Molecular phylogenetical studies of the thermophilic spore-forming desulfotomaculum isolated from oil-field     

Chen Wu  Li Chunyan  Xiang Fu  Yu Longjiang 《农业科学与技术》2005,6(4):14-21

A novel thermophilic and heterotrophic sulfate-reducing bacteria, strain CW-03, was isolated from crude oil well whose depth was 3.2 kilometer. The bacterium was strictly anaerobic; it does not endure acid and its maximum surviving temperature was 70℃. Many short chain organic compounds can be utilized as electron donors, which were acetate, formate, lactate, propionate, pyruvate, butyrate, succinate, malate, fumarate, valerate, caproate, heptanoate, octanoate, decanoate, tridecanoate, pentadecanoate, palmitate, heptadecanoate or ethanol, while sulfate and sulfite were used as electron acceptors. The following substrates were not utilized： benzoate undecanoate, dodecanoate, tetradecane, propanol, butanol, H2＋CO2 （80/20%; v/v） and acetate （1mM） ＋ H2. When lactate was used as electron donors, sulfite and thiosulfate, but not sulfer and nitrate, can be used as electron acceptors. Strain CW-03 was motile, curved rod, Gram-positive, pole flagellum and spore-forming. On the basis of 16S rRNA sequence alignment （accession numbers： AY703032）, CW-03 should be included in the genus Desulfotomaculum with BLAST analysis on line. However, some of its physiology and multiple sequence alignments were different from other members of this genus. Therefore, CW-03 should be recognized as a new species, for which we propose the name Desulfotomaculum chinamiddle （Bacteria, Firmicutes, Clostridia, Clostridiales, Peptococcaceae）.  相似文献   

应用B.melitensis 16M单克隆抗体建立羊布病的胶体金免疫层析检测体系     

唐景峰  李晓艳  梅建军  刘锴  王兴龙 《勤云标准版测试》2006,(11)

[目的]用B.melitensis16M提纯的LPS和O链抗原作为检测抗原,研制出针对B.melitensis16M的单克隆抗体(McAb),将其标记胶体金,建立一种诊断布病的胶体金免疫层析方法。[方法]B.melitensis16M全菌免疫Balb/C小鼠,采用杂交瘤细胞技术制备McAb,测定免疫球蛋白亚类及亲和力。用HiTrapProteinGHP亲和层析纯化抗体并用胶体金标记,建立胶体金免疫层析方法。选择最佳反应模式组装成试纸条,对其特异性、敏感性、稳定性、阳性病料试验。[结果]筛选出能稳定分泌抗B.melitensis16M的种特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株2D10、3C6、1E10,单抗亚类分别为IgG2a、IgG1,亲和常数(k)介于1×10-8￣2.6×10-10。根据配对实验,以3C6为最佳包被抗体,2D10为最佳金标抗体。抗体IgG标记浓度为30μg/ml时,检测效果最佳。同时,与B.melitensis16M多抗IgG作为包被抗体、2D10为金标抗体的检测体系对比,两种包被方法组装的试纸条最低检出量为5.0×103CFU/ml,且不与其它菌发生交叉反应,保持期≥100d。以荧光定量PCR为参照,试纸条检测80份阳性病料,检检出率为100%。[结论]建立的胶体金免疫层析方法检测B.melitensis16M快速、简便、可靠,有望开发成为布病快速诊断试剂盒。  相似文献   

猪源肺炎克雷伯菌的分离与鉴定     

贾艳  雷连成  何礼洋  杨洋  韩俊友  韩文瑜 《吉林农业大学学报》2007,29(2):196-199,202

从9只病死猪肺、肝脏中分离到4株革兰氏阴性杆菌,并对分离菌株进行形态学、培养特性、生化特性和分子生物学的鉴定,确定分离的菌株为肺炎克雷伯菌肺炎亚种。根据GeneBank上肺炎克雷伯菌16S rRNA可变区序列设计1对引物,4株细菌基因组DNA均可扩增到1段大小为127 bp特异性片段,经测序与已知肺炎克雷伯菌相应序列的同源性为100%,鉴定4株细菌均为猪源肺炎克雷伯菌。动物毒性试验证明其对小鼠有较强的致病性。  相似文献   

外来种互花米草盐沼土壤微生物16S rRNA特征分析——以江苏省潮间带为例^*   总被引：3，自引：0，他引：3  

周虹霞  刘金娥  钦佩 《云南农业大学学报(自然科学版)》2006,21(6):799-805

 通过对互花米草盐沼和对应光滩的土壤微生物16S rRNA的特征检测,分析了外来种互花米草的侵入对潮间带生态系统土壤微生物多样性的影响。试验中采集了江苏滨海不同季节光滩与互花米草(Spartina alterniflora)盐沼的土壤,直接提取法分离得到其中的土壤微生物DNA,并采用Sepharose 4B吸附柱对DNA进行纯化,有效地去除了腐殖酸,得到纯度较高的DNA样品模板。通过选取特异引物扩增16S rRNA基因序列,得到了较清晰的结果:有差异的16S rRNA扩增片断通过DGGE被分开,形成可见条带;不同的样品由于其中的微生物多样性的差异,扩增出的条带数量及其在凝胶上的相对位置都有一定的差异。结果显示:互花米草盐沼与光滩的土壤微生物群落多样性皆较低,二者在互花米草生长初期其土壤微生物群落结构具有一定的相似性。但总体来说,外来种互花米草的种植较明显地改变了滩涂的土壤微生物群落结构;此外,滩涂土壤微生物群落随着季节的变化而发生了较大的改变。  相似文献   

田菁及其与硫铵混合施用时水稻对肥料氮和土壤氮的利用     

黄志武  廖红 《华南农业大学学报》1992,(3)

应用标记15_M的田菁和硫铵进行一季水稻盆栽试验的结果表明,1.田菁和硫铵单独施用,田菁氨素的17.6％和41.8％分别为稻秆和谷粒利用,硫铵氨素的分别为15.1％和29.0％。这两种肥料氮在谷粒中分布的比例较大,稻杆和谷粒对田菁氨的利用率都高于硫铵氮.2.施用硫铵有促进水稻吸收土壤氨素的作用,比不施氨对照增加71.8％;相反,施用田菁减弱了水稻对土壤氨的吸收,比对照减少37.1％。3.田菁和硫铵混合施用,除了可使水稻对田菁氨的吸收增加(5.2％)。对硫铵氨的吸收减少(5.3％)外,亦有促进水稻增加吸收土壤氨素的作用,4.与硫铵单独施用的结果相比,这两种肥料混合施用,可以在消耗较少量土壤氨素的基础上,更好地维持水稻生长所需的氨营养供应。  相似文献   

羊源杀鲑气单胞菌16S rRNA基因的克隆测序及分析   总被引：2，自引：0，他引：2  

林如涛  周作勇  王小林  聂奎 《西南大学学报(自然科学版)》2011,33(8)

从重庆市丰都县无菌采集山羊血液,提取全血基因组,用16SrRNA基因的引物进行PCR扩增,得到2条长约1 500bp的扩增片段,将其克隆到pMD19-T载体后进行测序,并与3条豚鼠气单胞菌,3条嗜水气单胞菌,3条中间气单胞菌,4条杀鲑气单胞菌,2条温和气单胞菌,3条维氏气单胞菌和5条舒氏气单胞菌16SrRNA基因序列进行系统发育分析.结果表明:所克隆的基因片段长度均为1 507bp,GenBank登录号为JF823571和JF823572.系统发育分析发现2条序列均被聚类到杀鲑气单胞菌群,并与温和气单胞菌聚类到一个大的分支.同源性比对结果显示所获得的序列与杀鲑气单胞菌法国株(ATCC33658T)X74681和阿根廷株AF134065的同源性最高,均为99.6%,表明重庆地区存在受杀鲑气单胞菌感染的山羊.  相似文献   

中国北方地区甘草根瘤菌表型及遗传多样性研究   总被引：2，自引：0，他引：2  

谷峻  陈文新 《中国农业科学》2006,39(7):1321-1327

【目的】了解中国北方地区甘草根瘤菌的生物多样性。【方法】采用表型数值分类、16S rDNA PCR-RFLP分析和BOX-PCR指纹图谱分析的方法对北方地区的甘草根瘤菌进行表型、遗传多样性分析。【结果】供试菌株在数值分类聚类分析中约85％的相似水平上产生2个表观群，有11株菌未与已知参比菌株聚群。16S rDNA PCR-RFLP分析表明，供试的20株菌共产生14种遗传型，表现出丰富的遗传多样性。BOX-PCR指纹图谱分析进一步证明与甘草共生的根瘤菌的基因组也具有多样性。【结论】在中国北方地区与甘草共生的根瘤菌在Sinorhizobium、Rhizobium和Mesorhizobium属中均有分布。  相似文献   

副猪嗜血杆菌黑龙江株的分离与鉴定   总被引：1，自引：0，他引：1  

李雪松  陈欣  符芳  王伟  田华彬  郎越坤  徐春红  李曦  李春艳 《中国预防兽医学报》2011,33(3)

为确定黑龙江某猪场发病猪群的病原,本研究从疑似浆膜炎的病料中分离到一株革兰氏阴性细小杆菌,通过对其进行细菌形态学、培养特征、生化特性和16S rRNA基因PCR鉴定,结果表明该分离菌株为副猪嗜血杆菌(HLJ-1分离株)。16S rRNA基因序列分析结果显示:该分离菌株与参考株的基因同源性达99%;药敏试验结果表明HLJ-1分离株对头孢曲松、头孢噻肟等β-内酰胺类抗生素高度敏感;小白鼠致病性试验结果显示,该分离株具有较强致病性。  相似文献   

长角血蜱肠道细菌的分离与鉴定     

李春红  周勇志  赵素华  刘毅  张厚双  曹杰  周金林 《中国预防兽医学报》2011,33(8)

为深入研究肠道细菌在蜱的生理学和传播病原上的作用,本研究进行了长角血蜱肠道细菌的分离鉴定。按照细菌传统分离方法并结合16S rDNA测序鉴定,获得7个分离株,这些菌株分别属于显核菌属(Caryophanon sp.)、考克氏菌属(Kocuria sp.)、葡萄球菌属(Staphylococcus sp.)、微杆菌属(Microbacterium sp.)和短杆菌属(Brevibacterium sp.)5个菌属。  相似文献   

多头带绦虫Tm16与Tm18抗原基因的克隆及原核表达     

李文卉  盖文燕  姚菊霞  曲自刚  贾万忠  罗建勋  BLAGA R  付宝权 《中国预防兽医学报》2011,33(1)

为原核表达Tml6和Tm18重组蛋白,本研究以自然感染羊源脑多头坳原头节基因组DNA为模板分别扩增Tml6和Tm 18杭原基因全基因片段,测序鉴定后合成其开放阅读框架DNA片段,将基因组序列中的内含子去除并对其稀有密码子进行改造优化,构建重组表达质粒pGEX-Tm 16和pGEX-Tml8.转化大肠杆菌BL21后以IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析表达产物并进行纯化.结果显示:在大肠杆菌中表达出带有GST标签的大小约为39.6 ku和39.4 ku的重组蛋白,经谷胱甘肤琼脂糖树脂纯化得到高纯度的可溶性的GST-Tm 16及GST-Tml8重组蛋白,western blot分析表明重组蛋白均能够被兔抗GST单克隆杭体特异性识别.  相似文献