禽流感病毒A/Duck/Shnghai/02/99(H9)HA基因的克隆及序列分析     

徐晔  王恒安  姚火春  邱列群  陈家华 《上海交通大学学报(农业科学版)》2006,24(5):456-459

根据GenBank已公布的禽流感病毒H9亚型血凝素蛋白编码基因,设计了一对引物(H1和H2),RT-PCR扩增禽流感病毒A/Duck/Shanghai/02/99(H9)的HA基因,扩增片段与载体pUCm-T的连接产物转化大肠杆菌感受态细胞,重组质粒pUCm-T-HA经限制性内切酶酶切和PCR鉴定后进行测序。BlastN分析结果显示该分离株血凝素编码基因与已发表的鸭源禽流感病毒A/Duck/Shantou/1605/01(H9N2)和A/Duck/Hong Kong/Y280/97(H9N2)血凝素编码基因的核甘酸序列同源性为98%,从而从分子水平确定了该分离株为H9亚型禽流感病毒。  相似文献   

Isolation, Identification of Differentially Expressed Sequence Tags in the Backfat Tissue from Meishan, large White and Meishan×Large White Cross Pigs     

LIU Yong-gang  XIONG Yuan-Zhu  DENG Chang-Yan 《中国农业科学(英文版)》2005,4(1)

In order to detect the molecular mechanism of heterosis in pigs, the mRNA differential display technique was performed to investigate the differences of gene expression in the backfat tissue from Meishan,Large White and Meishan×Large White cross pigs.Nine 3'-end anchored primers in combination with ten 5'-end arbitrary primers were used to perform the differential display PCR and nearly 3 000 reproducible bands were examined .Fifteen expressed sepuence tags that were differentially expressed were isolated and then isdentifide through semi-quantitative RT-PCR.BLAST analysis revealed that the fifteen expressed sequence tags (ESTs) were ntt homologous to any of the known porcine genes or ESTs. These novel ESTs were then submitted to GenBank.  相似文献   

应用复合RT-PCR同时检测烟草环斑病毒和番茄环斑病毒     

吴兴海  陈长法  张云霞  邵秀铃  姜玉兰 《江苏农业学报》2006,22(4):398-400

将烟草环斑病毒(Tobacco ringspot virus)和番茄环斑病毒(Tom ato ringspot virus)的CP基因及RNA2基因序列引物,合成特异性RT-PCR检测引物,对烟草环斑病毒和番茄环斑病毒的感病植物组织进行了PCR扩增反应,结果显示,感染了烟草环斑病毒和番茄环斑病毒的植物组织的PCR产物均出现600 bp和470 bp特异性扩增条带,而其他病毒均未出现扩增条带,证明这两对引物具有烟草环斑病毒和番茄环斑病毒的鉴定特异性。将提取的烟草环斑病毒和番茄环斑病毒总RNA做梯度稀释,测定该检测体系的敏感度,结果显示,此体系最低可检出烟草环斑病毒和番茄环斑病毒提取的RNA模板浓度为234 pg/μl和264 pg/μl。表明,复合RT-PCR是一种可同时检测烟草环斑病毒和番茄环斑病毒的快速检测方法。  相似文献   

马铃薯卷叶病毒的RT-PCR快速检测   总被引：7，自引：1，他引：7  

路平  王蒂  司怀军 《甘肃农业大学学报》2005,40(4):532-534

根据马铃薯卷叶病毒的外壳蛋白基因序列,设计合成了一对寡核苷酸引物。从感染马铃薯卷叶病毒(PLRV)的马铃薯叶片中提取出病毒RNA,进行cDNA合成并运用RT-PCR技术进行体外扩增,得到一条长度约627bp的特异PCR扩增产物,与理论设计的外壳蛋白基因大小一致,而对照未得到任何产物。从而建立了快速灵敏的PLRV检测方法,为PLRV的防治及检测提供了有效手段。  相似文献   

广西葡萄良种脱毒研究进展     

娄兵海  白先进  陈爱军  白扬  宋雅琴  王博  王明召  张敏  何建军  刘萍 《中国果业信息》2019,48(2)

建立葡萄脱毒技术并繁育和推广葡萄良种脱毒苗木,对于广西葡萄产业的健康可持续发展极为重要。本研究团队在广西最先开展了葡萄脱毒技术研究。目前已建立了10种葡萄主要病毒的RT-PCR检测方法,并建立了热处理结合茎尖培养的葡萄脱毒技术,且已成功对‘阳光玫瑰’葡萄、‘夏黑’葡萄和‘巨峰’葡萄三个优良品种的带毒单株进行了脱毒。研究成果有助于进一步推动广西葡萄产业的健康可持续发展。  相似文献   

猪繁殖与呼吸综合症病毒的RT-PCR快速诊断技术研究     

卢新存  吴加强  柴同杰 《家畜生态学报》2006,27(5):93-95

根据猪繁殖与呼吸综合症病毒（PRRSV）的N基因序列设计了一对引物,建立诊断PRRSV的RT—PCR技术。使用该方法对山东某些地区疑似为PRRS的28份送检样品进行检测,结果4份为阳性,证实山东存在PRRSV的流行。RT—PCR方法的建立为PRRS的快速、准确诊断以及进行分子流行病学的调查提供了新的技术手段。  相似文献   

牙鲆抗菌肽hepcidin基因在成鱼组织和不同发育时期胚胎中的表达分析     

杨绒  陈松林  李伟  王志坚 《海洋水产研究》2006,27(6):84-87

抗菌肽hepcidin是由hepcidin基因编码产生的小分子多肽,是机体天然免疫的重要因子。本文利用RT-PCR的方法分析表明,抗菌肽hepcidin基因在牙鲆成鱼不同组织和不同发育时期胚胎中普遍表达,但是表达水平存在着明显的差异。  相似文献   

猪日本脑炎病毒RT-PCR检测方法的建立   总被引：2，自引：0，他引：2  

崔奕杰  杨润德  刘晓慧  秦彤  陈丽君  程龙  王琳  苏晓健  孙向华 《动物医学进展》2006,27(7):59-62

设计了1对引物,利用RT-PCR技术检测乙型脑炎病毒(JEV)。从GenBank中查出收录的31株猪乙型脑炎病毒E基因的已知序列,用DNA star软件对这31株猪乙型脑炎病毒E基因进行同源性分析,以确定扩增的靶序列。以这段靶区域为模板,利用Primer 5软件设计了1对引物,用减毒株SA14-14-2建立了检测乙脑病毒的RT-PCR方法,经敏感性,特异性试验测定,证明该方法敏感,特异;该法可检出样品稀释至256倍的鼠脑毒,相当于0.06个TCID50,对4株河北地区JEV分离株进行检测,结果所设计引物对4株病毒均能扩增出预期的片段。  相似文献   

H1N1亚型猪流感病毒的生物学特性测定及其HA基因序列分析     

马祥  顾万军  刘镇明  黄良宗  彭启明 《动物医学进展》2006,27(9):59-62

测定了A/Swine/Guangdong/1/01(H1N1)猪流感病毒的部分生物学特性;运用RT-PCR方法扩增其HA基因,并对其进行了克隆和序列分析。结果表明,该株病毒的EID50/0.2 mL及TCID50/0.1 mL分别为10-2.3和10-2.1,小鼠感染试验亦说明该病毒具有致病性。序列分析表明,HA基因全长为1 701 bp,与国内外流行株同源性达90.8%~99.0%。  相似文献   

苹果花脸病田间病情发展及ASSVd在组培条件下的传播     

郗娜娜  赵坷  杨金凤  孟祥龙  胡同乐  王树桐  王亚南  曹克强 《园艺学报》2020,47(12):2397-2404

为了明确苹果锈果类病毒（apple scar skin viroid,ASSVd）引起的苹果花脸病在田间的病情发展情况以及ASSVd在组培条件下的传播方式,2012—2015年对河北省顺平南神南村3个果园进行持续调查和检测。结果显示,果园A、B、C的显症率分别从3.00%、19.35%和10.00%上升至10.00%、34.41%和22.00%,带毒率分别从11.00%、20.43%和14.00%上升至23.00%、37.63%和30.00%,带毒率和显症率都逐年增加,而且带毒率大于显症率,即有些带毒果树不显症。发病果树田间分布有明显的发病中心。通过高通量测序发现显症果树ASSVd vsiRNA reads数是带毒未显症reads数的4.08倍,同时实时荧光定量PCR检测发现显症树ASSVd病毒积累量显著高于带毒未显症树。以携带ASSVd的组培苗和无毒组培苗为试材,利用RT-PCR检测明确了ASSVd可通过伤口沾染带毒汁液、组培剪污染、含毒培养基、根系接触进行传播,其中根系接触传染率较高。  相似文献