猪繁殖与呼吸综合征、猪圆环病复合PCR诊断方法的建立及应用   总被引：5，自引：0，他引：5  

周海范  夏平安  崔保安  张红英  胡梅  党占国 《河南农业科学》2007,(1):106-109

根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲型标准株(ATCC VR-2332)的部分ORF6及ORF7保守序列和已发表的猪圆环病毒株PCV-2(DQ195679)的ORF-2基因保守序列,设计合成了2对特异引物,分别扩增出大小为426 bp和631 bp特异性基因片段,通过优化RT-PCR和PCR条件,最终建立了可同时检测PRRSV和PCV-2的复合PCR诊断方法。应用此方法分别对河南省不同地区送检的15头份病、死猪的血清、淋巴结、肺、肝等组织进行检测,结果8头份PRRSV阳性,5头份PCV-2阳性,其中3头份PCV-2和PRRSV同时为阳性,其余猪为阴性,健康猪对照样品全部阴性。结果表明,PRRSV和PCV-2复合PCR诊断方法具有高度特异性和敏感性,可用于兽医临床诊断。  相似文献   

果实表皮毛的扫描电镜观察及其对果实表面荧光特性的影响     

郭学民  王贵禧  高荣孚  梁丽松 《内蒙古农业大学学报(自然科学版)》2006,27(2):43-47

以扫描电镜技术观察了桃(94-1-40)和2种猕猴桃(中华36和美味84)果实膨大期的表皮毛,并利用Im a-ging-PAM测定了其去表皮毛前后果实表皮荧光动力学参数。结果表明,桃果实表皮密布长圆锥状单细胞非腺毛,中华36果实表皮被覆瘪缩的单细胞毛,美味84果实表皮毛发达且分枝。去表皮毛后,3种果实表皮的F0和NPQ升高,Fv/Fm、Y ield、qP和ETR降低,这些参数的变化具有明显的种间和时间差异,而且其差异达到了不同的显著水平。这表明强光下3种果实表皮主要的保护机制很可能是依赖PSII反应中心可逆失活的热耗散。  相似文献   

蜻蜓目昆虫DNA的提取方法研究     

张大治  戴沛捷 《农业科学研究》2004,25(3):10-12

以不同处理方法的蜻蜓目昆虫为材料,分别采用溴化十六烷基三甲基铵(CTAB)法、蛋白酶K等方法提取总DNA,通过OD260/280值、琼脂糖凝胶电泳对所得DNA溶液进行检测.结果显示这两种方法均可以获得较高质量的总DNA,用于PCR扩增实验.因此,在实际工作中可根据实验目的、条件选取最适合的方法.  相似文献   

3种来源的野生斑节对虾携带病毒情况调查          下载免费PDF全文

杨丽诗  黄建华  孙苗苗  周发林  杨其彬  温为庚 《上海海洋大学学报》2011,20(4):546-552

利用PCR方法,对2008年取自3个斑节对虾主产地（中国、泰国、非洲）的野生斑节对虾亲虾进行主要病毒病筛查。在所检测的210例野生亲虾样本中,均发现携带白斑综合征病毒（WSSV）、传染性皮下及造血组织坏死病毒（IHHNV）或斑节对虾杆状病毒（MBV）的阳性样本,其中泰国来源的斑节对虾亲虾WSSV携带率最高,达到89.8%,而中国来源的斑节对虾亲虾IHHNV携带率最高,为8.8%。12例样本同时检测出WSSV和IHHNV（阳性率为5.7%）。该结果揭示3种来源的斑节对虾亲虾普遍携带WSSV和IHHNV,其中WSSV仍然是感染斑节对虾的主要病原。调查结果增进了对斑节对虾主产区野生亲虾健康状况的了解,并在一定程度上揭示了WSSV感染的新规律。  相似文献   

T克隆载体的构建     

胡学军  徐红梅  赵东利  李晶泉  袁晓东 《北京农学院学报》2001,16(4):6-8

本文描述了一种构建与PCR产物直接连接的克隆载体的方法。以高拷贝克隆载体 pUC118为骨架载体,在 pUC118质粒Ampr 基因的Eam110 5I酶切位点上,以点突变的方式封闭Eam110 5I酶切位点。经转化大肠杆菌JM 10 9证实,该改造过的pUC118质粒,可使宿主细胞具有氨苄抗性,仍可作为氨苄选择标记的克隆载体。将一人工合成的具有两个Eam110 5I酶切位点的互补寡聚核苷酸链(两端具有BamHI接头)插入已封闭Eam110 5I酶切位点的pUC118 载体的BamHI位点,构成新的克隆载体,此质粒命名为pUC118E。该载体经Eam110 5I酶切后,可产生 3 端突出一个T碱基的T -vector,能与PCR产物直接连接。  相似文献   

卡那霉素叶片涂抹法筛选转基因大豆植株的有效性     

刘斌  吴迪  侯文胜 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》2006,34(12):79-82

以吉林小粒1号大豆为材料进行卡那霉素梯度涂抹试验,确定卡那霉素筛选的最佳浓度和筛选临界观察时间,并在此基础上,对转基因大豆植株(含np tⅡ基因)分离后代进行卡那霉素涂抹检测和PCR检测,检验2种方法的符合度。结果表明,卡那霉素的最佳筛选浓度为500 m g/L,观察时间以3 d为宜;抗和高抗卡那霉素植株2种检测方法的符合度为90.8%,感和高感卡那霉素植株的符合度为87.1%。可见,卡那霉素叶片涂抹法完全可以用于大豆转基因植株的快速筛选。  相似文献   

拟南芥Ran2小GTP结合蛋白抗血清的制备及其FITC荧光标记     

马立安  江涛  张忠明 《华中农业大学学报》2007,26(4):439-442

将原核表达、纯化的Ran2蛋白对新西兰兔进行免疫制备抗血清,ELISA测定其效价为1∶51 200。免疫印迹分析表明,原核表达、纯化的Ran2和拟南芥可溶性蛋白杂交带均在26 ku处。FITC荧光标记抗体检测Ran2绿色杂交带主要出现在细胞分裂间期的核膜上。  相似文献   

苹果果实中细胞质型苹果酸酶基因（NADP-ME）的克隆与表达分析     

李明  姚玉新刘志 翟衡 《勤云标准版测试》2007,(7)

【研究目的】从苹果果实中克隆细胞质型NADP-苹果酸酶(NADP-ME)基因,并且从基因转录水平上研究该基因与苹果果实酸度的关系。【方法】利用RT-PCR和RACE技术克隆NADP-ME基因,半定量RT-PCR分析该基因在高酸和低酸个体不同发育时期果实中的转录情况,并进行原核表达分析。【结果】成功克隆了细胞质型NADP-ME基因的cDNA全长序列,命名为Mal-ME(GenBank注册号:DQ280492);该基因表达一个约66kD的蛋白;半定量RT-PCR分析表明:不同发育时期的果实中Mal-ME的转录与苹果酸含量呈负相关,即随着Mal-ME转录水平的增强果实含酸量下降。【结论】成功从苹果果实中克隆了细胞质型Mal-ME基因,Mal-ME在果实发育过程中对苹果酸的积累起负调控作用。  相似文献   

实时荧光定量PCR构建奶牛生殖系统PrP基因标准品质粒和标准曲线     

张太翔  宁章勇  赵德明  周向梅  杨建民  尹晓敏 《中国农业大学学报》2007,12(2):1-4

为阐释PrP基因在奶牛生殖系统的正常表达和正常的生理功能,以及为确定生殖系统在疯牛病垂直传播中的地位和其分子机理奠定基础,采用实时荧光定量RT-PCR的方法构建了奶牛生殖系统PrP基因的标准质粒和标准曲线。对含有目的基因质粒的EcoRⅠ酶切鉴定表明所插入的片段大小为302 bp,与预期的结果一致。所构建的标准曲线的相关系数r2=0.999,系统生成的回归方程为y=-0.29x 9.48,说明成功构建了奶牛生殖系统PrP基因的标准质粒和标准曲线,为研究PrP基因在奶牛其他组织的定量奠定基础。  相似文献   

铁（Ⅲ）—邻硝基苯基荧光酮—CEHEAELA—Brij—35显色反应的研究与应用     

陈同森  梁本熹 《湖南农业大学学报(自然科学版)》1994,21(3)

本文研究了在新两性表面活性剂Ｎ－［Ｎ＇－（羧乙基）－Ｎ＇－（２－羟乙基）氨乙基］月桂酰胺钠盐（ＣＥＨＥＡＥＬＡ）和十二醇聚氧乙烯２３醚（Ｂｒｉｊ－３５）存在下，铁（Ⅲ）与邻硝基苯基荧光酮（Ｏ－ＮＰＦ）的显色反应．在ｐＨ６．０～９．０的ＨＡｃ－ＮａＡｃ缓冲介质中，Ｆｅ（Ⅲ）与Ｏ－ＮＰＦ形成１：３的桔红色配合物，最大吸收波长在５８０ｎｍ处，表观摩尔吸光系数ε＿（５８０）达１．４０×１０￣５Ｌ·ｍｏｌ￣（－１）·ｃｍ￣（－１），铁（Ⅲ）浓度在０～０．４８ｕｇ／ｍＬ范围内符合比尔定律．方法用于水样、人发及铝合金中痕量铁的测定，结果满意．  相似文献