vp28重组核酸疫苗对凡纳滨对虾抗WSSV感染的免疫反应和保护效果          下载免费PDF全文

张敬艳  刘庆慧  黄倢 《渔业科学进展》2012,33(3):77-82

利用改构的pEGFP-N1-ie1强启动子载体构建含vp28基因的核酸疫苗,通过肌肉注射和饲料添加的形式免疫对虾,分析各实验组相对保护率和免疫基因(Dicer,Argonaute,STAT和Lyzome)表达,研究构建vp28重组核酸疫苗对凡纳滨对虾的保护效果。RT-PCR结果表明,注射和口服vp28组均可在对虾鳃组织中检测到vp28基因表达。在注射组中vp28的相对保护率为22.4%,饲料免疫组中vp28的相对保护率可达到36.84%。相对于对照组,vp28的注射组的STAT基因和Dicer基因表达量于第7天达到最大值。Argonaute基因表达量于第3天达到最大值,以后呈下降趋势。溶菌酶基因表达量一直呈相对较高的趋势。vp28的饲料投喂组的STAT基因和Argo-naute基因表达量于第7天达到最大值,以后呈下降趋势。Dicer基因表达量第3天达到最大值。实验结果表明,构建的vp28核酸疫苗在对虾抗WSSV防治中具有潜在应用价值。  相似文献   

高抗优质绿茶新品种天府28号的选育及配套技术     

王云  罗凡  李春华  唐晓波 《中国茶叶》2020,(3):5-7,12

天府28号新品种是从四川群体种自然变异个体中单株选择、无性繁殖培育而成,经品种比较、性状鉴定、生化分析、茶叶适制性和抗性研究,表明天府28号具有发芽较早、芽叶茸毛多、持嫩性好、产量高、抗逆性强、适应性广、适应性强、品质优等特点,是早生、优质、高抗和适制名优绿茶的优良品种。  相似文献   

桦木醇戊二酸酯的合成及溶解性能分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

吕坤  田水清  方桂珍 《林产化学与工业》2009,29(1):87-90

为了增强桦木醇的亲水性,对桦木醇的C-3位、C-28位羟基进行修饰,在吡啶作溶剂、二甲基氨基吡啶(DMAP)作催化剂的条件下,与戊二酸酐反应合成桦木醇戊二酸酯.采用FT-IR、 1 H NMR 和MS对产物进行结构表征,并且选用平衡法测定了桦木醇和桦木醇戊二酸酯在丙酮、无水乙醇、水和磷酸盐缓冲溶液(PBS,pH值7.4,)等不同溶剂中的溶解度.结果表明,在丙酮和无水乙醇中,桦木醇戊二酸酯的溶解度是桦木醇的33.52和22.65倍;在水中,桦木醇戊二酸酯的溶解度为 0.002 1 g(100 mL 水);在PBS中,桦木醇戊二酸酯的溶解度约为 0.001 5 g(100 mL PBS),目标产物的亲水性有了显著的改善.  相似文献   

猪源Lin28基因的克隆及其在猪胎儿成纤维细胞中的表达     

刘忠华  韩小娇  张鑫淼  王娟  牟彦双  何文腾  黄天晴  孔庆然  姜丹丹  丛义梅  尹智 《东北农业大学学报》2012,(9):26-31,145

Lin28广泛地表达于早期胚胎中,是重编程的一个重要诱导因子.根据GenBank中公布的猪源Lin28的序列设计合成引物,以猪桑葚胚cDNA为模板,通过RT-PCR方法扩增其编码区全序列.将此克隆片段连接到PMXs表达载体上,构建逆转录病毒载体PMXs-Lin28.在293T细胞中包装携带Lin28基因的逆转录病毒,感染猪如猪胎儿成纤维细胞(Porcine embryonic fibroblasts, PEF).免疫荧光及Real-time结果显示,PMXs-Lin28载体能够介导Lin28 mRNA和蛋白质在猪胎儿成纤维细胞中的高效表达,Lin28基因能够激活Oct4、Sox2、Nanog、Klf4和c-Myc基因的表达.  相似文献   

小麦转录因子TaWRKY28基因克隆与抗旱性分析     

于永昂  睢晓湉  张蕾 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》2022,50(4):32-41

【目的】克隆小麦TaWRKY28基因,通过农杆菌浸染法将其转化至拟南芥,研究转基因拟南芥植株生理生化指标变化,探究其在抵御非生物胁迫中的作用。【方法】采用RT-PCR方法,从小麦百农207 cDNA中克隆得到TaWRKY28基因,利用ProtParam等软件对其氨基酸序列进行生物信息学分析;利用实时荧光定量PCR方法,分析TaWRKY28基因的组织表达特异性及在NaCl、ABA、H₂O₂、干旱和低温逆境胁迫下的表达情况;构建基因超表达载体,通过花序浸染法转化拟南芥,选取TaWRKY28基因相对表达量较高的转基因T₃拟南芥株系,测定拟南芥超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化物酶（POD）的活性以及丙二醛（MDA）、H₂O₂和脯氨酸含量,研究TaWRKY28对拟南芥抗旱性的影响。【结果】成功克隆获得小麦TaWRKY28基因,该基因ORF全长为978 bp,编码325个氨基酸,相对分子质量为34.87 ku,理论等电点为9.27,含有1个WRKY保守结构域和1个C₂H₂锌指结构域,属于WRKY基因家族的第Ⅱ类成员。序列系统进化分析结果显示,小麦TaWRKY28与大麦HvWRKY2亲缘关系最近。亚细胞定位显示该基因位于细胞核中。qRT-PCR结果表明,TaWRKY28在小麦根、茎、叶、雌蕊和雄蕊组织中均有表达,但具有组织特异表达性,在叶中表达量最高,雄蕊中次之,雌蕊中表达量最低,且受NaCl、ABA、H₂O₂、干旱和低温胁迫后TaWRKY28表达会增强。对TaWRKY28转基因拟南芥植株的抗旱性分析表明,在干旱条件下,转基因植株的表型优于野生型,SOD、POD活性和脯氨酸含量显著增加,而H₂O₂和MDA含量显著降低,转基因植株抗旱性显著提高。【结论】克隆了小麦TaWRKY28基因,该基因可以增强转基因拟南芥植株的抗旱能力。  相似文献   

南美白对虾肝肠胞虫的分离及形态学观察     

乔毅  沈辉  万夕和  范贤平  蒋葛  黎慧  王李宝  史文军  成婕 《中国水产科学》2018,25(5):1051-1058

为了研究江苏地区感染南美白对虾(Penaeus vannamei)的肝肠胞虫(Enterocytozoon hepatopenaei,EHP)的形态学特点,分析与国外报道的差异性,本研究以江苏地区感染肝肠胞虫的南美白对虾肝胰腺组织为研究材料,通过蔗糖密度梯度离心等方法进行肝肠胞虫初步分离纯化,构建一种肝肠胞虫荧光染色检测方法,显微观察肝肠胞虫的孢子形态结构。结果发现感染江苏地区南美白对虾的肝肠胞虫孢子主要分布在35%~40%浓度的蔗糖层面,可推算其密度为1.15~1.17 g/m L。荧光显微镜下可见孢子椭圆或圆形,呈亮蓝色,孢子微小但可计数,显微观察可见肝肠胞虫孢子大小约为1.7μm×0.9μm,外壁上有大量白色瘤状物,疑似胞壁蛋白,孢子表面布满细小褶皱,孢子具有一个细胞核,极丝4~6圈,细胞壁由一相对薄的电子透亮的孢子内壁和电子致密的孢子外壁组成。结论认为江苏地区南美白对虾肝肠胞虫的形态结构与国外报道的吻合,本研究建立的肝肠胞虫分离纯化、荧光染色方法以及取得的肝肠胞虫形态学资料可为其检测和研究提供参考。  相似文献   

Development of monoclonal antibodies against VP28 of WSSV and its application to detect WSSV using immunocomb     

M. Makesh  A. Koteeswaran  B. Murali Manohar 《Aquaculture (Amsterdam, Netherlands)》2006,261(1):64-71

White spot disease (WSD) is an important viral disease of penaeid shrimp caused by white spot syndrome virus (WSSV). WSSV isolated from WSD outbreaks in commercial shrimp (Penaeus monodon) farms in India were propagated in the laboratory in healthy shrimp. The virus was purified from the infected tissues by sucrose gradient centrifugation. The VP28 was electroeluted from SDS-PAGE gels and was used to immunize Balb/c mice to produce hybridomas secreting monoclonal antibodies (MAb) against WSSV. A total of five hybridoma clones secreting MAbs to VP28 were produced. The MAbs were of the isotypes IgG1, IgG2b and IgM. The MAbs reacted with VP28 of WSSV and not with any other viral or shrimp protein in western blot. The MAbs were used to develop dot immunoblot assay using an immunocomb to detect WSSV from field samples. The test developed had an analytical sensitivity of 625 pg and a diagnostic sensitivity of 100% compared to single step polymerase chain reaction (PCR). The test can be used as an alternate for first step PCR to detect WSSV from field samples.  相似文献   

Effect of low-nitrogen stress on photosynthesis and chlorophyll fluorescence characteristics of maize cultivars with different low-nitrogen tolerances     

Ya-wei WU  Qiang LI  Rong JIN  Wei CHEN  Xiao-lin LIU  Fan-lei KONG  Yong-pei KE  Hai-chun SHI  Ji-chao YUAN 《农业科学学报》2019,18(6):1246-1256

Nitrogen(N) is a critical element for plant growth and productivity that influences photosynthesis and chlorophyll fluorescence. We investigated the effect of low-N stress on leaf photosynthesis and chlorophyll fluorescence characteristics of maize cultivars with difference in tolerance to low N levels. The low-N tolerant cultivar ZH311 and low-N sensitive cultivar XY508 were used as the test materials. A field experiment(with three N levels: N0, 0 kg ha–1; N1, 150 kg ha–1; N2, 300 kg ha–1) in Jiyanyang, Sichuan Province, China, and a hydroponic experiment(with two N levels: CK, 4 mmol L–1; LN, 0.04 mmol L–1) in Chengdu, Sichuan Province, China were conducted. Low-N stress significantly decreased chlorophyll content and rapid light response curves of the maximum fluorescence under light(Fm′), fluorescence instable state(Fs), non-photochemical quenching(qN), the maximum efficiency of PSII photochemistry under dark-adaption(Fv/Fm), potential activity of PSII(Fv/Fo), and actual photochemical efficiency of PSII(ΦPSII) of leaves. Further, it increased the chlorophyll(Chl) a/Chl b values and so on. The light compensation point of ZH311 decreased, while that of XY508 increased. The degree of variation of these indices in low-N tolerant cultivars was lower than that in low-N sensitive cultivars, especially at the seedling stage. Maize could increase Chl a/Chl b, apparent quantum yield and light saturation point to adapt to N stress. Compared to low-N sensitive cultivars, low-N tolerant cultivars maintained a higher net photosynthetic rate and electron transport rate to maintain stronger PSII activity, which further promoted the ability to harvest and transfer light. This might be a photosynthetic mechanism by which low-N tolerant cultivar adapt to low-N stress.  相似文献   

抗虫棉鲁棉研28号高产高效优质栽培技术     

姜辉  王留明  王家宝  赵军胜  高明伟  陈莹  王秀丽 《山东农业科学》2014,(10)

抗虫棉鲁棉研28号作为近年来农业部确定的黄河流域主推常规棉品种,在棉花生产上起到重要作用。为充分发挥该品种增产增效潜力,本文对其高产高效优质栽培技术进行总结介绍,以提供技术指导。  相似文献   

毛头鬼伞中一条新28S rRNA的发现及其同源性分析     

王学仁  贾敬芬  邱军兴  张改娜  何涛  郝建国 《广西农业生物科学》2010,(1):37-45

本研究从担子菌毛头鬼伞（Coprinus comatus）菌丝中分离获得一条新的28S rRNA序列,序列长度为906bp（GenBank accession No.GU568178）。该序列是我们前期在从毛头鬼伞中克隆一种烟草花叶病毒（TMV）的抗性蛋白基因y3时意外获得的一条非目的条带。将此获得的序列通过NCBI的BLAST,以及与其同源序列进行Clustal w和MEGA聚类分析,证实该序列是28S rRNA,同时还发现毛头鬼伞的系统进化关系比较离散。此外,在这一新28S rRNA与TMV的抗性蛋白基因y3之间发现有两个同源区段有可能是PCR扩增y3基因时出现非目的条带的原因。在这两个同源区段中,其一区段与克隆y3基因时所用的PCR引物之一有较高的相似性,另一区段也是一般PCR引物的类似物。本研究中新28S rRNA序列的获得是PCR扩增中出现非目的条带的新例,该序列的发现及聚类分析的结果有助于真菌基因组学研究及真菌生物分子分类系统的建立。  相似文献