猪IL-18基因的原核表达及重组蛋白的纯化     

裴仉福陈瑞爱  温纳相唐秀英唐满华  朱文冠李琳 程含波 《中国兽医科技》2006,36(10):842-846

以pcDNA3．1-pIL-18为模板，采用PCR技术扩增到了猪白细胞介素18（IL-18）的成熟蛋白基因，通过KpnⅠ＋SacⅠ双酶切及连接反应，构建了pET32c—pIL—18原核表达质粒。经过限制性内切酶分析、PCR鉴定及DNA序列测定证实，重组质粒中的基因片段连接正确。之后，重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3），于37℃、1．0mmol／L IPTG条件下诱导表达。菌体裂解产物经SDS—PAGE分析，在分子质量约为33ku处出现了预期的目的蛋白。用8mol／L脲对表达产物变性，经Ni^2＋NTA柱纯化，透析复性，得到了纯化的IL-18蛋白。Western—blot分析证实，纯化的重组IL-18蛋白具有反应活性。上述研究结果为重组IL-18的应用奠定了基础。  相似文献   

猪ERK6基因编码区的克隆及组织表达谱分析     

曾瑞霞苏玉虹  巴彩凤朱宝芹宋慧娟  刘东鑫 《中国兽医科技》2006,36(11):910-914

利用RT-PCR方法扩增了猪ERK6基因编码区的序列，将扩增产物与pMD18-T载体连接，构建了重组质粒；重组质粒经PCR、酶切鉴定后进行测序；采用Northern杂交和半定量RT-PCR方法在猪不同部位骨骼肌中分析了ERK6基因转录本的个数、大小及组织表达谱。结果显示，所克隆的猪ERK6基因片段长1113bp，含有1个1104bp的开放阅读框（ORF），该ORF编码367个氨基酸；该基因与已报道的人ERK6基因核苷酸序列相似性为90％；猪ERK6基因在肌肉组织中只有一个转录本，大小约1．5kb。此基因在骨骼肌中的表达量最高，心、子宫次之，卵巢最低；而在脂肪、胃、肝、脾、肺、肾、十二指肠和胰腺中未见表达。结果表明，猪ERK6基因与已报道的小鼠和人ERK6基因一样，主要在骨骼中特异表达。  相似文献   

鸡毒霉形体H3株TM-1基因与鸡白细胞介素2基因串联子在大肠杆菌中的共表达     

郭志刚郝永清  张爱荣 《中国兽医科技》2006,36(12):967-971

运用DNA重组技术将鸡白细胞介素2基因和鸡毒霉形体H3株TM-1基因进行串联,插入到pET-30a（＋）质粒的EcoRⅠ和HindⅢ多克隆位点间,经PCR鉴定、双酶切鉴定和序列测定,表明已成功构建了含鸡毒霉形体H3株TM-1基因和鸡白细胞介素2基因的融合基因,将含有此融合基因的重组质粒命名为pET-30a（＋）-TM-1-IL-2.将此重组质粒转化E.coli BL21（DE3）菌株.经IPTG 37℃诱导表达4 h后,SDS-PAGE电泳结果显示,此融合基因得到了表达,所表达出的融合蛋白的分子质量约为43 ku,主要以包涵体形式存在.表达产物在尿素存在下经超声波处理,获得了纯化的融合蛋白.这为进一步研究鸡白细胞介素2及鸡毒霉形体的生物学活性奠定了基础.  相似文献   

亚洲璃眼蜱唾液腺-新基因（GP29）的原核表达及产物鉴定     

程天印周金林  周勇志施启顺 林矫矫 《畜牧兽医学报》2006,37(11):1194-1197

将吸血诱导的亚洲璃眼蜱唾液腺差异表达基因GP29的开放性阅读框插入pGEX-4T-1，转化BL21，表达出一相对质量为53ku的蛋白，其大小与预计结果一致。蛋白质的肽质量图谱和“1381．7511”肽段序列两方面的结果证明，SDS-PAGE胶板上相对质量为53ku的蛋白就是由目的基因表达的GST融合蛋白。该蛋白与Swiss PROT库中的任何蛋白均有较大差别，可能是一个新功能分子。  相似文献   

禽用基因疫苗的研究进展   总被引：1，自引：0，他引：1  

张玉梅史宪伟  李福泉李春凤朱学农  谢顺利黄英 《中国禽业导刊》2006,23(1):48-49

基因疫苗(genetic vaccine)又称核酸疫苗(nucleicacid vaccine)、DNA疫苗(D NA vaccine),是将带有目的编码蛋白抗原基因的真核重组表达载体直接注射到动物机体中,使外源基因在活体细胞内表达,诱导机体产生抗体并引起特异性的免疫应答,达到顶防和治疗传染病的目的。它包括D NA疫  相似文献   

鸡白痢沙门菌等位基因特异性PCR检测方法的建立     

耿士忠潘志明  蒋春红张辉李求春  焦新安 《中国兽医科技》2007,37(2):113-116

根据鸡白痢沙门菌与鸡伤寒沙门菌的rfbS基因在第237和第598位碱基的不同，设计和合成了等位基因特异性PCR引物，建立了快速检测鸡白痢沙门菌的PCR方法，并应用该方法对鸡白痢沙门菌临床分离样品进行了PCR鉴定。结果显示，该PCR方法能够特异性地鉴定鸡白痢沙门菌，检测灵敏度达100PgDNA。对35个经常规方法鉴定的鸡白痢沙门菌分离株应用等位基因特异性PCR方法进行鉴定，鉴定出33株鸡白痢沙门菌，符合率为94．3％。表明，建立的等位基因特异性PCR方法能够准确而快速地鉴定鸡白痢沙门菌。  相似文献   

番鸭呼肠孤病毒S基因组的克隆与序列分析     

耿宏伟  郭东春刘明  胡奇林张云 《中国兽医科技》2007,37(4):305-311

对番鸭呼肠孤病毒S12和S14毒株S基因组（S1-4）中σA、σB、σNS和σC蛋白基因进行了克隆和测序。序列分析表明：鸭呼肠孤病毒（DRV）与禽呼肠孤病毒（ARV）的σA和σNS基因的核苷酸同源性分别为76．0％～77．1％和78．4％～79．6％，氨基酸同源性分别为89．5％～91．2％和91.6％～92．7％；而具有诱导群特异性和型特异性中和抗体的σB和σC基因的核苷酸同源性分别为60．3％～64．4%和2．7%～9．9％，氨基酸同源性分别为61．4％～62．0％和22．6％～26．7％；DRV和ARV抗原性存在差异。而DRVS12／S14与法国89026株σA、σB、σNS和σC基因的核苷酸同源性分别为90．0％、93．6％、87．9％～88．0％和93．1%，氨基酸同源性分别为97．1%、94．3%、95．7%～95．9%和93．7％。进化树分析表明，DRV与ARV形成不同的分支，DRV是正呼肠孤病毒属中不同于ARV的一种新的呼肠孤病毒。  相似文献   

HSN1亚型禽流感病毒NA基因在重组禽痘病毒中的表达及其产物的免疫原性     

王全英乔传玲  张洪波吴运谱田国彬  陈化兰 《中国兽医科技》2007,37(4):312-315

将禽流感病毒A／Goose／Guangdong／1／96（H5N1）株的NA基因及LacZ报告基因克隆到禽痘病毒载体pSY681中，构建重组转移载体pSY（NA＋LacZ），将其转染鸡胚成纤维细胞，经蓝白斑筛选，纯化表达NA基因的重组禽痘病毒rFPV-NA，用其免疫SPF鸡，检测该重组禽痘病毒的免疫原性。结果显示，该重组禽痘病毒能够在体外培养细胞内表达具有生物学活性的NA蛋白，表达产物的分子质量约为55ku；用该重组禽痘病毒免疫SPF鸡后，能够使免疫鸡获得对H5N1和H7N1两种亚型HPAIV攻击的部分保护。表明，重组禽痘病毒rFPV—NA具有良好的免疫原性。  相似文献   

本地毛形线虫HSP70基因的克隆与序列分析     

袁金钱路义鑫  韩彩霞宋铭忻 《中国兽医科技》2007,37(12):1062-1065

根据GenBank中已发表的布氏旋毛虫HSP70基因序列设计了1对引物，用Trizol法从本地毛形线虫肌幼虫虫体中提取总RNA，用RT-PCR方法扩增了HSP70基因，将目的基因克隆至pMD18-T载体，转化大肠杆菌DH5α。重组质粒用PCR、限制性内切酶BarnHⅠ和HindⅢ进行单、双酶切鉴定。测序结果表明，成功克隆了本地毛形线虫HSP70基因。序列分析表明，HSP70基因比较保守，不同物种之间氨基酸的同源性在40％～80％。与布氏旋毛虫HSP70序列相比，CDS区多出9个碱基，但核苷酸序列和氨基酸同源性分别为98%和94％，存在1个糖基化位点和1个潜在的信号肽位点。  相似文献   

影响猪采食量的因素   总被引：3，自引：0，他引：3  

郭慧慧  刘岐  王立贤  程笃学 《中国畜牧兽医》2007,34(12):17-21

随着猪生产性能的提高，猪的采食量成为限制生产性能的主要因素之一，猪的采食量直接影响遗传潜力的发挥和生产效益，因此，受到养猪者和研究人员的重视。影响猪采食量的因素很多，包括环境、饲料、健康、遗传特性等，从生理上讲，它主要由下丘脑的摄食中枢和饱中枢控制，下丘脑通过各种调节因子对食欲进行着精细的调节，而且这些调控因子之间存在着交互作用。作者主要对猪群采食量调节机制、影响猪采食量的因素及调控猪采食量的基因研究进展做一综述。  相似文献