Prokaryotic Expression and Antigenicity Analysis of Porcine Japenese Encephalitis Virus Envelope Protein Domain Ⅲ     

HOU Hua-yan  DING Ling-ling  LV Mao-jie  YANG Bao-shou 《中国畜牧兽医》2016,43(4):934-939

In order to analyze the antigenicity of porcine Japanese encephalitis virus (JEV) E protein domain Ⅲ, which was expressed by pET-28a vector with His-tag and purified through Ni-NTA, the BALB/c mice were immunized with the purified protein.We identified the antigenicity of domain Ⅲ of E protein and the anti-mice and anti-porcine JEV E Ⅲ protein specific antibody titers by SDS-PAGE, Western blotting, indirect ELISA and IFA.SDS-PAGE results showed the expressed target protein existed mainly in the form of inclusion body.Western blotting, ELISA test results showed that the protein had good reactivity with anti-serum.The mice immunized with the purified JEV E Ⅲ protein generated 1×10⁵ anti-JEV E Ⅲ protein specific antibody titers by ELISA, and the porcine immunized with the porcine JEV generated 5.1×10⁴ anti-JEV specific antibody titers.The IFA results showed that JEV E Ⅲ protein anti-serum could identify JEV antigen.The above results showed that the recombinant JEV E Ⅲ had good antigenicity.These results provided important basis for development of diagnostic antigen for JEV.  相似文献   

倍他米松ELISA检测方法的建立     

郭璐  张晶  沙芳芳  赵兴然  王敬  王向红 《动物医学进展》2016,(12):50-54

为建立倍他米松(BET)ELISA检测方法,先使BET与琥珀酸酐反应,再采用活化酯法与牛血清白蛋白(BSA)偶联制备免疫原;其次,利用免疫动物获得多克隆抗体,经Sephrose 4B-proteinA方法对抗体进行纯化;最后,建立倍他米松ELISA检测方法。结果表明,免疫抗原偶联成功,获得了亲和力较高的多克隆抗血清,间接竞争ELISA测定其滴度为102 400、IC15为6.60×10-5 ng/mL和IC50为0.97ng/mL。该方法适用于残留在动物性食品中的BET现场大批量检测。  相似文献   

猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白单克隆抗体制备及其抗原表位鉴定     

胡晓静  张路捷  张杰  孙海凤  白娟  姜平 《畜牧与兽医》2023,(5):103-109

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是影响世界养猪业的重要病原,为了解析该病毒N蛋白抗原表位,本研究制备获得纯化的重组N蛋白,经过BALB/c小鼠免疫、细胞融合、间接ELISA方法筛选和Western blot鉴定,获得了7株稳定分泌抗PRRSV N蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,细胞培养上清液抗体效价为1∶800～1∶25 600,其中8F1、5E2、2B1、12E1的重链类型为IgG1,4F1、2H2、5A2的重链类型为IgG2b,轻链类型都为κ型。间接免疫荧光试验显示7株单克隆抗体均与PRRSV感染细胞产生反应,可识别3种不同的B细胞线性表位,分别位于47～57 aa、57～67 aa及67～77 aa区域,其中57～67 aa为新发现的抗原表位。本研究结果为PRRSV诊断试剂盒的开发和流行病学调查提供了有用工具。  相似文献   

奶牛乳房炎肠杆菌科主要病原菌Omp A理化特性、同源性及抗原表位生物信息学分析     

王然  范钊玮  马骏  段旭阳  王欣  刘硕  周玉龙  朱战波  崔玉东 《黑龙江八一农垦大学学报》2022,(6):56-63

奶牛乳房炎（Bovine Mastitis）是严重影响奶牛养殖业和奶业健康发展最为重要的疾病,以埃希氏大肠杆菌（Escherichia coli）为代表的革兰氏阴性肠杆菌科细菌是引起该病的重要病原菌。外膜蛋白A(Omp A)是肠杆菌科细菌外膜上的重要成分。研究表明,E.coli的Omp A具有良好的免疫原性,是预防E.coli引起奶牛乳房炎的重要候选疫苗抗原。但对引起奶牛乳房炎的肠杆菌科细菌Omp A的同源性及免疫原性分析缺乏报道。研究选取报导的引起奶牛乳房炎的牛源E.coli、克雷伯氏菌、沙门氏菌、福氏志贺氏菌、粘质沙雷氏菌、阴沟肠杆菌、弗氏柠檬酸菌和奇异变形杆菌共29株,用生物信息学方法分析它们Omp A的理化性质、氨基酸序列同源性、CD4+T细胞表位和线性B细胞表位。结果显示,这些细菌Omp A分别由346～359个氨基酸组成,无规则卷曲占比最大,稳定性好且均为亲水性,抗原性良好;与E.coli的Omp A同源性为97.2%～69.3%;都存在着1个高度同源的共同CD4+T细胞表位和6个同源性各异的共同线性B细胞表位。结果为进一步研究Omp A作为预防肠杆菌科细菌引起奶牛乳房炎候...  相似文献   

分娩发动前后外周血和胎盘中人类白细胞抗原G1的变化及其意义     

周丽萍  邹丽  何明  刘保华  刘晓瑛  周维 《湛江医学院学报》2007,25(5):519-521

目的研究足月妊娠分娩发动前后外周血和胎盘局部人类白细胞抗原G1(HLA-G1)变化并探讨其在分娩发动中的作用。方法应用ELLISA方法检测孕晚期未临产组(剖宫产组)和临产组外周血中人类白细胞抗原G1(sHLA-G1)浓度,并通过RT-PCR法比较两组胎盘组织中HLA-G1mRNA水平。结果与未临产组相比,临产组血浆中sHLA-G1表达强度明显下降,差异有统计学意义(P<0.01),临产组胎盘局部中HLA-G1 mRNA数量也明显低于孕晚期未临产组(P<0.01)。结论分娩发动时胎盘合成和分泌HLA-G1减少导致局部和外周血中sHLA-G1下降,可能激活多种免疫细胞并调节免疫细胞分泌细胞因子,导致循环及胎盘局部各种炎性细胞因子释放增加,使母胎界面细胞因子分泌增加,从而参加了分娩。  相似文献   

犬瘟热临床表现类型调查及其治疗方法     

陈金山  吴玉苹  陈俊杰 《贵州农业科学》2007,35(5):90-91

采取流行病学调查、临床检查、犬瘟热病毒抗原检测试纸方法,对528例确诊为犬瘟热的犬病进行统计分析。结果:肺炎型犬瘟热占59.1%(312/528),肠炎型犬瘟热占37.5%(198/528),脓疱型犬瘟热占1.9%(10/528),神经型犬瘟热占1.5%(8/528)。针对不同临床表现类型,采取犬瘟热单克隆抗体,中西结合疗法、支持疗法和对症治疗,治愈率达96.5%以上。  相似文献   

铜绿假单胞菌PvdD蛋白主要特性及抗原表位的生物信息学分析     

蔡其刚  王芬 《青海畜牧兽医杂志》2022,(6):18-24+51

为了分析铜绿假单胞菌中假单胞菌素合成酶D(PaPvdD)蛋白的主要特性与抗原表位,进而为研制基于合成酶D(PvdD)的铜绿假单胞菌疫苗提供依据,本研究首先从NCBI蛋白质数据库中下载PaPvdD蛋白的氨基酸序列,然后采用ProtParam、SignalP 4.1、PSORTb 3.0、MotifScan、SYFPEITHI等在线分析软件,结合DNAMAN、DNAStar等生物信息学软件分析、预测PaPvdD蛋白的理化性质、信号肽序列、亚细胞定位、翻译后修饰位点以及B、T细胞表位。结果表明,PaPvdD蛋白由2 448氨基酸(aa)组成,是一种亲水性的不稳定蛋白,不含有信号肽序列和跨膜结构域,可能定位于细胞质。PaPvdD蛋白含有3个B细胞表位(分别位于687～723 aa、1 748～1 784 aa、2 194～2 210 aa)和5个T细胞表位(分别位于97～105 aa、152～160 aa、697～705 aa、787～795 aa、1 005～1 013 aa)。本研究通过生物信息学方法筛选出了PaPvdD蛋白的3个B细胞表位和5个T细胞表位,这为研制基于PvdD的铜绿假单胞...  相似文献   

镉胁迫对拟南芥幼苗形态生理和错配修复相关基因表达的影响研究     

韩艳萍  ;刘宛  ;李艳芝  ;李培军  ;张巧丽  ;郭艳丽 《农业环境保护》2009,(6):1246-1252

以拟南芥为供试材料,从形态指标、生理指标、分子指标3个层次研究了镉（Cd）的毒理效应,筛选Cd敏感生物标记物。分子指标的研究以18S rRNA为看家基因, 错配修复基因MutS 2 homolog（atMSH2）, atMSH3,atMSH7,细胞增殖核抗原1 和2（atPCNA1和atPCNA2）为检测目的基因,采用半定量反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）技术研究Cd胁迫对上述错配修复相关基因表达的影响。结果表明,不同浓度（0、0.125、0.25、1.0、3.0 mg·L^-1）Cd 处理7 d后,根长随Cd胁迫强度的增加而降低; 0.125 mg·L^-1 Cd处理下,地上部可溶性蛋白含量显著增加,而在0.25、1.0和3.0 mg·L^-1 Cd时降低,但仍高于对照;幼苗叶片数、地上部鲜重、叶绿素含量变化与对照相比差异均不显著。地上部atMSH2,atPCNA1,atPCNA2基因表达量的变化与Cd胁迫浓度呈明显的倒U字型关系,分别在0.125,0.25和0.125 mg·L^-1 Cd时达到最大值。以上结果表明,地上部可溶性蛋白含量变化与上述3个错配修复相关基因表达量的改变趋势相符,且均对Cd污染胁迫较敏感,可以作为检测Cd污染及其相关生物学效应的潜在生物标记物。  相似文献   

H5N1亚型AIVHA抗原表位的高效表达及其抗原活性分析     

庞耀珊  谢芝勋  谢丽基  邓显文  谢志勤  刘加波  谢体三 《广西农业生物科学》2012,31(2):109-116

血凝素（hemagglutinin,HA）蛋白是禽流感病毒（avian influenza virus,AIV）的一个重要表面抗原性蛋白,在疾病诊断和防治上有重要意义。本研究为了探讨一种更为简便有效的HA重组蛋白表达途径,利用生物信息学软件,对H5N1亚型AIVHA基因编码的氨基酸序列进行分析,在分析其在大肠杆菌中的密码子偏好性、稀有密码子分布情况及有关蛋白的抗原性等重要特性后,构建了HA抗原表位重组表达质粒pET-32a（＋）-HA。经测试,该重组质粒在1mmol/LIPTG诱导剂作用下诱导过夜,能在大肠杆菌Rosetta-gami B（DE3）中高效表达,并得到48.1kD大小的目的重组表达蛋白。重组蛋白用6×His-tagged protein纯化试剂盒纯化后,与福氏佐剂等量混合制备成抗原,以200μg/鸡的剂量皮下注射2月龄SPF鸡3次,采血分离血清。Western-Blot试验结果表明,该重组表达蛋白能分别与所制备的高免鸡血清及H5N1亚型AIV阳性血清发生特异性反应,在硝酸纤维素膜上出现特异性杂交带。说明本试验研究的HA抗原重组表达蛋白具有良好的免疫原性和反应原性,保留了HA蛋白的抗原活性,提示该重组蛋白在H5亚型AIV的防治技术研究中具有重要的实际应用价值。  相似文献   

一例肉鸡大肠杆菌病的诊治     

牛德料  孟日增 《畜禽业》2008,(4):88-89

<正>大肠杆菌具有多种血清型、抗原结构复杂,并且是动物肠道内正常栖息菌。此菌在正常情况下不会对宿主致病,只有当动物机体内环境发生变化时,细菌与机体的矛盾对比失衡时才会使机体发病。1发病情况晋中市某养鸡户饲养三黄鸡8000  相似文献