倍他米松ELISA检测方法的建立     

郭璐  张晶  沙芳芳  赵兴然  王敬  王向红 《动物医学进展》2016,(12):50-54

为建立倍他米松(BET)ELISA检测方法,先使BET与琥珀酸酐反应,再采用活化酯法与牛血清白蛋白(BSA)偶联制备免疫原;其次,利用免疫动物获得多克隆抗体,经Sephrose 4B-proteinA方法对抗体进行纯化;最后,建立倍他米松ELISA检测方法。结果表明,免疫抗原偶联成功,获得了亲和力较高的多克隆抗血清,间接竞争ELISA测定其滴度为102 400、IC15为6.60×10-5 ng/mL和IC50为0.97ng/mL。该方法适用于残留在动物性食品中的BET现场大批量检测。  相似文献   

Effects of dietary L-threonine levels on antioxidant capacity,digestive enzyme activities,and antibody production of Xinyang green-shell laying hens     

《The Journal of Applied Poultry Research》2016,25(3):422-427

Xinyang green-shell laying hens (n = 720), 32 wk of age were allocated to 5 dietary treatments groups, each of which included 6 replicates of 24 hens. The control group was given a basal corn-peanut-soybean meal diet containing 0.47% L-threonine (L-Thr). L-Thr levels of the experimental groups were 0.57, 0.67, 0.77, and 0.87%, respectively. The trial lasted 10 wk. Serum concentrations of total superoxide dismutases (T-SOD) and superoxide dismutases (SOD) were maximized at 0.67% L-Thr group. The 0.57% L-Thr group had the highest serum total antioxidative capacity (T-AOC), while the 0.67% L-Thr group had the lowest serum malondialdehyde (MDA) concentration. Hens fed 0.67% L-Thr of the diet resulted in the highest SOD and T-AOC levels in the liver. The activity of amylase and lipase in the jejunum was maximized at 0.77% L-Thr level. Hens fed 0.77% L-Thr in the diet resulted in the highest IgM and IgG levels in the jejunum. In conclusion, we suggest that a L-Thr level above 0.67% may have had an antioxidant capacity and positive effect on digestive enzyme activities and antibody production in the jejunum of Xinyang green-shell laying hens.  相似文献   

A prospective,randomized, double-blind,placebo-controlled multisite,parallel-group field study in dogs with osteoarthritis conducted in the United States of America evaluating bedinvetmab,a canine anti-nerve growth factor monoclonal antibody     

《Veterinary anaesthesia and analgesia》2023,50(5):446-458

ObjectiveBedinvetmab, a fully canine anti-nerve growth factor monoclonal antibody, was evaluated in dogs for control of osteoarthritis-related pain in a study conducted to support registration in the USA.Study designRandomized, double-blind, placebo-controlled, multicenter, parallel-group study.AnimalsGeneral practice client-owned dogs with osteoarthritis (n = 272).MethodsDogs were block randomized 1:1 to placebo (saline, n = 137) or bedinvetmab (n = 135; 0.5–1.0 mg kg^–1) administered subcutaneously, once monthly. The primary end point, day 28 Canine Brief Pain Inventory (CBPI) treatment success (TS), required pain severity score (PSS; 0–10) decrease ≥1 and pain interference score (PIS; 0–10) decrease ≥ 2. CBPI TS rates [and number needed to treat (NNT)], change in scores [and standardized effect size (ES)], change in quality of life (QoL) and bedinvetmab half-life were calculated.ResultsSignificant (p < 0.05) improvement with bedinvetmab over placebo occurred (days 28, 42, 56, 84) for CBPI TS. Of cases evaluable for day 28 CBPI TS (placebo, n = 131; bedinvetmab, n = 128), success rates were 36.6% and 47.4%, respectively (p = 0.0410) (NNT, 9.3; PSS and PIS ES, 0.3). CBPI TS increased after the second dose in both groups, plateaued for bedinvetmab at day 42 and decreased for placebo beginning day 84. Day 84 NNT (4.3), PSS (0.4) and PIS (0.5) showed continued improvement with monthly dosing. After the first dose, mean (± standard deviation) bedinvetmab half-life was 19.1 (8.3) days. Adverse events were similar between groups and not considered treatment-related. There was a significant effect of bedinvetmab versus placebo on all CBPI components (PIS, PSS, QoL).Conclusions and clinical relevanceThese results corroborated those previously reported and provide further support of safety and effectiveness of bedinvetmab (0.5–1.0 mg kg^–1) administered subcutaneously at monthly intervals to dogs for control of osteoarthritis-related pain.  相似文献   

苦荞查尔酮合成酶多克隆抗体制备及组织表达分析     

李蒙  陈鹏 《西北农业学报》2022,(11):1491-1498

苦荞查尔酮合成酶(FtCHS)是黄酮类化合物合成过程中的限速酶之一,在苦荞黄酮类次生代谢物合成中起到重要作用。以苦荞种子灌浆期cDNA为模板,采用RT-PCR方法克隆获得FtCHS基因,通过生物信息学分析确定FtCHS的截短抗原基因序列(TrCHS)。再通过原核表达、亲和层析等方法制备并纯化TrCHS抗原,以纯化的抗原免疫大白兔获得TrCHS的多克隆抗体,利用半定量RT-PCR、Western blotting方法分析苦荞不同器官FtCHS的表达情况。结果表明,成功克隆FtCHS基因开放阅读框(ORF)大小为1 182 bp,共编码393个氨基酸,通过原核表达获得TrCHS抗原的分子质量约34.71 ku,所制备的多克隆抗体具有较高的特异性,FtCHS基因在苦荞叶子、种子的表达量明显最高。  相似文献   

犬瘟热临床表现类型调查及其治疗方法     

陈金山  吴玉苹  陈俊杰 《贵州农业科学》2007,35(5):90-91

采取流行病学调查、临床检查、犬瘟热病毒抗原检测试纸方法,对528例确诊为犬瘟热的犬病进行统计分析。结果:肺炎型犬瘟热占59.1%(312/528),肠炎型犬瘟热占37.5%(198/528),脓疱型犬瘟热占1.9%(10/528),神经型犬瘟热占1.5%(8/528)。针对不同临床表现类型,采取犬瘟热单克隆抗体,中西结合疗法、支持疗法和对症治疗,治愈率达96.5%以上。  相似文献   

魔芋花叶病毒衣壳蛋白的原核表达和多克隆抗体制备     

唐国亮  张玉宝  王若愚  王亚军  赵霞  苏学思  金卫杰 《浙江农业学报》2022,34(11):2471-2481

采用小RNA测序技术对甘肃省榆中县疑似感染病毒病的当归[(Angelica sinensis(Oliv.)Diels]样品进行测序鉴定,发现样品中含有魔芋花叶病毒(Konjac mosaic virus,KoMV),通过反转录PCR(RT-PCR)扩增KoMV衣壳蛋白(capsid protein, CP)的cp基因,克隆的KoMV cp基因连接原核表达载体pET-28a(+),导入E.coli Rosetta^TM(DE3)诱导表达蛋白,在Ni-NTA重力柱层析作用下纯化CP融合蛋白,并以此作为抗原免疫新西兰大耳白兔制备多克隆抗体。序列分析表明：KoMV cp基因片段大小为840 bp,编码280个氨基酸的外壳蛋白;与GenBank已注册同源性较高的KoMV分离物相比,核苷酸序列相似性为85.58%～99.41%,氨基酸序列相似性为89.32%～99.29%;KoMV的病毒种群分布存在明显的区域性和寄主差异。SDS-PAGE显示,不同温度诱导下KoMV CP融合蛋白在E.coli Rosetta^TM(DE3)中均以包涵体的形式大量表达,融合蛋...  相似文献   

葡萄β型液泡加工酶基因(VvβVPE)的原核表达、纯化与多克隆抗体制备     

巩培杰  张朝红  魏蓉  李树秀  王跃进 《农业生物技术学报》2013,21(6)

液泡加工酶(VPE)基因是植物内启动和执行细胞程序性死亡的关键基因,β型VPE是种子特异表达并且为种子蛋白成熟所必须的基因.本研究以黑比诺葡萄(Vitis vinifera cv.Pinot Noir)花后8个不同时期胚珠的cDNA混合样为模板,通过RT-PCR扩增得到葡萄β型液泡加工酶基因(暂命名VvβVPE,GenBank登录号:KC136352),开放阅读框1 485 bp.进一步将VvβVPE克隆到pGEX-6P-1原核表达载体并转入大肠杆菌(Escherichia coli)BL21中,经IPTG诱导,获得约81.3 kD的包涵体融合蛋白GST-VvβVPE.将诱导条件优化后,在37℃、0.05 mmol/L IPTG诱导5h后融合蛋白GST-VvβVPE的表达量最大,采用电透析与盐酸胍处理后透析复性两种方法获得纯化包涵体蛋白,电透析纯化法获得纯化包涵体蛋白的浓度可达到免疫要求.使用纯化蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗血清,经Western blot检测,该抗血清(稀释到1∶10 000)与GST-VvβVPE融合蛋白识别反应良好,获得的抗血清可用于以后的VvβVPE的酶活性分析、免疫亚细胞定位分析以及转基因植株蛋白水平的鉴定等,为进一步明确VvβVPE在葡萄胚珠发育中的作用提供基础数据.  相似文献   

苹果属小金海棠MxIrt1基因特异性片段的原核表达及多克隆抗体的制备     

孙春玉  王忆  孔瑾  许雪锋  李天忠  韩振海 《园艺学报》2009,36(10):1411-1416

 MxIrt1是从苹果属植物小金海棠中克隆出的二价阳离子转运膜蛋白基因。为进一步研究该基 因的功能, 利用MxIrt1基因位于第3和第4跨膜区之间的162 bp片段, 构建了原核表达载体pGEX-MxIrt1,经原核表达、亲和层析、获得GST2MxIRT1融合蛋白, 以融合蛋白为抗原, 制备多克隆抗体, ELISA方法检测抗体效价阳性, 蛋白质印迹检测植物体内总蛋白, 获得与预期大小一致的特异性条带。上述结果表明,表达的目的蛋白可用于免疫组织化学、蛋白质印迹检测。  相似文献   

水稻齿叶矮缩病毒Pns10蛋白在水稻原生质体内的表达   总被引：1，自引：1，他引：0  

张洁＃ 陈晓敏＃吴锦鸿  朱重庆丁新伦 吴祖建 《中国水稻科学》2017,31(3):232-237

【目的】水稻齿叶矮缩病毒(Rice ragged stunt virus,RRSV)Pns10蛋白在介体昆虫细胞内可形成类似病毒原质(viroplasm)的内含体,是RRSV侵染介体所必需。然而Pns10蛋白在水稻寄主中是否具有类似功能及其表达情况如何未见报道。【方法】利用大肠杆菌系统表达Pns10蛋白,免疫家兔制备多克隆抗体;通过水稻原生质体病毒侵染体系,利用免疫荧光技术分析Pns10蛋白在水稻原生质体内的分布情况,利用实时定量PCR技术和Western blot技术分别检测Pns10 RNA和Pns10蛋白在水稻原生质体内的积累情况。【结果】将Pns10基因克隆到Gateway系统原核表达载体p DEST17中,IPTG诱导表达成功后,制备融合蛋白抗血清。Western blot检测显示,该抗血清可检测感病水稻叶片中的Pns10蛋白。病毒侵染水稻原生质体后,Pns10蛋白可形成类似病毒原质的内含体;Pns10 RNA在病毒接种8 h后开始积累,24 h后达到最大值,随后开始下降;Pns10蛋白在24 h后开始表达,之后维持较高水平,60 h后略有下降。【结论】成功获得了Pns10抗血清;Pns10在水稻原生质体内成功表达,可形成类似病毒原质的内含体,并且Pns10 RNA的表达先于其蛋白的表达。  相似文献   

粮食污染物残留免疫分析技术研究与示范     

张少波  张文生  李文辉  陈嘉东  许艇  郑妙  张小松  刘志平  肖治理  刘剑锋  万红艳  黄金萍  田巍  葛俊  赵娜 《粮食储藏》2017,(4):5-14

随着人们对粮食安全问题的重视,政府部门不断加强对粮食安全的监测工作。针对粮食生产、加工、储运过程中的化学污染物安全性问题,研究粮食污染物快速监测技术,研究污染物免疫分析方法通过利用抗原、抗体的特异性反应来检测农药含量,设计并筛选吡虫啉、多溴联苯醚、功夫菊酯、氰戊菊酯4种半抗原,制备相关高特异性的抗体,分析吡虫啉、多溴联苯醚、功夫菊酯与气相色谱法(GC)相比,稻谷、大米、玉米样品通过相关性分析均高度相关,操作简便、快速。  相似文献