气肿疽梭菌C54-1株的制备与检定     

任小侠  冯妍  马欣  刘燕  王团结  杜吉革  潘晨帆  刘世博  张一帜 《中国兽药杂志》2024,58(2):10-17

为研究气肿疽梭菌C54-1株(CVCC60001)的菌种特性,制备了1批气肿疽梭菌C54-1株,并对菌种的形态及生化特性、培养特性、血清学特性、真空度、纯粹、剩余水分、毒力及免疫原性、16S rDNA等进行检定,以及对于该菌的适宜培养基促生长能力等方面进行了比较。实验结果表明,该冻干菌种的形态及生化特性、培养特性、血清学特性、真空度、纯粹、剩余水分、毒力及免疫原性均符合《中华人民共和国兽用生物制品规程》二〇〇〇版质量标准的规定。16S rDNA鉴定为气肿疽梭菌,相似度为99.93%。在免疫原性检定中,使用致死剂量攻毒时,免疫组能够4/4被保护,证明该菌明矾苗免疫效果良好。使用商品化梭菌培养基对于该菌培养进行了比对,证实商品化培养基替代厌气肉肝汤的可能性。本研究为气肿疽梭菌的制备和检定提供参考依据,并使用不同培养基进行比对研究,为该菌的稳定培养和疫苗工艺改进提供了研究基础。  相似文献   

猪丹毒杆菌SpaA优势表位的串联表达及其免疫效果分析     

李建 《中国兽药杂志》2024,58(3):10-15

目的 构建串联SpaA优势表位的丹毒亚单位疫苗,并对其免疫原性进行研究。方法 将丹毒杆菌表面保护抗原A优势表位串联表达,提取并经亲和层析纯化获得重组蛋白,制备亚单位疫苗,免疫小鼠和猪,21日后攻毒。结果 成功制备串联SpaA优势表位的丹毒亚单位疫苗,2μg重组蛋白可为小鼠抵抗1000MLD强毒攻击提供100%保护,100μg重组蛋白可为猪抵抗1MLD强毒攻击提供100%保护,可为猪抵抗2MLD强毒攻击提供67%保护。结论 串联SpaA优势表位的丹毒亚单位疫苗具有良好的免疫原性,高于商品化疫苗保护标准。  相似文献   

乳牛衣原体性流产的病原鉴定及免疫原性研究     

邱昌庆周继章  程淑敏曹小安 《中国兽医科技》2006,36(4):270-273

对采自甘肃、陕西和宁夏奶牛场的发生不明原因流产乳牛病料进行了间接血凝试验（IHA）、PCR、病原分离鉴定和MOMP基因检测，证实病原为鹦鹉热衣原体（Chlamydia psittaci）。对分离株Sx5和Nx进行毒力稳定性和免疫原性测定，用鸡胚连传20代，SX5和NX株的毒力比较稳定，毒力效价分别为10^-11ELD50和10^-10ELD50；用这2株菌对小鼠和牛做免疫效力试验，结果显示，免疫鼠5／5和5／5保护，对照鼠0／5保护；免疫牛3／3和3／3保护，对照牛0／3保护。表明，SX5和NX株具有良好的免疫原性，可以作为疫苗研制的候选菌株。  相似文献   

新城疫病毒F基因在新型杆状病毒表达系统中的表达及重组病毒的免疫原性   总被引：5，自引：1，他引：4  

王兴龙  金宁一  丁壮  金扩世  米志强  王宏伟  郭志儒  殷震 《中国兽医学报》2001,21(6):533-535

将新城疫病毒（四平株）F基因插入到pFastBac Ⅰ质粒中，构建了重组质粒pFF。pFF转化大肠杆菌DH10Bac后，F基因在助手质粒（helper plasmid)提供转座酶的情况下，通过转座进入Bacmid，构建了重组Bacmid(re-Bacmid)。在含有X－gal/IPTG、庆大霉素、卡那霉素和四环素的琼脂平板上，筛选白色菌落后，提取re-Bacmid转染Sf-9昆虫细胞。在昆虫细胞内，re-Bacmid经复制、表达、装配、形成重组杆状病毒，并表达F蛋白。经SDS－PAGE和Western-blot分析，表达的F蛋白的分子大小为63000，并证明在昆虫细胞内表达的蛋白能部分糖基化。表达的F蛋白约占细胞总蛋白的10％。动物试验证明，约建的重组杆状病毒具有良好的免疫原性。  相似文献   

Isolation,Identification and Immunogenicity Evaluation of H9N2 Subtype Avian Influenza Virus HF Strain     

CHENG Yi  TIAN Hui  ZHANG Ya  XUE Jingjing  SHENG Dongbei  LIU Wujie  WANG Wanbing  ZHANG Pantao  TIAN Kegong 《中国畜牧兽医》2007,47(9):2945-2952

In 2015,an H9N2 subtype avian influenza virus (AIV) strain was isolated from a chicken farm in Hefei,Anhui,and named HF strain.The results of the chicken embryo proliferation characteristics study showed that the half infection rate of chicken embryo (EID₅₀) was 10^9.17/0.1 mL,and the mean time to death for minimum lethal dose(MDT) was 87 h.The analysis result of HA gene showed that its amino acid cleavage site was located in RSSR↓GLF,which accorded with the characteristics of low pathogenic avian influenza.The genetic evolution analysis of HA gene revealed that the isolate belonged to the h9.4.2.5 lineage,which accorded with the current virus strain epidemic characteristics.The HF strain was prepared with 10 H9N2 subtype AIV isolates which isolated from all over the country from 2006 to 2018 to prepare inactivated vaccines,immunize SPF chickens,prepare positive sera,and analyze the virus antigenicity by cross hemagglutination inhibition test.The results showed that the correlation between the HF strain and the virus antigens before 2014 and was between 0.50-0.56,and the virus antigen correlation after 2014 was 0.89-1.00.This showed that the isolate had good antigenic correlation with epidemic strains in recent years.Inactivate HF strain virus solution with 0.2% formaldehydel,and its HA titer did not change before and after inactivation.After the inactivated virus solution was prepared into an oil emulsion inactivated vaccine to immunize SPF chickens,21 days after immunization,the average value of the HI antibody titer reached 9.0log2.It could make immune chicken completely resistant to H9 subtype AIV infection and provide 100% protection from challenge.The above research results showed that the HF strain had good immunogenicity and could be used as a vaccine candidate strain for the prevention of H9N2 subtype AIV.  相似文献   

Enhanced immune response with foot and mouth disease virus VP1 and interleukin-1 fusion genes     

Jong Hyeon Park  Sun Jin Kim  Jae Ku Oem  Kwang Nyeong Lee  Yong Joo Kim  Soo Jeong Kye  Jee Yong Park  Yi Seok Joo 《Journal of veterinary science (Suw?n-si, Korea)》2006,7(3):257-262

The capsid of the foot and mouth disease (FMD) virus carries the epitopes that are critical for inducing the immune response. In an attempt to enhance the specific immune response, plasmid DNA was constructed to express VP1/interleukin-1α (IL-1α) and precursor capsid (P1) in combination with 2A (P1-2A)/IL-1α under the control of the human cytomegalovirus (HCMV) immediateearly promoter and intron. After DNA transfection into MA104 (monkey kidney) cells, Western blotting and an immunofluorescence assay were used to confirm the expression of VP1 or P1-2A and IL-1α. Mice were inoculated with the encoding plasmids via the intradermal route, and the IgG1 and IgG2a levels were used to determine the immune responses. These results show that although the immunized groups did not carry a high level of neutralizing antibodies, the plasmids encoding the VP1/IL-1α, and P1-2A/IL-1α fused genes were effective in inducing an enhanced immune response.  相似文献   

猪带绦虫六钩蚴TSOL16基因的表达及免疫原性分析     

马全英  LUO Xue-nong  骆学农  王颖  丁军涛  岳城  景志忠  才学鹏 《中国预防兽医学报》2007,29(12):920-924

本研究采用RT-PCR技术扩增猪带绦虫六钩蚴TSOL16免疫原基因,将扩增产物与pMD18-T载体连接,重组质粒经PCR、酶切鉴定后进行测序;构建TSOL16基因的pGEX-4T-1原核表达载体,用IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE、Western blot分析;将所表达的蛋白免疫小鼠,经ELISA检测血清抗体验证其免疫原性。结果显示:所克隆的TSOL16基因片段长度为559bp,含有1个402bp的开放阅读框架,编码134个氨基酸,与已报道的猪带绦虫六钩蚴TSOL16基因核苷酸序列同源性为99%;表达的融合蛋白大小为40Ku,并能被猪带绦虫六钩蚴阳性血清所识别;免疫小鼠在1周后即检测到血清抗体,第30d即达到较高水平,说明该融合蛋白具有较好的免疫原性。  相似文献   

犬瘟热病毒R／20-8株核衣壳蛋白基因的克隆和表达     

王琛 袁宝任文陟  张嘉保赵志辉 《中国兽医科技》2007,37(5):378-381

应用RT-PCR技术扩增出犬瘟热病毒（CDV）核衣壳（N）蛋白基因的高度保守序列，将其克隆至质粒pMD18-T中，获得了重组质粒pMD18-T-N。将N基因的目的片段克隆到表达载体pGEX-4T-1中谷胱甘肽转移酶（GST）基因的下游，并将该重组质粒转化大肠杆菌BL21株，经IPTG诱导，N基因融合蛋白获得了高效表达。SDS-PAGE电泳和Western—blot分析结果显示，表达产物的分子质量为55ku，与CDV标准阳性血清呈阳性反应。表明，大肠杆菌表达的CDVN蛋白在免疫原性上与天然N蛋白具有一定的相似性，可作为诊断用抗原。  相似文献   

猪带绦虫六钩蚴45W-4B重组蛋白的免疫原性研究     

王福梅  骆学农  景志忠  岳城  才学鹏 《中国兽医寄生虫病》2006,14(3):1-5

目的观察猪带绦虫六钩蚴45W-4B抗原对仔猪的免疫保护作用。方法用IPTG诱导表达融合蛋白GST-45W-4B。用GST柱进行纯化，以Montanide ISA 206为佐剂制成疫苗免疫仔猪。间接ELISA检测仔猪血清抗45W-4B IgG抗体水平，MTT法进行外周血淋巴细胞殖试验。免疫1个月后全部实验组经口攻击感染25000彬头猪带绦虫虫卵，攻虫3个月后剖检，计算减虫率及保护率。结果免疫组注射疫苗的第2周起，抗体为阳性，45W-4B组持续升高至第8周，淋巴细胞增殖明显高于未免疫感染组。用该抗原制备的疫苗获得了95％的减虫率和33％的保护率。结论该抗原对猪囊尾蚴病具有很好的免疫保护作用。  相似文献   

猪囊尾蚴小热休克蛋白的免疫原性研究     

郭爱疆  岳城  景志忠  贾万忠  窦永喜  郑亚东  才学鹏 《中国预防兽医学报》2006,28(2):167-171

利用反转录聚合酶链式反应（RT—PCR），从猪囊尾蚴虫体中扩增出小热休克蛋白（small Heat shock protein，sHSP）基因，克隆至原核表达载体pGEX-4T-1，在大肠杆菌BL21中以GST融合蛋白的形式表达。SDS-PAGE分析证明，表达产物为64Ku的融合蛋白，经凝胶扫描分析，表达量约占菌体可溶性蛋白的30％。免疫学分析（Western blot，ELISA）结果表明，sHSP能与猪囊尾蚴血清反应。将表达产物点电泳后切胶回收免疫小鼠，进行Western blot和ELISA检测，其抗血清能与猪囊虫粗抗原及纯化的sHSP重组融合蛋白产物发生免疫学反应。该研究为丰富新的诊断试剂和免疫用重组抗原具有重要意义，同时，预测糖基化、磷酸化作用在sHSP实现生物学功能方面也具有广泛的意义。  相似文献