牛冠状病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用     

高辉  李晓成  刘莹  袁野  张欣怡  尼博  张慧  段纲  董雅琴  魏荣 《黑龙江畜牧兽医》2022,(6):86-91

为了建立一种敏感、特异的牛冠状病毒(BCoV)实时荧光定量RT-PCR检测方法,试验利用GenBank中BCoV参考毒株N基因序列,设计引物及小沟结合物(MGB)探针,建立实时荧光定量RT-PCR方法,对方法的特异性、灵敏度和稳定性进行检验。利用建立的方法对采集自7个省份31个发病牛场的925份临床样本进行检测,并用基于BCoV N基因的普通RT-PCR结合测序的方法对部分阳性样品进行验证。结果表明：建立的实时荧光定量RT-PCR方法的扩增体系为上下游引物(10μmol/L)各1μL,探针(10μmol/L)0.8μL,2×One Step RT-PCR BufferⅢ10μL,Ex Taq HS (5 U/μL) 0.4μL,Prime Script RT Enzyme MixⅡ0.4μL,总RNA 2μL,ddH₂O 4.4μL;扩增程序为,42℃5 min; 95℃10 s; 95℃5 s, 55℃35 s, 40个循环。标准曲线方程为y=40.979-3.512x,可信度(R²)为0.999,扩增效率(E)为92.6%,最低检测限为4...  相似文献   

鉴别犬瘟热病毒野毒株与疫苗株双重一步法RT-PCR检测方法的建立与应用     

梅胜尧  张玉堂  张逸民  孙宝海  刘晶 《黑龙江畜牧兽医》2022,(8):75-81

为了建立一种简单、快速鉴别检测犬瘟热病毒(CDV)野毒株与疫苗株的方法,试验根据GenBank中CDV野毒株与疫苗株H基因序列设计鉴别检测引物,建立鉴别CDV野毒株与疫苗株一步法RT-PCR,并验证该方法的特异性、敏感性、重复性及符合性;利用建立的鉴别CDV野毒株与疫苗株双重一步法RT-PCR检测方法对2017—2020年采集于江苏省11个不同地市的505份发病犬喉拭子样品和病料样品进行检测,确定CDV野毒株与疫苗株双重一步法RT-PCR的临床适用性。结果表明：该方法对CDV野毒株、CDV疫苗株、CDV野毒株/疫苗株可分别扩增出477 bp、677 bp、477 bp/677 bp的特异性条带,而检测犬细小病毒(CPV)、犬腺病毒(CAV)、犬副流感病毒(CPIV)、犬冠状病毒(CCV)均为阴性;该方法的检测灵敏度为23.1 pg RNA;与RFLP方法的符合率为100%;批内重复性检测和批间重复性检测的结果完全一致;利用该方法检测505份临床样品,CDV野毒株和疫苗株的阳性率分别为8.91%和72.48%。说明建立的鉴别CDV野毒株与疫苗株一步法RT-PCR检测方法具有良好的特异性、...  相似文献   

灰葡萄孢对腐霉利的抗性分子机制及快速检测技术     

郑远  沈瑶  汪汉成  戴德江  沈颖  吴鉴艳  张传清 《农药学学报》2021,23(1):90-96

为明确灰葡萄孢Botrytis cinerea对腐霉利的抗性现状,于2017—2018年采用单孢分离法从浙江省5个地区的草莓大棚共分离获得200个菌株.通过区分剂量法测定了其对腐霉利的抗性,对抗药性菌株的分子机制进行了分析,并根据抗药性分子机制,建立了B.cinerea腐霉利高抗基因型的环介导等温扩增(loop-med...  相似文献   

气象防雷检测工作常见问题及解决措施     

《农业灾害研究》2021,11(4)

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一种杂色曲霉素胶体金免疫快速检测试纸条的研制     

《农产品质量与安全》2021,(5)

通过制备杂色曲霉素半抗原,研制出一种能够检测饲料中杂色曲霉素的胶体金免疫层析试纸条,检测限为1μg/kg,检测时间仅为15 min,假阳性率和假阴性率均为0,符合《农残办技术材料要求及审查程序》要求。试纸条能够在基层实验室的大批量样本检测中得到应用,具有实际意义,并且未见胶体金免疫层析法的相关文献报道,具有创新性。  相似文献   

农业样品中总汞的快速检测技术研究进展     

《农产品质量与安全》2021,(4)

重金属汞是农业环境、食用农产品、肥料、饲料等农业样品监测的重要污染物对象。传统的实验室分析方法通常需要复杂的样品前处理,耗时、费力,极易造成汞的损失,因而无法满足农业样品中汞的快速检测需求。本文对总汞的现有快速检测手段进行了综述,包括电热蒸发技术、激光和微等离子体技术、 X射线分析技术、碘化亚铜化学反应显色技术、电化学技术、纳米技术、生物传感和免疫技术等,并对这些测汞技术在农业样品检测方面的进一步发展进行了展望。  相似文献   

猪瘟病毒与非洲猪瘟病毒双重荧光定量PCR方法的建立与应用     

刘婉宁  李世念  倪民婷  苏霖  师庆伟  王金涛 《黑龙江畜牧兽医》2022,(19):80-85

为了建立能够猪瘟病毒(Classical swine fever virus, CSFV)和非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)双重荧光定量PCR方法,试验比对了CSFV与ASFV的基因组序列,针对CSFV 5′-UTR和ASFV B646L保守靶序列,分别设计2条特异性引物及1条TaqMan探针,通过优化扩增体系和程序,建立可同时检测CSFV和ASFV的双重荧光定量PCR方法,并建立该方法的标准曲线,同时用敏感性试验、特异性试验和重复性试验对该方法进行评价,最后检验该方法的应用效果。结果表明：CSFV和ASFV标准曲线的相关系数(R²)分别为0.999和1,线性关系良好;CSFV与ASFV的最低检测浓度分别为1.3×10⁰ copies/μL和2.4×10⁰ copies/μL;与其他常见猪只病原检测无交叉反应;批间与批内变异系数均小于2%,稳定性良好。试验建立的方法对44份临床样本的检测结果与《猪瘟病毒实时荧光RT-PCR检测方法》(GB/T 27540—2011)和《非洲猪...  相似文献   

DNA分子标记在甘薯遗传育种中的应用     

张超凡  黄艳岚  周虹 《湖南农业科学》2007,(6):39-43

DNA分子标记是继形态标记、细胞标记和生化标记之后发展起来的一种新的较为理想的遗传标记,在甘薯育种方面发挥了重要作用。主要概述了分子标记在甘薯的起源、进化与分类、图谱构建、遗传多样性分析、品种鉴定、基因定位与辅助育种等方面的研究进展,并对甘薯的分子育种提出了展望。  相似文献   

马铃薯块茎淀粉组分高效检测体系的建立及应用     

宋玉浩  史伟玲  张娇  丁振宇  彭洪娴  蒋春燕  马秋芹  李芝静  赵勇  唐道彬  张凯  王季春  刘勋 《园艺学报》2021,(3):600-608

马铃薯块茎淀粉组分(直链/支链淀粉比AM/AP)影响淀粉特性以及决定其在食品和其他工业上的应用.AM/AP的测定对其合理利用以及选育特异淀粉组分的专用品种等具有重要意义.采用96孔板双波长法对马铃薯不同AM/AP比率标准样品进行测试,发现当测试样品AM/AP比率超过制作标准曲线的AM/AP比率(33.3％)时,测试结果...  相似文献   

二氧化硅生物荧光纳米颗粒的制备与应用     

谢文刚 《湖南农业大学学报(自然科学版)》2007,33(4):496-499

以荧光染料(联吡啶钌配合物)为核,二氧化硅为外壳制备了荧光纳米颗粒.电镜检测结果显示,合成的二氧化硅纳米颗粒粒径为(20±3)nm,分布均匀,形态规则.对荧光纳米颗粒进行生物修饰得到荧光探针,以DNA碱基配对原则为基础建立检测DNA的方法,利用激光扫描共聚焦显微镜研究玻片上的荧光信号和荧光强度.结果表明,该方法不仅可定量检测到4.4×10-8 mol/L的目标DNA3,而且可定性检测目标DNA3、单碱基错配DNA4及随机序列DNA5,为发展DNA检测技术提供了新的思路.  相似文献