高粱高效Ubiquitin启动子的克隆及活性鉴定          下载免费PDF全文

夏启玉  贺萍萍  张丽丽  张雨良  肖苏生  赵辉 《热带作物学报》2022,43(12):2443-2452

在转基因植物的研究中，启动子是影响转基因表达效率的重要因素之一。植物泛素（ubiquitin）基因启动子以启动效率高、甲基化程度相对较低、遗传性状稳定等特点成为单子叶植物中应用较为广泛的启动子。其中，玉米的Ubi-1是最常使用的Ubiquitin启动子之一。本研究旨在克隆高粱高效Ubiquitin启动子，为高粱及其他单子叶植物的遗传转化研究提供新的组成型启动子选择。本研究从NCBI数据库中查找到多个polyubiquitin基因，下载其起始密码子上游3000 bp的序列。根据Ubiquitin启动子的特点，选择含有5′ UTR内含子且大小合适的序列，并通过在线启动子预测网站进行启动子分析，最后选择2个基因（LOC8076096、LOC8063786）进行启动子克隆，将其启动子序列分别命名为U1和U5。将这2个启动子片段PCR扩增后，连入含有GUS报告基因的植物表达载体Ubi-GUS，得到重组表达载体U1-GUS和U5-GUS。重组载体通过农杆菌介导法转化水稻和狗尾草，PCR筛选阳性转化苗，对阳性转化苗进行GUS染色分析，鉴定U1和U5的启动子活性。GUS染色观察发现，所有以U1和U5为启动子的水稻和狗尾草阳性转化苗的根、茎和叶均呈现较深的蓝色，比以玉米Ubi-1为启动子的阳性转化苗的蓝色略深，且以U5为启动子的阳性转化苗比以U1为启动子的蓝色更深，而非转基因的水稻和狗尾草小苗则完全染不上蓝色。因此，启动子U1和U5在水稻和狗尾草中均具有组成型强启动子的活性，可作为新的组成型启动子应用于高粱、水稻、狗尾草及其他单子叶植物的遗传转化研究。  相似文献   

Identification of leaf chloroplast-specific promoter to efficiently control of Colorado potato beetle with reduced dsRNA accumulation in potato tubers     

Jianghua Liao  Haoling Rong  Lili You  Kai Xia  Minghui Wang  Peng Han  Chao Li  Jiang Zhang 《Pest management science》2023,79(9):3326-3333

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亚砷酸钠抑制柑橘果实柠檬酸积累的机制          下载免费PDF全文

叶丽  杨俊枫  李民华  李泽航  马小川  常媛媛  尹韬  盛玲  卢晓鹏 《湖南农业大学学报(自然科学版)》2023,49(5)

以亚砷酸钠(NaAsO2)溶液(含6.16 g/L MgSO4?7H2O、1 mL/L Triton X–100、0.17 g/L NaAsO2)喷施处理‘山下红’温州蜜柑、‘橘湘早’温州蜜柑、‘大红甜橙’树体，离体处理‘冰糖橙’汁胞(MS培养基含1.0 mg/L NaAsO2)及愈伤组织(MS培养基含0.5、1.0 mg/L NaAsO2)，测定可溶性固形物(TSS)、苹果酸和柠檬酸的含量，分析CsAN1和CsPH8基因的表达及其启动子活性。结果表明：NaAsO2可有效降低果实、汁胞和愈伤组织的柠檬酸含量；NaAsO2处理后，‘山下红’‘橘湘早’和‘大红甜橙’果实柠檬酸含量分别较对照降低4.59%～61.57%、0.67%～14.92%、13.22%～54.35%；NaAsO2处理60 d的‘橘湘早’果实中CsAN1和CsPH8的表达量分别下降73%和32%，在NaAsO2处理21 d的‘冰糖橙’汁胞中的表达量分别降低55%和27%，在0.5 mg/L NaAsO2处理20 d的‘冰糖橙’愈伤组织中分别降低73%和84%；启动子区域缺失试验结果表明，干旱信号可能作用在CsAN1和CsPH8启动子的ABRE元件上，并调控它们的表达，NaAsO2处理后含有ABRE元件的启动子区段活性明显减弱，推测NaAsO2抑制了柑橘中CsAN1和CsPH8启动子活性进而降低其表达，从而减弱了柠檬酸在果实中的积累。  相似文献