绵羊精子RNA提取方案的优化     

任秀美奥  姚旭东  蒙亚琦  郭延华  唐红  张译元  王立民  周平 《黑龙江畜牧兽医》2022,(18):62-67+141

为了减少绵羊精液中其他体细胞污染和裂解不充分等因素而导致精子RNA回收率低、质量差的问题,试验以新鲜的美利奴羊精液为研究对象,采用Percoll+hSOF和Percoll+PBS密度梯度离心法和PBS直接洗涤法纯化绵羊精液,然后再采用TRIzol(65℃)法和TRIzol(65℃)+试剂盒法提取绵羊精子RNA,检测RNA的浓度、纯度和完整性,将RNA反转录为cDNA,PCR扩增PRM1基因(编码鱼精蛋白1)和CDH1基因(编码上皮细胞钙黏蛋白),验证所提取的RNA是否受体细胞RNA和基因组污染。结果表明：用Percoll密度梯度法纯化绵羊精液较PBS直接洗涤法能更好地去除精液中的体细胞,但精子回收率低。Percoll+PBS密度梯度离心法纯化后精子提取的RNA较PBS直接洗涤法纯度较高,但浓度较低;TRIzol(65℃)法提取的精子RNA较TRIzol(65℃)+试剂盒法浓度较高,但纯度较低。两种精液纯化方法(Percoll+PBS密度梯度离心法和PBS直接洗涤法)结合两种精子RNA提取方法[TRIzol(65℃)法和TRIzol(65℃)+试剂盒法]获得的精子RNA均能检测到PRM1...  相似文献   

高能湿法球磨制备鱼胶原肽螯合钙及其理化特征     

彭玲  丛林  熊善柏  尹涛  尤娟  胡杨 《水产学报》2021,45(7):1151-1161

为了拓展胶原肽螯合钙的制备工艺,以鱼胶原肽和CaCl2为原料,以高能湿法球磨的方法制备了鱼胶原肽螯合钙,并采用FT-IR红外图谱、X-衍射、EDS能谱等技术手段对其理化特性和结构进行分析。结果显示,随着球磨时间从15 min延长到240 min,鱼胶原肽的平均粒径逐渐降低,ZETA电位绝对值、分子量和pH值逐渐增加,鱼胶原肽对钙的螯合率逐渐从74.21%增加到85.42%。鱼胶原肽螯合钙与鱼胶原肽的主体化学结构相似,但是球磨后鱼胶原肽的-COO-1 VAS吸收峰(1 643.89 cm~(-1))向短波数方向移动到1 540～1 555 cm~(-1),而-NH2的特征吸收峰(3 313.9 cm~(-1))向长波数方向移动到3 337.12～3 380.59 cm~(-1)。球磨后鱼胶原在2θ=20°处的特征宽吸收峰消失,而在2θ=26、28、48和58°处出现多个尖峰和弥散峰,表明其从无定形结构向兼具结晶和无定形结构转变。鱼胶原肽螯合钙中钙元素比例逐渐增加,证实鱼胶原肽对钙的螯合率增加。研究表明,高能湿法球磨可应用于鱼胶原肽螯合钙的制备,该方法具有加工工艺简单、无污染和螯合率高等优点。  相似文献   

植酸酶在水产饲料中的应用   总被引：1，自引：0，他引：1  

刘兴旺  张璐 《齐鲁渔业》2006,23(10):34-34

水生动物消化系统缺乏植酸酶,所以对饲料原料中以六磷酸肌醇钙镁盐形式存在的磷(植酸磷)不能利用(NRC,1993)。另外,植酸还会与饲料中的铁、锌、镁、锰等形成复杂难溶的植酸盐复合物,从而导致这些营养素的生物利用率降低。这严重制约了植物蛋白在水生动物饲料中的添加量。生产中通常要添加含磷矿物质饲料,如各种形式的磷酸盐、骨粉等补充可利用磷的不足,而  相似文献   

花刺参钙调蛋白cDNA克隆及组织分布     

李五湖  任春华  胡超群  江晓  钟鸣 《南方水产》2014,(5)

钙调蛋白（ calmodulin,CaM）是一种钙离子（ Ca2＋）结合蛋白,在钙信号传导过程中起重要作用。文章扩增到花刺参（Stichopus monotuberculatus）钙调蛋白（命名为StmCaM）cDNA全长序列。StmCaM cDNA全长1394 bp,其中5＇UTR长138 bp,3＇UTR长806 bp,ORF为450 bp。ORF推导出的StmCaM含149个氨基酸（包含起始蛋白酸）,其预测分子量约为16.7 kDa,理论等电点为4.1。StmCaM氨基酸序列与其他物种的钙调蛋白高度相似,相似度百分比为95.9%~98.0%。采用realtime PCR分析StmCaM基因在花刺参不同组织中的表达,结果显示其在呼吸树中表达量最高,体腔细胞、肠次之,而体壁中表达量最低,几乎检测不到。  相似文献   

内源钙或磷测定方法的研究进展     

祝晓晏  王康宁  范明哲 《畜禽业》2005,(7):28-30

钙或磷是动物必需的常量矿物元素,但是过量的添加钙或磷会增加饲料成本,同时过量磷的排泄还会造成环境污染问题。钙或磷的真消化率能够反映动物利用钙或磷的真实情况,因此内源钙或磷的测定是测定钙或磷真消化率的前提和基础,而同位素稀释技术、差量法、体外法、梯度回归法等是目前测定内源钙或磷和真消化率的主要方法。  相似文献   

土壤中单宁和植酸降解菌的筛选、鉴定及液态发酵研究     

王晓东  胡海滨  麦康森  张彦娇  徐玮  艾庆辉  张文兵 《水产学报》2016,40(10):1634-1642

为从土壤中筛选能够同时降解单宁和植酸的微生物,本实验利用富集培养技术,分离、筛选、鉴定土壤中的单宁和植酸降解菌,并研究其在液态发酵下的产酶能力。结果显示,从土壤中共获得109株纯菌落,包括39株细菌、46株酵母菌以及24株霉菌。分别用单宁筛选性培养基和植酸筛选性培养基筛选上述菌株,获得27株植酸降解菌和14株单宁降解菌,其中霉菌M-6、M-3和M-1可以同时分解单宁和植酸,且霉菌M-6的水解圈直径大于M-3和M-1。在液态发酵条件下,随着发酵温度的升高(20~35°C),霉菌M-6产单宁酶和植酸酶的活力呈现先升高而后降低的趋势,在发酵温度为30°C时达到最高值(P0.05)。随着发酵p H的升高(p H 4~7),霉菌M-6产单宁酶和植酸酶的活力呈先升高后降低的趋势(P0.05);其中单宁酶活力在发酵p H值为5时达到最高值,显著高于其他处理组(P0.05);而植酸酶活力在发酵p H值为5时达到最高值,显著高于发酵p H 4和7处理组(P0.05),但与发酵p H 6处理组差异不显著(P0.05)。通过菌落和菌株形态学以及分子测序方法,鉴定M-6为黑曲霉。因此,本研究从土壤中分离筛选出3株(M-6、M-3和M-1)能够同时水解单宁和植酸的降解菌,在液态发酵条件下,黑曲霉M-6产单宁酶和植酸酶的最佳发酵温度为30°C,最佳发酵p H值为5。  相似文献   

饲料不同钙磷比对三疣梭子蟹幼蟹生长性能、矿物质沉积和能量代谢的影响     

赵明明  袁野  金敏  罗嘉翔  王学习  胡潇颖  程鑫  时博  焦乐飞  周歧存 《水产学报》2021,45(10):1677-1691

为研究饲料中不同钙磷比对三疣梭子蟹幼蟹生长性能、血清生化、矿物质沉积和能量代谢的影响,配制5种等氮等脂(46%粗蛋白和7%粗脂肪)钙磷比分别为1.00∶2.00、1.00∶1.50、1.00∶1.00、1.00∶0.75和1.00∶0.50的实验饲料。选择初始体质量为(12.82±0.37) g的梭子蟹150只,随机分成5组(每组3个重复,每个重复10只),进行为期8周的养殖实验。结果显示,钙磷比为1.00∶1.00和1.00∶0.75的饲料,其特定生长率(SGR)和饲料效率(FER)显著高于其他组。钙磷比为1.00∶0.50饲料组幼蟹血淋巴的谷草转氨酶(GOT)显著高于其他组,碱性磷酸酶(AKP)和谷丙转氨酶(GPT)活性随着饲料钙磷比的增加呈上升的趋势。幼蟹肝胰腺、肌肉和甲壳中的磷含量随着钙磷比的升高呈下降的趋势,且钙磷比1.00∶2.00组幼蟹磷含量显著高于1.00∶0.50组。钙磷比1.00∶1.50和1.00∶1.00组幼蟹肝胰腺ATP含量显著高于其他饲料组。幼蟹肝胰腺己糖激酶(HK)和琥珀酸脱氢酶(SDH)的活性随饲料钙磷比的升高呈先升高后下降的趋势,当钙磷比为1时,梭子蟹肝胰腺的HK和SDH酶活性最高。此外,钙磷比1.00∶1.00组显著上调了梭子蟹肝胰腺电子传递链相关基因(nd1、sdhc、cytb和coxⅡ)的表达水平,当钙磷比为1.00∶0.75时,显著上调了幼蟹肝胰腺线粒体能量代谢相关基因(ATPase6、sirt3和nrf1)的表达量。研究表明,本实验条件下,以增重率为评价指标,通过回归模型得到梭子蟹最适钙磷比为1.06～1.26,在此范围内能促进三疣梭子蟹幼蟹的生长、维持组织的最适磷沉积以及很好地促进能量的产生。  相似文献   

水体和配合饲料中钙、磷含量对河蟹生长的影响   总被引：9，自引：2，他引：9  

陈立侨  堵南山  赖伟 《淡水渔业》1994,24(1):13-15

水体和配合饲料中钙、磷含量对河蟹生长的影响陈立侨，堵南山，赖伟（上海华东师范大学生物系，上海２０００６２）河蟹一生需经多次蜕壳而不断增长。有研究表明河蟹的顺利蜕壳与其体内和壳中钙、磷积累的数量有关，但尚无有关河蟹对配合饲料和养殖水体中钙、磷需求量的详...  相似文献   

外源钙对马铃薯贮藏品质的影响     

张丽秋  辛建华  李天来 《长江蔬菜》2009,(6)

通过在生育期施不同浓度的钙,研究外源钙对马铃薯贮藏品质的影响.试验结果表明,蔗糖含量的变化受钙影响不大,主要与贮藏初期含量有关.高浓度钙处理的马铃薯果糖和葡萄糖含量明显高于低浓度钙处理和对照.随着贮藏期的延长,中等浓度(0.15%CaCl2)钙处理的马铃薯淀粉含量的增幅最大,差异达显著水平;适量的钙浓度能够使可溶性蛋白质的含量有所提高,不施钙和高浓度的钙不利于维持蛋白质的含量:VC的含量在储藏期间有不同程度的降低,高浓度钙对VC的减少有抑制作用,且差异显著.  相似文献   

分期施肥对‘富士’苹果钙素吸收的影响     

陈锋 《北方果树》2009,(2):56-57

钙作为果树营养必需元素之一,对苹果品质形成具有重要作用。缺钙导致苹果果实生理失调引起多种生理病害发生。如苦痘病、水心病、虎皮病等。通过施肥可以提高苹果果实钙浓度,从而减少病害发生。为了确定苹果钙的吸收利用与施肥时期的关系．以盛果期的‘富士’苹果为试材,比较了相同钙素含量分期施肥的效果。结果表明。春季一次性施肥能够大幅度提高当季土壤总钙和交换性钙、根系及幼果的钙浓度。但后期下降显著;  相似文献