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对人β防御素3基因工程菌株BL21-pET-hBD3的摇瓶生长和诱导条件进行了优化.对装液量、接种量和初始pH对菌种生长的影响进行了比较.结果表明,装液量对菌株生长影响最大.IPTG浓度、诱导时间和诱导温度对目的蛋白表达的试验结果显示,温度是一重要影响因素.进一步研究表明,菌株在37℃生长,在28~34℃以0.2 mmol.L-1IPTG诱导4 h对目的蛋白的表达有利,目的蛋白的含量最高可以达到总蛋白的29.8%. 相似文献
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为了研究应激和氨基酸对上皮抗菌肽表达的作用和分子机制,试验选用猪小肠上皮细胞系IPEC-J2作为研究对象,饥饿和大肠杆菌感染分别作为营养应激和细菌应激,丙氨酸和异亮氨酸作为氨基酸处理,收集细胞mRNA,利用荧光定量PCR测定β防御素和相关信号通路蛋白表达水平。结果表明:与对照组(DMEM/F12培养基)相比,饥饿显著降低了小肠上皮细胞猪防御素2(p BD-2)、猪防御素3(p BD-3)和猪防御素EP2c(p EP2c)及沉默信息调节因子2同源蛋白1(Sirt1)、叉头转录因子1(Fox O1)和叉头转录因子4(Fox O4)的表达(P0.05),大肠杆菌对β防御素表达无显著影响(P0.05)。与对照组(饥饿培养基)相比,丙氨酸处理未显著影响p BD-2和p BD-3的表达(P0.05),但显著提高了p EP2c表达水平(P0.05);异亮氨酸处理使p BD-2、p BD-3和p EP2c表达水平显著升高(P0.05)。与对照组相比,丙氨酸和异亮氨酸处理不同程度影响信号通路蛋白转录,丙氨酸处理显著提高了Sirt1和Fox O4的表达水平(P0.05),异亮氨酸处理显著促进了Sirt1、Fox O1和Fox O4的表达(P0.05)。由此得出,营养应激降低猪小肠上皮细胞中β防御素的表达,而氨基酸的补充可促进其表达,该调控作用可能与Sirt1和叉头转录因子(Fox O)信号通路蛋白有关。 相似文献
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植物防御素是一类富含半胱氨酸的小分子蛋白,在抗病反应中起着重要作用。本研究以结球白菜和拟南芥基因组序列为材料,利用生物信息学手段进行基因鉴定、染色体定位和进化分析。结果表明,结球白菜有11个防御素基因成员,数量少于拟南芥(15个),基因组DNA全长183~637 bp,开放阅读框全长183~363 bp;除结球白菜Bra029208序列外,其余防御素基因均有1个内含子;基因定位结果表明,一些基因成簇分布,推测由串联重复所致,拟南芥的3号、结球白菜的1、4、5和10号染色体均没有防御素基因的分布;进化分析结果表明,26个防御素成员可分为三大类,Ⅰ类有10条序列,Ⅱ类13条,Ⅲ类最少,仅3条。 相似文献
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为了研究甘蓝型油菜防御素基因的结构和功能,根据白菜防御素基因序列设计引物,采用RT-PCR方法从甘蓝型油菜中克隆到4个防御素基因,并对其序列进行了生物信息学分析。结果表明,甘蓝型油菜防御素基因cDNA全长325~335 bp,包含231~243 bp的开放阅读框,编码76~80个氨基酸;防御素基因在长期进化过程中产生了显著的差异,但防御素含有的8个保守半胱氨酸残基均稳定存在;Bndef1、Bndef2、Bndef3与萝卜Rs-AFP1、诸葛菜Omdef亲缘关系较近,Bndef4与豇豆Vudef亲缘关系较近;4个防御素蛋白均为稳定蛋白,具有信号肽结构,可能为分泌蛋白。 相似文献
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从莲种子发育中期胚cDNA文库中克隆得到的防御素基因cDNA全长561bp,GenBank登录号为EF421192。分析发现该基因234bp的开放读码框编码77个氨基酸的多肽序列,除信号肽序列外与其它不同来源的植物防御素基因有较高同源性,将其命名为NnDefensin。NnDefensin蛋白带有30个氨基酸的信号肽,具有8个半胱氨酸的高度保守结构等典型的植物防御素特征,成熟肽部分含有γ–硫素蛋白功能结构域。在系统进化上NnDefensin与单子叶植物中的粳稻和小麦的同源蛋白,以及车前草同源蛋白亲缘关系较为接近。通过PCR扩增克隆莲胚防御素基因片段并连接到载体pBI121和带有花生油体蛋白种子特异启动子的载体pAhOleo17.8︰GUS中,成功构建了35S启动子控制的植物表达双元载体pBI121-NnDef和种子特异表达双元载体pAhOleo-NnDef,为该基因的功能鉴定及通过基因工程方法提高转基因植物以及种子的抗病能力奠定基础。 相似文献
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采用PCR定点突变技术,将家蝇(Musca domestica)防御素抗菌肽成熟肽段的基因(des-hf)第32位氨基酸残基由甘氨酸(G)突变为带正电荷的精氨酸(R),构成第一个突变体des-hf-MU1;采用同样的方法在des-hf基因的C端加上6个带有正电荷的赖氨酸(K),构成第2个突变体des-hf-MU2.采用毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统对上述2个突变体进行表达.抗菌特性表明,抗菌肽突变体对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)有较好的抑菌活性.琼脂孔扩散法检测des-hf-MU1和des-hf-MU2的抑菌效价比des-hf分别提高了2.4和8.0倍.酸稳定性试验显示,抗菌肽突变体在pH值为5～6时活性最高,热稳定性试验显示des-hf-MU1和des-hf-MU2 100℃加热10 min后仍具有抑菌活性.显示了两抗菌肽突变体具有良好的应用前景. 相似文献
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Naoki Isobe 《Animal Science Journal》2017,88(7):937-943
Mastitis, a symptom of inflammation in mammary tissue by infection with various kinds of bacteria, causes huge economic losses in the milk industry. One of the popular methods for treatment of mastitis is antibiotics, although this prohibits milk shipping and sometimes causes resistant microbes. Therefore, a new strategy to treat mastitis without antibiotics is eagerly required around the world. Antimicrobial factors belong to innate immunity and can start their function extremely early after bacterial stimulation. These factors have antimicrobial activity for a broad spectrum of bacteria. Elucidation of causal mechanisms and functions of antimicrobial factors in the mammary gland is thought to result in suitable methods for prevention and treatment of mastitis. Therefore, this review introduces traits of some antimicrobial factors and the mechanisms for expressing, producing and secreting them in the mammary gland. For antimicrobial factors, lingual antimicrobial peptide (LAP), S100A7, cathelicidin and lactoferrin are controlled in different sites and different time courses, suggesting that antimicrobial factors play different roles for local defense against bacterial infection in the mammary gland. These findings will contribute to the development of prevention and treatment methods for mastitis. 相似文献