固醇调节元件结合蛋白基因的过表达对促进牛胎儿成纤维细胞脂肪形成的影响     

徐丽  郭立平  朱淼  高雪  张路培  高会江  李俊雅  许尚忠 《中国畜牧兽医》2013,(5):133-139

为了研究固醇调节元件结合蛋白(sterol regulatory element binding factor 1,SREBP1)基因的表达与细胞脂肪形成的关系,本研究构建了pEGFP-C1-SREBP1重组质粒,利用脂质体介导法将重组质粒pEGFP-C1-SREBP1及pEGFP-C1空质粒转染至牛胎儿骨骼肌成纤维细胞培养48 h,实时荧光定量PCR和Western blotting分析目标基因表达水平的变化,并采用油红O染色检测细胞内脂滴。结果发现,pEGFP-C1-SREBP1重组质粒转染细胞内SREBP1 mRNA的表达水平显著高于空白对照组和阴性对照组(P<0.05);SREBP1蛋白也出现明显上调;空白对照组和pEGFP-C1阴性对照组细胞内均未见有红染细胞,而pEGFP-C1-SREBP1重组质粒转染组中出现了清晰的红染细胞。说明SREBP1的表达可促进牛胎儿骨骼肌成纤维细胞脂肪合成,证实牛胎儿成纤维细胞中SREBP1表达和脂滴形成之间存在直接关系。  相似文献   

OsCtBP-A基因过量表达和RNAi沉默对水稻根系生长和抗性的影响     

吴茂森  李磊  吴静  陈华民  何晨阳 《中国农业科技导报》2010,12(1):106-110

为了阐明己克隆的水稻C端结合蛋白家族基因OsCtBP-A的功能,构建了该基因的过量表达和RNAi沉默载体,通过农杆菌介导转化水稻品种日本晴愈伤组织,分别获得了45个过量表达和75个RNAi 沉默T0代转基因植株,并进行了PCR和GUS染色鉴定。T1代过量表达株OsCtBP-A基因表达量明显增加,苗期根系生长增加,对水稻白叶枯病抗性无明显变化;而基因沉默株OsCtBP-A基因表达量显著下降,苗期根系发育迟缓,抗旱性明显降低,抗病性减弱。表明OsCtBP-A基因的表达可能对水稻苗期根系发育、抗旱性和抗病性具有不同程度的调控作用。  相似文献   

Resistance of a soybean cell line to oxyfluorfen by overproduction of mitochondrial protoporphyrinogen oxidase     

Warabi E  Usui K  Tanaka Y  Matsumoto H 《Pest management science》2001,57(8):743-748

The diphenyl ether herbicide oxyfluorfen (2-chloro-4-trifluoromethylphenyl 3-ethoxy-4-nitrophenyl ether) inhibits protoporphyrinogen oxidase (Protox) which catalyzes the oxidation of protoporphyrinogen IX (Protogen) to protoporphyrin IX (Proto IX), the last step of the common pathway to chlorophyll and haeme biosynthesis. We have selected an oxyfluorfen-resistant soybean cell line by stepwise selection methods, and the resistance mechanism has been investigated. No growth inhibition was observed in resistant cells at a concentration of 10(-7) M oxyfluorfen, a concentration at which normal cells did not survive. While the degree of inhibition of total extractable Protox by oxyfluorfen was the same in both cell types, the enzyme activity in the mitochondrial fraction from non-treated resistant cells was about nine-fold higher than that from normal cells. Northern analysis of mitochondrial Protox revealed that the concentration of mitochondrial Protox mRNA was much higher in resistant cells than that in normal cells. There were no differences in the absorption and metabolic breakdown of oxyfluorfen. The growth of resistant cells was also insensitive to oxadiazon [5-tert-butyl-3-(2,4-dichloro-5-isopropoxyphenyl)-1,3,4-oxadiazol-2-(3H)- one], the other chemical class of Protox inhibitor. Therefore, the resistance of the selected soybean cell line to oxyfluorfen is probably mainly due to the overproduction of mitochondrial Protox.  相似文献   

辣椒CaSn 基因超表达增强转基因烟草对南方根结线虫的抗性     

张文玥  茆振川  沈宝明  王刚  姚玉荣  冯东昕  谢丙炎 《园艺学报》2014,41(1):80-88

 CaSn 基因是在辣椒（Capsicum annuum）‘Santaka’中发现的新型抗菌肽Snakin 家族基因。 通过RT-PCR,将CaSn 基因从辣椒中分离并构建到pBI-121 植物表达载体,通过农杆菌EHA105 介导转 化白肋烟（Nicotiana tabacum‘White burley’）,筛选到10 个独立的转基因株系,并对T1 代植株进行抗 南方根结线虫（Meloidogyne incognita）鉴定及靶标基因表达分析。结果表明CaSn 已转入白肋烟,能够进 行超量表达,并且转CaSn 基因白肋烟上的根结数量比转空载体对照和非转基因对照减少70%,同时不同 转基因烟草株系间对南方根结线虫的抗性也存在着一定差别。通过试验证明了辣椒中的抗菌肽基因CaSn 具有抗南方根结线虫作用,对于植物抗线虫资源的挖掘及利用提供了重要理论依据。  相似文献   

过表达circNMT1促进水牛脂肪细胞的成脂分化     

冯雪  赵金辉  汪书哲  黄洁萍  魏雪锋  史远刚  马云 《畜牧兽医学报》2022,53(4):1077-1088

旨在鉴定非编码RNA circNMT1,明确其组织和细胞的表达模式,以及探究过表达circNMT1对脂肪细胞分化的影响。本试验以30月龄中国沼泽水牛(信阳水牛,n=3)的心、肝、脾、肺、肾、背最长肌、背部皮下脂肪组织和前体脂肪细胞以及3T3-L1细胞为试验材料。通过半定量PCR和实时荧光定量PCR (real-time quantitative PCR,qRT-PCR)技术对circNMT1进行鉴定、细胞定位并明确其时空表达模式。进一步分别将其过表达到3T3-L1和水牛前体脂肪细胞中,利用形态学方法及定量方法检测过表达后脂滴累积情况,同时采用qRT-PCR检测脂肪标志基因相对表达水平的变化。结果表明,circNMT1是真实存在且稳定表达的circRNA,在水牛前体脂肪细胞的细胞核和细胞质中均表达,且在脂肪组织和成熟的脂肪细胞中高表达(P<0.001)。功能获得性试验表明,在3T3-L1细胞和水牛脂肪细胞,circNMT1显著促进脂肪细胞的脂滴积累,并且显著提高成脂标志基因PPARG、C/EBPα和FABP4的相对表达水平(P<0.01)。circNMT1可能是水牛脂肪细胞分化的正调控因子,这为circNMT1在水牛脂肪细胞中的调节作用提供了新见解。  相似文献   

重组酶Cre基因在大肠杆菌中的高效表达及其一步纯化和活性检测   总被引：3，自引：1，他引：2  

王文棋  盖颖  陆海  蒋湘宁 《北京林业大学学报》2006,28(3):57-60

为了实现DNA重组酶Cre在体外的应用, 以pET-30a高效表达载体为基础构建了pTE30-Cre质粒.将此质粒导入大肠杆菌BL21(DE3)中进行IPTG诱导的Cre基因的高效表达.对表达出的Cre重组酶蛋白进行镍离子鳌合法一步纯化,并以带有两个同向loxP位点的质粒为底物,对纯化出的Cre酶进行活性检测.该实验为Cre酶的体外应用奠定了基础.   相似文献   

低磷条件下过表达OsPHF1基因对粳稻农艺性状的影响     

胡张华刘秀艳  王玉锋彭瑜  史晓亮滕胜 《中国水稻科学》2018,32(6):557-564

【目的】 磷酸盐转运体运输协助因子(PHF1)通过转录后调节特定磷转运蛋白,影响磷酸盐的利用效率。本研究通过培育过表达OsPHF1的无选择标记转基因粳稻空育131,研究在不同磷浓度环境中OsPHF1的过表达对粳稻空育131产量的影响,为培育可商品化的磷高效转基因水稻品种提供依据。方法 利用双T-DNA方法构建OsPHF1的过表达载体,通过农杆菌侵染法和后续筛选获得了无选择标记的转基因空育131纯合株系,通过对T₃和T₄代转基因植株的田间试验,研究转基因品系在低磷浓度(75或112.5 kg/hm²过磷酸钙)、中低磷浓度(225或300 kg/hm²过磷酸钙)和正常磷浓度(450 kg/hm²过磷酸钙)下的农艺性状。结果 获得了3个无筛选标记的纯合OsPHF1过表达转基因空育131株系F18-18、F22-32和F25-6。其中,F22-32和F25-6的OsPHF1的表达量远高于野生型。大田试验显示,F22-32和F25-6株系的T₃代在中低磷(300 kg/hm²过磷酸钙)环境中,分蘖数比对照分别增加了55%和25%,增产幅度分别为38%和34%;F22-32和F25-6株系T₄代在低磷条件下(112.5 kg/hm²过磷酸钙)产量的增幅最大,增产了30%~35%;在中低磷条件下(225 kg/hm²过磷酸钙)分蘖数和产量也有明显增加。结论 双T-DNA法能用于培育过表达OsPHF1的无筛选标记转基因水稻。田间试验显示,高表达OsPHF1的转基因株系在中低磷条件下(112.5、225或300 kg/hm²过磷酸钙)分蘖数和产量稳定增加。  相似文献   

水稻黑条矮缩病毒P7-1基因对水稻的遗传转化及转基因植株的抗病性分析     

袁平平  孙枫  倪海平  朱佳慧  周益军  蒋选利  徐秋芳 《中国水稻科学》2018,32(4):342-348

番茄过表达SlMYB102对种子萌发及生长的影响     

张旭  陈丽琛  任仲海 《园艺学报》2018,45(8):1523-1534

番茄（Solanum lycopersicum L.）基因组中已鉴定到121个R2R3-MYB转录因子,但其中绝大多数的生物学功能仍然未知。为探究R2R3-MYB转录因子基因SlMYB102的功能,从‘Micro-Tom’番茄中,利用PCR技术克隆了SlMYB102的编码区,全长为1 089 bp。保守结构域和系统进化树分析显示,SlMYB102蛋白包含两个保守的MYB结构域,与马铃薯的StMYB34同源性最高。亚细胞定位结果显示,SlMYB102编码的蛋白定位于细胞核中。SlMYB102在根、茎、叶、花和未绿熟、红熟果实中均有表达,在茎、叶、花中表达量较高。利用农杆菌介导,将35S::SlMYB102转入番茄,获得了两个过表达株系。与野生型相比,过表达株系种子萌发速率明显升高,而植株高度、叶面积、地上部及地下部的鲜质量均显著降低。显微观察结果表明,与野生型相比,过表达株系叶片表皮细胞面积大小并没有变化,推测过表达SlMYB102是通过减少细胞分裂来抑制番茄植株的生长。  相似文献   

地黄基因RghBNG转化地黄过表达研究     

周延清  杨珂  张喻  张丹丹  李梦辰  余萌 《湖北农业科学》2017,56(17)

用RT-PCR技术从地黄[Rehmannia glutinosa(Gaertn.)Libosch.]幼叶中克隆地黄基因RghBNG,使用Pst I和HindⅢ分别酶切地黄基因RghBNG和植物表达载体p CAMBIA302-GFP,经过重组,构建其过表达载体,转化农杆菌菌株GV3101,获得其工程菌;采用农杆菌介导法,将该基因转入地黄幼叶细胞,再生转化地黄植株。经过潮霉素抗性筛选、PCR和qRT-PCR检测,获得过表达基因RghBNG地黄植株。这些结果为进一步阐明地黄基因RghBNG功能和地黄遗传改良奠定了基础。  相似文献