酵母YB-6的接种时间(A)、接种量(B)和共生发酵时间(C)对CMC酶、FPU酶和SCP含量的影响大小顺序均为ACB,且产CMC酶和SCP的最优组合为A3C2B2,即酵母菌的接种时间为黑曲霉ZM-8发酵24h后、共生发酵时间为48h、接种量为10%;产FPU酶的最优组合为A4C3B3,即酵母菌的接种时间为黑曲霉ZM-8发酵36h后、共生发酵时间为60h、接种量为15%。最后,综合各因素将发酵条件的最优组合确定为A3C2B2。优化后的FPU酶、CMC酶和SCP含量分别为6.83、28.12U/g和26.73%,比优化前测定各指标值均有不同程度的提高。  相似文献