捻转血矛线虫雌、雄成虫galectin基因的克隆、鉴定及序列分析   总被引：4，自引：0，他引：4  

李春华  李祥瑞  魏晓锋  徐立新 《农业生物技术学报》2005,13(1):86-91

根据GenBank中发表的捻转血矛线虫(Haemonchus contortus)雌、雄混合虫体的半乳糖结合凝集素(galectin)基因序列设计1对引物，分别以山羊捻转血矛线虫雌、雄成虫的总RNA为模板，采用RT-PCR技术，均扩增出约880bp的产物。将其分别克隆入pMD18-T载体，经双酶切鉴定、PCR鉴定及DNA序列测定，表明扩增片段为捻转血矛线虫galectin cDNA。经核苷酸序列、氨基酸序列和抗原性比较分析发现，雌、雄成虫的galectin基因存在一定差异，在开放阅读框内二者有3个核苷酸的差异，2个氨基酸的差异。与已发表的其它galectin相比，雌、雄成虫的galectin与Hco-ga1-3b的同源性最高。二级结构及蛋白质特性预测分析发现，雌、雄成虫的galectin均具有α螺旋、β折叠和β转角，雌虫的galectin蛋白比雄虫的分别多出一个α螺旋和β折叠区。二者的亲水性存在一定差异，但抗原性几乎无差异，且抗原表位比较集中。如同其它galectin一样，在雌、雄成虫的galectin蛋白的N末端不存在信号肽序列。  相似文献   

利用AFLP指纹技术鉴定桑树品种     

丁农  钟伯雄  张金卫  吴卫成  赵丽华  周丽 《农业生物技术学报》2005,13(1):119-120

传统的桑树品种鉴定是以形态学标记为依据，大多数性状易受环境条件的影响，而且，形态学性状常常局限于某一生命时期，给品种鉴定造成了一定的限制。AFLP分析的基本原理是选择性扩增基因组DNA酶切片段。由于不同基因组DNA的酶切位点存在差异，因而产生了扩增片段长度的多态性(Vos et al．，1995)。它既有RFLP的可靠性，又有RAPD的方便性，  相似文献   

甘蓝型油菜柱头特异启动子的克隆和序列分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

柯丽萍  郑滔  吴学龙  陈锦清  祝水金 《农业生物技术学报》2007,15(2):257-262

芸薹属自交不亲和相关基因SLR1只在柱头中特异表达，根据已知的SLR1基因启动子序列设计特异引物，用PCR法从几个甘蓝型油菜品种和品系中分离得到相应的启动子片断，进行序列比较分析后，并构建它们与GFP融合的植物表达载体，转化拟南芥，验证所分离到的启动子的时空特异性。研究表明，来自自交不亲和羽衣甘蓝和来自自交亲和的甘蓝型油菜的SLR1启动子具有相似的序列结构和相同的组织特异表达功能。该结果将为下一步研究S-locus基因在甘蓝型油菜中的表达和相互作用奠定基础。  相似文献   

小菜蛾类钙粘蛋白cDNA片段的克隆和序列分析     

杨峰山  张友军  张文吉  吴青君  徐宝云  邱德文 《农业生物技术学报》2005,13(3):396-397

鳞翅目昆虫中肠刷状缘膜囊泡（brush border membrane vesicles，BBMV）有两类能与Cryl毒素结合的受体蛋白，一类是氨基肽酶N（APN），另一类是类钙粘蛋白（cadherin-like protein）。Gahan等（2001）报道了烟芽夜蛾中肠类钙粘蛋白基因失活导致了烟芽夜蛾（Heliothis viresce）对Bt毒素CrylA产生了高抗性，引起了各国科研人员的关注。近年来，先后有多种昆虫类钙粘蛋白基因被克隆和测序（Gahan et al．，2001：Morin et al．，2003）。  相似文献   

陆地棉异质型ACCase基因的种子特异表达载体构建与遗传转化   总被引：3，自引：0，他引：3  

刘正杰  张园  王彦霞  李朋波  苏莹  张曦  王玉美  华金平 《分子植物育种》2011,9(3):270-277

异质型ACCase催化乙酞CoA形成丙二酞辅酶A是植物脂肪酸合成途径中的第一个关键的步骤,也是限速步骤:植物体内过量表达ACCase能够增加脂肪酸合成的底物,有可能导致植株种子含油量的增加.本实验采用GUS基因瞬时表达检测棉花愈伤组织中种子特异性表达启动子AGP的活性;利用RT-PCR扩增,克隆了陆地棉异质型ACCas...  相似文献   

鸡痘病毒基因组DNA复制非必需片段的鉴定   总被引：1，自引：0，他引：1  

彭大新  王志亮  张如宽  文其乙  刘秀梵 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》1995,(4)

将中国鸡痘病毒鹌鹑化弱毒株（２８２Ｅ４）蚀斑纯化，在ＳＰＦ鸡胚成纤维细胞上增殖后，经超声波裂解，蔗糖梯度离心得到纯化病毒，以蛋白酶Ｋ消化，酚：氯仿、氯仿和水饱和乙醚抽捉，乙醇沉淀，得到ＦＰＶ基因组ＤＮＡ，后用ＥｃｏＲｌ消化，随机克隆到ｐＵＣ１８质粒中。限制性内切酶片段电泳分析结果表明，克隆到１０个不同大小的片段，根据酶切图谱分析，选取克隆或亚克隆后的单一酶切位点，插入标记基因（Ｐ１１一ＩａｃＤ筛选出３个复制非必需片段。为进一步构建表达外源片段重组质粒载体创造了良好的条件。  相似文献   

香蕉果实expansin cDNA克隆及序列分析   总被引：6，自引：0，他引：6  

陆旺金 《华南农业大学学报》2003,24(3):40-42

提取成熟香蕉果肉的RNA并分离mRNA，以mRNA反转录合成cDNA，以该cDNA为模板，设计expansin的简并引物，进行RT-PCR(退火温度为50℃)，得到的扩增产物纯化后与pGEM-T-Easy载体连接，转化大肠杆菌，任意挑选2个阳性克隆，进行序列分析，结果得到2个序列相同的expansin的cDNA基因片段，命名为MA-Exp3(以示与已登录的香蕉MA-Expl和MA-Exp2的区别)，MA-Exp3中存在expansin基因的保守区域，即8个半胱氨酸残基和3个色氨酸残基，它编码177个氨基酸，与MA-Exp1的核苷酸同源性为74．2％，氨基酸同源性为86．4％。  相似文献   

亚麻抗锈病近等基因系RAPD特异指纹带的克隆分析   总被引：7，自引：0，他引：7  

王世全  薄天岳  樊晓燕  李平  叶华智  朱立煌 《西南农业学报》2002,15(3):82-84

通过随机扩增多态性DNA对6个亚麻抗锈病近等基因系进行分析，获得了2个稳定的特异指纹带，成功地将这2个特异指纹带克隆入质粒载体，并对它们进行了序列测定，获得了2条亚麻抗锈病近等基因系RAPD特异指纹带的DNA序列。  相似文献   

重庆地区柑桔衰退病毒组群分析     

周彦  王雪峰  唐科志  周常勇 《西南大学学报》2004,26(4)

柑桔衰退病毒(CTV)存在着许多生物学特性不同的株系.通过铲除感染强毒株植株或利用弱毒株交叉保护的方式来防治柑桔衰退痛都需要对CTV株系进行准确、可靠的鉴定.根据对CTV衣壳蛋白基因(CPGs)的限制性片段长度多态性(RFLP)和单链构象多态性(ssCP)分析,发现在重庆地区CTV主要以CP/Hinf I RFLP第1,3和6组群为主,并且在田间以多株系混合感染为主.  相似文献   

甘蓝型油菜籽粒RNA提取方法的探讨   总被引：1，自引：0，他引：1  

许本波  谢伶俐  严寒  何勇  田志宏 《黑龙江农业科学》2007,(5):18-20

用CTAB法、SDS法、上海华瞬植物叶RNA抽提试剂盒分别提取甘蓝型油菜花后40 d的籽粒RNA.用电泳法和A260/A280与A260/A280的比值比较提取RNA的质量.结果发现:用SDS法、上海华瞬植物叶RNA抽提试剂盒都没有成功提取RNA,只有CTAB法成功地提取出了完整的甘蓝型油菜籽粒RNA.用CTAB法提取的总RNA的A260/A230与A260/A280的值分别为2.06和1.94,说明采用该方法提取的RNA污染小,纯度较高,获得的RNA产量也较高.通过逆转录实验和基因片段的克隆也证明获得的RNA质量比较高,可以直接满足一般的分子实验.  相似文献