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脂质体法是一种传统的向哺乳动物细胞导入外源基因的方法,然而其转染效率受多种因素影响。本研究将从脂质体和质粒DNA量、转染暴露时间以及混合孵育时间等四方面进行探索,以寻找最佳的转染体系。试验结果表明最佳转染体系为:脂质体1.25μL、DNA 0.7μg、脂质体-DNA混合孵育0 min以及转染暴露6 h。随后我们用优化过的转染体系对新生广西巴马小型猪肾脏成纤维细胞进行转绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)操作,获得了(26.45±2.11)%的转染率,并以此为核供体经体细胞核移植技术成功构建表达GFP的广西巴马小型猪克隆胚胎,同时证实转基因克隆胚的体外发育能力比得上非转基因克隆胚。这为我们构建用于人类疾病研究的基因修饰广西巴马小型猪奠定了基础。 相似文献
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为探讨RNAi策略在抗GFLV基因工程中的效果,通过RT-PCR克隆获得了310 bp的GFLV外壳蛋白基因保守片段,采用Gateway技术将该基因片段连入目标载体pHELLSGATE12构建了RNAi植物表达载体,并通过农杆菌介导法转入烟草中,RT-PCR检测表明目的基因片段已整合到烟草基因组中并在RNA 水平上得到表达,病毒接种结果显示阳性植株的发病率明显低于对照,说明在转基因植株中dsRNA表达可干涉GFLV侵染过程。 相似文献
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转基因玉米苗期抗旱性生理生化指标及综合评价的研究 总被引:6,自引:0,他引:6
采用盆栽法,测定不同转基因玉米RT、BC、PK和H的指标:相对电导率(RWC)、相对含水量(REC)、光合速率(PR)、蒸腾速率(TR)、叶片失水速率(LLR)和叶水势(LWP),以期综合评价这4类转基因玉米的抗旱性能和所选指标作为筛选抗旱性指标的可行性,同时探求一套综合评价的方法。结果表明:抗旱性RT>BC>PK>H>CK,同时所选指标均可应用于抗旱性筛选,隶属度评价法可以作为一种综合评价方法应用到转基因玉米抗旱性筛选中。 相似文献
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[目的]分析转基因落叶松植株对土壤微生物的影响.[方法]采用稀释平板法研究了转基因落叶松幼龄林土壤微生物数量及其类群分布特征.[结果]转基因落叶松幼龄林土壤微生物数量具有明显的季节变化特征,以夏季最多,秋季次之,春季最少;在夏季达到最大值620.40×106 cfu/g干土,最小值出现在春季,为146.27 × 106 cfu/g干土.转基因落叶松幼龄林土壤微生物组成为细菌数量最多,占99%以上,放线菌数量次之,占0.070%;真菌数量最少,占0.049%.土壤微生物主要集中在O~20 cm的土层,随着土层的加深,微生物数量迅速减少,在深度为0~60 cm的土层中,同一类群的微生物数量变动范围较大,细菌为26.30×107~62.00×107 cfu/g千土,放线菌为0.50×104~ 11.00×104 cfu/g干土,真菌为1.00×104 ~ 29.00×104 cfu/g干土.[结论]落叶松人工林地植被组成和土壤微生物的类群结构均十分复杂,生物种类多样,生态效益良好. 相似文献
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苹果抗ASPV病毒RNAi载体构建及转化砧木M26的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
为获得抗病毒的转基因植物新材料,采用同源重组法构建了抗苹果茎痘病毒的植物表达载体,并对苹果砧木材料M26进行了遗传转化,成功获得了转基因阳性植株。首先以感病的皇家嘎拉叶片为材料,反转录合成c DNA第一链,采用PCR方法克隆获得了489 bp的ASPV外壳蛋白基因的保守片段,通过TOPO克隆技术将该基因片段连接进入载体p ENTR/SD/D,构建了入门克隆载体p EN-ASPV,再通过LR反应置换该片段连接进入目标载体p Hellsgate12,构建了RNAi植物表达载体Phe-ASPV,并采用冻融法转入根癌农杆菌菌株EHA105中,获得了可用于植物遗传转化的工程菌EH-ASPV。采用农杆菌介导的方法转化苹果砧木M26叶盘,经抗生素筛选和脱菌培养获得了Kan抗性芽,进一步进行生根培养后获得了完整的Kan抗性植株,对生根植株提取总RNA后RT-PCR检测结果显示,RNAi表达载体上携带的外源基因片段(489 bp)已成功转入苹果砧木材料M26中,并在转基因植株内RNA水平上得到表达。获得的转基因新材料,为进一步通过病毒接种进行抗病性评价及抗病毒分子育种奠定了基础。 相似文献
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转基因玉米苗期抗旱性鉴定方法、指标与综合评价的探讨 总被引:4,自引:0,他引:4
采用盆栽法,在苗期干旱胁迫下,测定不同转基因玉米在不同水分胁迫下的相对含水量(RWC)、相对电导率(REC)、光合速率(PR)和蒸腾速率(TR)抗旱性指标,以期综合评价4类转基因玉米的抗旱性能和所选指标作为筛选抗旱性指标的可行性。结果表明:RT的抗旱性最强,PK、BC居中,H最弱。同时,相对含水量、光合速率可以作为转基因玉米抗旱性鉴定指标;相对电导率、蒸腾速率为参考指标。 相似文献