禾谷镰刀菌14α-脱甲基酶的原核表达与纯化     

钱恒伟  黄金光 《青岛农业大学学报(自然科学版)》2017,(3):169-176

近年来,三唑类杀菌剂成为生产上防治小麦赤霉病(Fusarium Head Blight,FHB)的主要药剂,主要作用于甾醇生物合成中的14α-脱甲基酶(CYP51),使真菌麦角甾醇的合成受阻,从而破坏细胞膜功能,起到杀菌的功能.本研究的目的是采用结构生物学的方法探究禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)中14α-脱甲基酶(FgCYP51B)的三维结构、生化功能以及其与三唑类杀菌剂的互作机制,进一步阐释禾谷镰刀菌对三唑类杀菌剂潜在的抗性风险.以禾谷镰刀菌(F.graminearum)的cDNA为模板,根据14α-脱甲基酶基因(FgCYP51B)序列设计特异性引物进行PCR扩增,克隆了FgCYP51B基因并构建了3个全长表达载体pHAT2-CYP51B、pETM-20-CYP51B和pETM-30-CYP51B以及3个蛋白截短体表达载体pHAT2-CYP51B50-527,pETM-20-CYP51B50-527和pETM-30-CYP51B50-527,将重组表达载体转化到大肠杆菌BL21(DE3)和Rosetta(DE3),并利用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达.结果表明:全长FgCYP51B蛋白在BL21(DE3)和Rosetta(DE3)中均不表达;重组蛋白pHAT2-CYP51B50-527在大肠杆菌中不表达,而重组蛋白pETM-20-CYP51B50-527和pETM-30-CYP51B50-527成功表达,并通过亲和层析、离子交换与分子筛对重组蛋白进行纯化.该蛋白的表达与纯化为其结构功能的研究奠定了基础.  相似文献   

旱稻引进种质的类缘关系与农艺特征分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

曾莉娟  郑成木  高和琼  刘鸿艳 《热带作物学报》2003,24(3):78-81

以5份水稻籼粳种质作对照，对15份引进早稻种质的类缘关系进行分析。结果表明，2份早稻种质属于籼稻，5份偏籼，4份偏粳，4份粳稻。对这些早稻种质的主要农艺特征进行了测验；并对其产量构成因子相关性作了分析。单株产量与7个穗部数量性状的相关性分析表明：单株产量与穗总粒数、结实率和穗数相关极显。与穗长相关显；早稻陆引46、IRAT l04、巴西陆稻、早稻297等4份引进种质综合农艺性状较好，单株产量较高，值得进一步种植观察。  相似文献   

水稻籼粳亚种特亲和资源利用研究     

沈福成  陈文强 《西南大学学报(自然科学版)》1995,17(4):299-302

用贵州高原粳的广亲和特亲和资源矮化后代与两系不育系测配，筛选出基本是特亲和资源后代的组合，证明亚种间特亲和资源有利于亚种间种优势的利用。  相似文献   

几种土壤K-Ca交换特征及热力学函数的研究     

陈思根  张一平  白锦麟  宋彦罗 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》1990,(Z1)

应用平衡方法对黄褐土、塿土、黑垆土的K-G交换特征及热力学函数进行了初步研究,结果表明:黄褐土对K~+的亲和力相对较小;塿土、黑垆土对K~+的相对亲和力较强,且其交换等温线分别在X_k~l等于0.46和0.41处出现拐点,说明其粘粒表面存在着两种对K~+结合能不同的吸附位。3种土壤对K~+的选择性为:塿土≥黑垆土>黄褐土,选择系数变化的总趋势是随固相吸附K~+的摩尔分数增加而减小,随温度的升高而下降。3种土壤K-Ca交换的热力学函数△G°、△H°和 △S°均为负值,表明3种土壤对K~+均有一定的亲和力,交换反应为放热过程。从△G°、△H°和△S°的绝对值大小来看,3种土壤对K~+的偏好和结合的稳定程度为:塿土>黑垆土>黄褐土,这与其对K~±的选择性结论一致。  相似文献   

山楂枝皮过氧化物酶同功酶及嫁接亲和力初探     

张玉兰  崔瑞雪  尹玉和 《内蒙古农业大学学报(自然科学版)》1993,(3)

应用聚丙烯酰胺凝胶电泳法检测了山楂属植物5个种11个品种枝皮的过氧化物酶同功酶,结果得知:山楂属植物枝皮过氧化物酶同功酶分2大酶区,有4条特征性谱带,种间差异较大,品种间差异较小。嫁接后不同砧,穗组合的过氧化物酶同功酶酶谱基本稳定,但随组合不同而有一定的变化。砧,穗过氧化物酶同功酶相同值越大,嫁接亲和力越强。同时对4个种,11个品种的44个组合进行了嫁接亲和力预测。  相似文献   

Visualizing Meiotic Chromosome Pairing and Segregation in Interspecific Hybrids of Rice by Genomic in situ Hybridization     

Liu Mao-Sen  Tseng Shih-Hsuan  Chen Ting-Chu  Chung Mei-Chu 《水稻科学》2021,28(1):69-80

Meiotic disturbances in F1 hybrids and their progenies are still major problems in wide hybridization.To investigate the genome affinity reflected in chromosome pairing and segregation,we studied chromosome behaviors during meiosis in two interspecific F1 hybrids[O.minuta×O.australiensis(Om×Oa,BCE genome)and Oa×O.ridleyi(Or,EHJ genome)]by using both traditional staining methods and genomic in situ hybridization(GISH).GISH analysis has been successfully performed on mitotic chromosomes to distinguish different Oryza genomes,but relatively fewer systematic analyses of meiotic chromosomes of interspecific hybrids have been reported.In the hybrids,highly irregular chromosome behaviors through meiosis resulted in producing microspores with unbalanced genome.At diakinesis of these two hybrids,most chromosomes present as univalent,with low frequency as bivalents and occasionally as trivalents.In a pollen mother cell,2 to 8 bivalents and 0 to 4 trivalents were observed in the hybrid Oa×Or,and 1 to 8 bivalents and 0 to 5 trivalents were observed in the hybrid Om×Oa.GISH results indicated that 51.52%bivalents in Oa×Or and 79.65%bivalents in Om×Oa involved allosyndetic association,which indicates that recombination and introgression should be possible if viable backcrosses can be recovered even from triploid hybrids.In this study,we revealed that the meiotic disturbance due to low affinities between parental genomes is the major reason for the sterility of these two triploid interspecific hybrids.The two hybrids showing vigor in reproductive growth are potential genetic resources in future breeding programs.A better understanding of genomic affinities between these distant Oryza species can facilitate planning an effective breeding program by using wide hybridization,and efficient and routine GISH analysis is helpful to monitor alien introgression in the process.  相似文献   

猪卵泡抑制素受体的分离与纯化     

张红琳  杨利国  李斌  茆达干 《华中农业大学学报》2008,27(4)

通过分离纯化卵泡抑制素受体,确定其受体类型,旨在为抑制素的作用机制研究奠定基础.采集30头长白猪垂体组织制备膜蛋白,用亲和层析法从该蛋白组分中分离、纯化出抑制素受体.SDS-PAGE结果发现该受体提取物中有6种蛋白,分子质量从14 ku到130 ku不等,表明抑制素受体可能不是特异性的单一受体,而是共受体.改良的EIASA结果证实,该受体提取物特异性活性为99 U/mg,能与抑制素结合,且与剂量呈正相关(R=0.993).  相似文献   

牙鲆血清免疫球蛋白的分离纯化及部分特性分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

刘云  孙峰  姜国良 《中国水产科学》2007,14(4):547-553

运用Sephacryl S-200凝胶层析和HiTrap rProtein ASepharose亲和层析2种方法对牙鲆(Paralichthys olivaceus)血清免疫球蛋白进行分离纯化,结果表明,牙鲆免疫球蛋白分布于33%~50%的硫酸铵饱和溶液中,其中45%的分离效果最好。凝胶层析和亲和层析样品均出现2个蛋白峰,用还原SDS-PAGE检测确定牙鲆免疫球蛋白存在于第2个蛋白峰中。牙鲆免疫球蛋白重链分子量约为75.4 kD,轻链分子量约为29.9 kD和28.2 kD,推测牙鲆血清免疫球蛋白的分子量为836 kD。制备了兔抗牙鲆免疫球蛋白多克隆抗体,免疫双扩散法检测多克隆抗体效价为1∶32,免疫斑点法检测多克隆抗体效价至少为1∶1 600。运用免疫印迹法(Western-bloting)检测了兔抗牙鲆免疫球蛋白多克隆抗体的特异性,实验证明该抗体与牙鲆全血清中免疫球蛋白重链、轻链反应均成阳性。  相似文献   

牛病毒性腹泻-黏膜病病毒噬菌体单链抗体库的构建和筛选     

孔梓安  宋想胜  程如楠  甄思慧  吴竹青  吴清民  王真 《中国农业大学学报》2022,27(9):64-71

为筛选牛病毒性腹泻-黏膜病病毒（Bovine viral diarrhea virus,BVDV）gP48蛋白的单链抗体,本研究利用噬菌体展示技术构建了gP48蛋白单链抗体克隆文库,通过微孔筛选法对抗体库进行3轮富集淘筛,利用ELISA技术测定单链抗体的亲和力,对亲和力较高的克隆进行基因测序分析和结合活性测定,旨在获得gP48蛋白的单链抗体。结果表明：1）成功构建了库容量为4.3×107的噬菌体单链抗体库,其重组率为83.3%,经三轮筛选对噬菌体抗体库进行富集,富集倍数为1.43×104;2）优化了间接ELISA方法,筛选到3株与BVDV gP48蛋白具有高亲和力的单链抗体以及其基因序列,通过IgBLAST分析显示,3株单链抗体均为鼠源IgG。综上,从gP48蛋白的单链抗体库中筛选获得3个具有高亲和力的单链抗体,可用于后续BVDV检测方法的建立。  相似文献   

不同磷水平对不同基因型烤烟磷素吸收动力学参数特征的影响     

张德龙  张士荣  王军  丁效东 《热带作物学报》2018,39(1):27-33

采用砂培营养液培养方法,研究了不同基因型烤烟在缺磷(-P)、适磷(+P)、过磷(++P)处理10 d后对磷吸收情况及(H2PO4--P)吸收动力学参数特征。结果表明:经不同磷水平预处理后,不同基因型烤烟品种对H2PO4--P的吸收符合离子吸收动力学模型,其吸收动力学参数Vmax值与Km值随磷浓度的增加存在较大差异,随磷浓度的增加,K326的Vmax值增大,Km值增加;粤烟97在+P浓度处理时Vmax值最大,Km值最小;粤烟98在++P浓度处理时Vmax值最大,Km值最小。-P处理时,不同烤烟品种对H2PO4--P的吸收速率表现为:K326>粤烟97>粤烟98;+P处理时,对H2PO4--P的吸收速率表现为:K326≈粤烟97>粤烟98;++P处理时,对H2PO4--P的吸收速率表现为:K326>粤烟97≈粤烟98。上述结果表明,不同浓度磷供应对不同品种烤烟H2PO4--P吸收速率影响较大,不同基因型烤烟亲和力水平存在差异;低磷胁迫对K326低亲和力系统H2PO4--P吸收速率具有促进作用,高磷胁迫对粤烟98高亲和力系统H2PO4--P吸收速率具有促进作用,而低磷、高磷胁迫对粤烟97磷吸收速率均存在抑制作用。  相似文献