吡咯伯克霍尔德氏菌JK-SH007产嗜铁素的相关基因克隆及条件优化          下载免费PDF全文

陈艳彬  韩燕燕  王斐  叶建仁  任嘉红 《中国生物防治学报》2019,35(4):630-641

为了明确吡咯伯克霍尔德氏菌Burkholderia Pyrrocinia JK-SH007是否产嗜铁素,揭示其生防机制,本文通过CAS检测该菌株产嗜铁素的能力,并对其嗜铁素合成相关基因cepR进行克隆及序列分析,同时采用单因素试验及响应面法对菌株JK-SH007产嗜铁素条件进行优化。结果表明,菌株JK-SH007具有明显的产嗜铁素能力,其嗜铁素合成相关基因cepR大小为720 bp,与B.pyrrocinia（EU034001）的亲缘关系最近,同源性为99%,两者序列相似性为97%,13个位点出现SNP;另外菌株JK-SH007 cepR基因编码的氨基酸序列有3个氨基酸发生了替换,两者一致性为97%。该菌产嗜铁素最优培养时间是15 h、pH 8、转速200 r/min、最佳碳源和氮源分别是甘油和氯化铵;PB试验筛选出影响该菌株产嗜铁素的关键性因素分别是pH、加碳量、加氮量;CCD试验结果显示,pH和加氮量的交互作用较明显;最终采用Design-Expert软件分析出菌株JK-SH007产嗜铁素最佳方案为碳源加入量15.00 g/L、氮源加入量10.50 g/L、温度30℃、pH 7.36,优化后菌株产嗜铁素能力由18.59提升到37.86,响应面优化产嗜铁素条件的效果是显著的,嗜铁素产量得到明显提高。  相似文献   

苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白Cry1D新基因的克隆与特性          下载免费PDF全文

余宗兰  贺利业  孙宏伟  李平  郑爱萍 《中国生物防治学报》2019,35(2):288-294

为扩充鳞翅目害虫杀虫基因资源,本研究从苏云金芽胞杆菌BN23-5中克隆得到一个新的cry基因,并对其进行鉴定和分析。该基因为一个完整的cry1D基因,全长3501 bp,编码1166个氨基酸残基。该氨基酸序列是一个新的Cry氨基酸序列,与Cry1Db1的同源性最高,为86%,命名为Cry1Dd1（登录号为KJ728844）。将该基因插入穿梭表达载体pSTK中,转入BT无晶体突变株HD73^-中进行表达。结果表明,cry1Dd1基因能在BT无晶体突变株中表达,并形成菱形伴孢晶体。SDS-PAGE验证其分子量为132.2 kD,与预测的大小相符。生物活性测定表明,Cry1Dd1晶体蛋白对小菜蛾的幼虫具有杀虫活性,LC₅₀为13.1 μg/mL;能明显抑制甜菜夜蛾幼虫的生长;但对棉铃虫幼虫没有杀虫活性。对cry1Dd1基因序列进行分析,cry1Dd1包含8个block保守区域,这和目前其他的cry基因相似;Cry1Dd1蛋白的活性区域为N端的37~593位氨基酸残基。  相似文献   

柑橘胼胝质合成酶基因家族的表达分析     

彭蕴  范海芳  雷天刚  何永睿  陈善春  姚利晓 《园艺学报》2019,46(2):330-336

胼胝质由胼胝质合成酶合成,胼胝质沉积是植物对入侵病原的防御反应。为了探索胼胝质合成酶(Callose synthase,CalS)基因在柑橘中对黄龙病的应答情况,从甜橙基因组中筛选并利用生物信息学分析了柑橘胼胝质合成酶(CsCalS)家族的12个基因。这些基因编码的氨基酸序列与拟南芥中的胼胝质合成酶具有较高的同源性。荧光实时定量PCR结果显示,CsCalS5和CsCalS12在柑橘健康叶片中的表达量高于其他胼胝质合成酶基因。比较黄龙病感病材料和健康对照材料,发现CsCalS5、CsCalS7和CsCalS8在感病的‘砂糖橘’和‘强德勒’柚中均上调表达,可能参与柑橘对黄龙病病原的应答反应。  相似文献   

利用CRISPR/Cas9敲除葡萄VviPDS1基因的研究     

郭晔  万东艳  柴壮壮  王跃进  文颖强 《园艺学报》2019,46(4):623-634

选择葡萄八氢番茄红素脱氢酶(Phytoene desaturase)基因VviPDS1为靶标,利用CRISPR/Cas9系统构建基因敲除载体,瞬时转化葡萄叶片原生质体,检测到不同类型的突变。通过农杆菌介导转化‘无核白’葡萄胚性愈伤组织,筛选获得卡那霉素抗性植株71株。经PCR鉴定,其中53株为阳性植株,阳性率为74.64%。测序结果表明,共有20株在靶点发生不同类型的突变,编辑效率为37.74%;其中9株产生了双等位基因突变。对其进行氨基酸序列预测,在第202位氨基酸之后发生了不同程度的变异。利用CRISPR/Cas9系统敲除VviPDS1获得的突变体植株呈现整体矮化,其叶片出现不同程度白化。表明CRISPR/Cas9系统可以通过细胞中的瞬时或稳定表达进行基因编辑,可以实现在葡萄编辑植株中产生纯合敲除。  相似文献   

基于家族基因分析的甘蓝MLPK互作PUB蛋白的筛选     

高启国  雷镇泽  梁云飞  姜宇鹏  朱利泉 《园艺学报》2019,46(4):714-722

MLPK(M–位点受体激酶)是芸薹属自交不亲和正向调控关键元件,其参与自交不亲和信号传导的分子机制尚不明确,同时自交不亲和下游信号元件也有待于进一步分离。为了探索分离MLPK互作蛋白的思路和方法,构建了不含核定位信号的MLPK短截蛋白(MLPK-T),并利用酵母双杂交检测到MLPK与臂重复蛋白1(ARC1)作用,通过全基因组鉴定分别获得了96个甘蓝、101个白菜、70个琴叶拟南芥和62个拟南芥PUB蛋白,其中含有臂重复序列的PUB蛋白共为127个。通过系统进化分析,筛选到8个含臂重复序列的甘蓝BoPUB蛋白,其8个基因全部在柱头内表达,且成功利用酵母双杂交检测到MLPK与3个含臂重复序列的BoPUB蛋白Bol008579、Bol016165和Bol023511相互作用。  相似文献   

“黄瓜基因组和重要农艺性状基因研究”成果获国家自然科学奖二等奖     

中国农业科学院蔬菜花卉研究所 《中国蔬菜》2019,(2):28-28

中国农业科学院蔬菜花卉研究所黄三文等以黄瓜为研究对象,通过破译黄瓜基因密码为突破口,开创了从“基因组到新品种”的新道路,成功地培育了无苦味的美味黄瓜新品种。  相似文献   

AaMcm1基因调控链格孢菌丝生长的转录组初步分析     

李珊珊  毛胜洁  刘琛  徐后娟  张丽 《山东农业科学》2021,(6):1-9

MADS box转录因子是生物体中重要的结合型转录因子,属于SRF型的Mcm1基因已被证实在多种真菌中发挥重要作用.本课题组前期对链格孢菌中的AaMcm1基因进行敲除,得到了生长速度严重下降的突变体,通过对该突变体及野生菌进行转录组研究,发现有1917个基因表达上调,1322个基因表达下调,GO分析表明上调基因参与了4...  相似文献   

肌纤维以及MYOZ1基因对肉质性状影响的研究进展     

周婷婷  吴义景  梁文双  严丹  田慧月  常国斌  王志秀 《中国家禽》2022,(8):104-109

随着当今膳食结构的优化,消费者更加青睐高蛋白、低脂肪、低胆固醇的绿色营养畜禽肉制品。畜禽的肌肉生长性状是影响产肉力等经济性状的重要因素之一,肌肉的生长和发育是决定畜禽胴体和肌肉重量的核心,肌纤维作为构成肌肉的基本单位,其种类、数量、伸展性等特性与肉品质紧密相关。MYOZ1基因是影响畜禽肉质性状的潜在候选基因,它通过参与Ca²⁺信号转导途径和调控Calcineurin/NFAT信号通路,从而对骨骼肌组织的发育、再生,以及骨骼肌纤维类型的转化等过程产生显著影响。文章综述了与肌纤维类型、MYOZ1基因生物学特性以及该基因表达对肌纤维的调控等研究进展,从而为更深层次地探究MYOZ1基因对肉质性状的影响提供参考。  相似文献   

科技     

《中国畜牧业》2021,(1):12-13

牧医所发现猪克隆胚胎发育关键候选基因近日,中国农业科学院北京畜牧兽医研究所动物基因工程与种质创新团队研究发现与猪体细胞克隆胚胎初次分裂时间相关的关键候选基因,为提高猪克隆胚胎的发育效率、解析体细胞克隆机制提供了理论基础。相关研究成果在线发表在《基因(Genes)》上。  相似文献   

溶血性曼氏杆菌PlpE基因原核表达及间接ELISA方法的建立     

张智  刘泽  杜宇  乌吉斯古楞  刘重阳  宋庆庆  关平原  任旭荣 《黑龙江畜牧兽医》2022,(2):79-84

为了建立一种能够方便、高效检测溶血性曼氏杆菌(Mannheimia haemolytica)的方法,试验将溶血性曼氏杆菌重组质粒pET-32a-PlpE转化至BL21(DE3)感受态细胞,然后经IPTG诱导表达并纯化。以重组蛋白PlpE为包被抗原,通过优化抗原最佳包被浓度、一抗及二抗最佳稀释度、最佳反应时间和最佳显色时间等试验条件,建立了检测PlpE抗体的间接ELISA方法。结果表明:重组质粒pET-32a-PlpE转化至感受态细胞BL21(DE3)后利用IPTG诱导,重组蛋白主要在沉淀中大量表达,经包涵体纯化试剂盒纯化后获得纯度较高的目的蛋白。重组蛋白PlpE具有良好的反应性,且蛋白大小符合预期。确定的检测条件为抗原包被浓度2μg/mL,一抗稀释度1∶300,酶标二抗稀释度1∶80 000,反应时间45 min,一抗反应时间30 min,显色时间15 min。用该方法检出溶血性曼氏杆菌阳性血清的最低效价可达1∶1 280,检测牛病毒性腹泻病毒阳性血清、牛传染性鼻气管炎病毒阳性血清、口蹄疫病毒阳性血清、副结核分枝杆菌阳性血清、布鲁氏杆菌阳性血清,结果均为阴性;批内重复性试验和批间重复性...  相似文献