单增李斯特菌感染并调控宿主丙酰辅酶A羧化酶α(PCCA)的研究     

魏思雨  陈绵绵  刘郁匆  章先  江玲丽  孙静  宋厚辉  程昌勇 《中国预防兽医学报》2023,(8):787-793

为探究单增李斯特菌感染与宿主丙酰辅酶A羧化酶α (PCCA)表达的相互影响机制，本研究将单增李斯特菌野生株(LM-EGD-e)以MOI 200感染He La细胞5 h后，利用q RT-PCR检测感染LM-EGD-e后HeLa细胞中Pcca基因的转录水平变化，结果显示LM-EGD-e感染HeLa细胞中Pcca基因的转录水平无明显变化(log2FC=-0.305)；采用相应试剂盒分别提取感染后的He La细胞蛋白和线粒体蛋白，采用western blot检测PCCA蛋白表达变化，结果显示，LM-EGD-e感染后的HeLa细胞中，以及线粒体中PCCA蛋白表达水平均无显著变化(P>0.05)。PCR扩增Pcca基因后构建p CMV-N-HA-PCCA重组质粒，并经PCR和测序鉴定正确后转染HeLa细胞中过表达PCCA蛋白后，利用q RT-PCR检测HeLa细胞中Pcca基因的转录水平，收集细胞总蛋白采用western blot检测PCCA蛋白表达水平，结果显示，与转染空载体的细胞相比，转染重组质粒的HeLa细胞中Pcca基因的转录水平上调(log2FC=8.454)，且细胞内PCCA蛋白...  相似文献   

稗JS12种群对噁唑酰草胺的抗性水平及机理分析     

杨倩  朱锦磊  卫甜  刘怀阿  吕敏 《农药学学报》2023,(3):647-656

稗Echinochloa crus-galli是中国水稻产区发生严重的恶性杂草之一，严重威胁水稻的产量和品质。为明确江苏省稻田稗JS12种群对噁唑酰草胺的抗性水平及抗性机理，本研究采用整株水平测定法测定了稗种群对噁唑酰草胺的敏感性；通过乙酰辅酶A羧化酶(acetyl-CoA carboxylase,ACCase)靶标基因测序和表达量测定，以及代谢酶抑制剂增效试验，阐明其产生抗性的靶标抗性机制和非靶标抗性机制；最后测定了稗JS12种群对ACCase抑制剂和其他不同作用机理除草剂的敏感性，以明确抗性种群的交互抗性和多抗性情况。结果表明：江苏省稻区稗JS12种群对噁唑酰草胺产生了13.71倍的高水平抗性；稗JS12种群ACCase基因的6个拷贝序列中均未发生氨基酸突变，药剂处理后其ACCase基因表达量显著低于敏感种群；细胞色素P450抑制剂马拉硫磷和谷胱甘肽-S-转移酶(glutathione-S-transferase,GST)抑制剂NBD-Cl均可显著提高JS12种群对噁唑酰草胺的敏感性，其鲜重抑制中量GR50由227.90 g/hm²分别降至77.51和137....  相似文献   

PEPC序列在濒危岩牡丹属植物分子鉴定中的应用     

李井干  刘晓宇  伏建国  郭静  杨晓军  吴晶 《植物检疫》2023,(3):15-21

为了明确磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（phosphoenolpyruvate carboxylase,PEPC）序列在濒危岩牡丹属植物分子鉴定中的作用，本文研究了6种21份岩牡丹属植物，提取基因组DNA作为PCR扩增模板，对PEPC、matK和psbA-trnH基因片段进行扩增和测序。结果显示，岩牡丹属PEPC序列长度为679～1 079 bp,matK序列长度为898 bp,psbA-trnH序列长度为307 bp。PEPC序列在岩牡丹属种间差异较大，可以准确区分岩牡丹属6种物种。基于PEPC序列构建的系统进化树优于matK和psbA-trnH组合序列构建的系统进化树。PEPC序列可作为岩牡丹属植物鉴定的DNA条形码。  相似文献