一步RT-PCR检测南芥菜花叶病毒方法的建立   总被引：12，自引：3，他引：12  

闻伟刚  赵秀玲  翁志平  孙立群 《植物检疫》2003,17(6):330-332

本研究采用Trizol快速提取植物叶片总RNA，通过GeneBank设计特异性引物，并利用一步RT—PCR技术，最终建立了一套比较实用的检测ArMV的方法。该方法对于其它病毒的检测同样具有借鉴意义。  相似文献   

体外转录法制备小反刍兽疫病毒荧光定量RT—PCR检测标准阳性模板     

赵文姬  ;包静月  ;李林  ;王志亮 《动物检疫》2008,(12):28-30

针对小反刍兽疫病毒的F基因设计了一对荧光定量RT—PCR的引物和探针,在正向引物的5’端加上T7启动子后与反向引物扩增小反刍兽疫病毒株Nigeria75／1细胞培养液RNA．切胶回收目的条带作为体外转录模板．体外转录后测RNA浓度以及OD值。线性试验和特异性试验结果表明,该模板具有良好的线性范围和特异性。当稀释度为4．9×10^8-4．9×10^3拷贝／μL时,相关系数为0．999。该模板稳定性好。-80℃保存一个月后无显著变化。对起始浓度为4．9×10^6、4．9×10^5、4．9×10^4拷贝／μl的标准品分别检测10次,变异系数分别为1．09％,1．47％,1．34％,表明以此模板进行荧光定量PCR具有较好的重复性。  相似文献   

菜豆荚斑驳病毒免疫捕获一步RT-PCR检测     

沈建国  王念武  高芳銮  黄可辉  郭琼霞 《中国农学通报》2009,25(1):176-179

【研究目的】建立快速、准确、简便的检测大豆种子上菜豆荚斑驳病毒的免疫捕获一步RT-PCR方法（一步IC-RT-PCR）。【方法】采用抗原捕获和一步RT-PCR相结合的方法,并通过反应条件优化,确定一步IC-RT-PCR的反应程序,同时对该方法的特异性及实际检测效果进行验证。【结果】成功建立了一步IC-RT-PCR检测菜豆荚斑驳病毒方法,能够从感染菜豆荚斑驳病毒的大豆种子上扩增出预期大小的特异性片段,而对其他病毒及健康大豆无特异性反应;应用该方法对不同产地大豆种子样品进行检测,结果从来自美国的大豆样品中检出菜豆荚斑驳病毒,检出率为50%。【结论】一步IC-RT-PCR方法可以快速、准确地检测大豆种子上的菜豆荚斑驳病毒,适用于口岸检验检疫。  相似文献   

Preliminary Studies on Species and Distribution of Citrus Viroids in China     

WANG Xue-feng  ZHOU Chang-yong  TANG Ke-zhi  LAN Jian-qiang  ZHOU Yan  LI Zhon-gan 《中国农业科学(英文版)》2008,7(9):1097-1103

Citrus viroids are the small but economically important RNA pathogens. For investigating their occurrence and distribution in China, 65 viroid samples collected from 8 major citrus cultivated regions were evaluated using one-step or multiplex onestep RT-PCR and biological indexing for specifically detection of Citrus exocortis viroid （CEVd）, Citrus bent leaf viroid （CBLVd）, Hop stunt viroid （HSVd）, Citrus viroid-Ⅲ （CVd-Ⅲ） and Citrus viroid-Ⅳ （CVd-Ⅳ）. The results showed that there were at least 4 kinds of citrus viroids （CEVd, CBLVd, HSVd, and CVd-Ⅲ） on citrus trees in China. Most of the infected citrus plants harbored more than one viroid species, and two plants were infected with up to 4 citrus viroids. Sweet orange was more frequently infected by viroids than other citrus varieties. It is the preliminary report on the species and distribution of citrus viroids in China.  相似文献   

印第安纳型水疱性口炎病毒一步法RT-PCR检测方法的建立   总被引：1，自引：0，他引：1  

盛祖勋陈义平  王宝安赵永刚 王志亮 《中国兽医科技》2005,35(8):623-625

根据印第安纳型水疱性口炎病毒（VSV）L蛋白的序列，设计了一套特异性引物，建立了检测VSV核酸的一步法RT-PCR方法，并用该法检测了不同的组织样品。结果显示，人工感染VSV小鼠组织检测为阳性，而口蹄疫、猪水疱病、猪瘟、猪生殖与呼吸综合征等病料检测均为阴性，表明该方法具有较好的特异性。  相似文献   

一步法RT-PCR同时检测CSFV和PRRSV方法的建立及应用     

李圣  郑欢莉  李红炳  孔令富  张晓敏  钏有科  孙永科  杨玉艾 《动物医学进展》2011,32(6):40-44

猪瘟(CSF)和猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是严重危害云南养猪业的传染病,为了建立一种能快速诊断猪瘟和猪繁殖与呼吸综合征混合感染的方法,根据NCBI上已发表的猪瘟病毒(CSFV)保守基因Erns和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)保守基因M基因的核苷酸序列,利用Oligo 6.0设计了2对特异性引物,经过PCR反应...  相似文献