禽流感病毒血凝素与核蛋白在重组禽痘病毒中的共表达   总被引：4，自引：2，他引：4  

乔传玲  张建林  贾永清  邓国华  姜永萍  王秀荣  孟庆文  于康震 《动物医学进展》2003,24(1):81-83

为克服禽流感病毒(AIV)血凝素(HA)仅诱导机体产生亚型特异性免疫应答的不足,本研究拟将病毒核蛋白(NP)基因与HA基因在重组禽痘病毒中实现共表达。首先构建转移载体,从测序质粒pUCNP中切下目的基因克隆到载体pSY538早晚期启动子LP2EP2的下游,再将含有禽痘病毒早晚期启动子LP2EP2的NP基因片段亚克隆到已有的AIVHA基因重组禽痘病毒转移载体中,即得到同时含有HA和NP两种基因的重组转移载体pSY(HA NP)。将转移载体脂质体转染已感染禽痘病毒亲本株S-FPV-017的鸡胚成纤维细胞。根据报告基因β-半乳糖苷酶(LacZ)基因的表达,蓝白斑法筛选重组病毒,经数轮蚀斑纯化,PCR鉴定及West-ern-blot分析,结果表明所获得的重组病毒能高效表达AIVHA及NP两种蛋白。此研究为进一步研制更为有效的禽流感基因工程活病毒载体疫苗奠定了基础。  相似文献   

犬2型腺病毒SY株的致弱驯化     

范泉水  夏咸柱  邱薇  黄耕  何洪彬  余春  乔军  武银莲  殷震 《中国兽药杂志》2001,35(6):7-9

作者对分离和系统鉴定的一株犬传染性喉气管炎病毒（犬2型腺病毒）SY（沈阳）株，用犬肾传代细胞MDCK进行了致弱驯化，每驯化15代做一次初步的犬的安全性试验。用大剂量不同代次病毒对易感犬进行人工感染试验，每天观察犬的临床症状及白细胞总数，并于接毒后的第5d安乐死，作病理解剖学和病理组织学检查，易感犬的感染试验结果表明，SY株在犬贤细胞上传15代时对犬的致病力已降低，30代时对犬已不引起发烧，精神沉郁和厌食等症状，仅引起轻度的鼻炎，中度的咽炎，剖检肺表现正常，仅见支气管淋巴结肿大，45代时无临床症状，剖检除扁桃体肿大外没有见到其它症状，60代毒已完全失去致病力，未见任何临床症状及病理变化。  相似文献   

腺病毒表达鸡GM-CSF及其对鸡骨髓细胞增殖活性的检测     

王兴龙  郝华芳  杜恩岐  唐文雅  张鹏  陈胜利  张渭东  张淑霞  党如意  杨增岐 《兽医大学学报》2012,(4):509-512

为了方便鸡粒细胞/巨噬细胞集落细胞刺激因子（GM-CSF）作为疫苗佐剂使用,用PCR方法扩增出鸡GM-CSF基因,将其连入人腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV,将重组穿梭载体与腺病毒骨架重组后,获得重组腺病毒骨架载体,线性化后转染293SD细胞,获得能够表达鸡GM-CSF的腺病毒。将获得的重组腺病毒转导鸡成纤维细胞系DF1,细胞培养上清中,可以检测到GM-CSF刺激鸡骨髓细胞活性,为鸡GM-CSF进一步应用奠定了基础。  相似文献   

共表达猪流行性腹泻病毒S1与GM-CSF蛋白重组腺病毒的构建     

赵攀登  董建国  邓同炜  陈益  徐耀辉  蒋增海  卢建洲  王晓晔  王岩 《动物医学进展》2016,(6)

为构建表达猪流行性腹泻病毒(PEDV)S1与GM-CSF融合基因的重组腺病毒,通过FMDV的2A基因序列做为Linker将密码子优化的S1基因和粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)基因连接。构建重组穿梭质粒pShuttle-GM-CSF 2A-S1(m),并将其电转化至含有腺病毒骨架载体pAdEasy-1的大肠埃希菌BJ5183感受态细胞中,通过同源重组制备重组腺病毒质粒pAd-GMCSF2A-S1(m)。重组腺病毒质粒经PacI线性化后转染HEK-293A细胞,获得重组腺病毒rAd-GMCSF2A-S1。间接免疫荧光和Western blot结果显示,S1和GMCSF蛋白在重组腺病毒感染的HEK-293A细胞中获得表达。该重组腺病毒的制备为PEDV重组活载体疫苗的研究奠定了基础。  相似文献   

基因重组抗原酶联免疫法检测兔出血症病毒抗体及其标准化   总被引：2，自引：0，他引：2  

王永山  陆承平  周宗安  陈兴祥 《中国兽医学报》2004,24(3):233-235,239

以重组兔出血症病毒(RHDV)VP60蛋白为抗原，建立了RHDV抗体间接ELISA检测方法。优化的试验反应务件为：重组VP60的包被质量浓度为1．0mg／L，用10％牛血清封闭，以大肠杆菌提取物稀释被检血清以消除非特异性反应。将所建立的ELISA与现行血凝抑制(HI)试验比较发现，不同免疫状态的兔血清的RHDV ELISA抗体与HI抗体均呈正相关。对11个RHD免疫兔场1130份血清样品的抗体检测表明，各免疫兔群血清RHDV抗体水平不完全一致，D值在1．09～1．76之间，显著高于非免疫兔(0．05)及SPF兔(0．02)，低于高免兔(2．34)。在此基础上，研制了RHDV抗体酶联免疫检测试剂盒，测定了其主要指标，制定了各成分的质量控制标准，为兔群进行免疫学监测及评价疫苗的免疫效果提供了便利。  相似文献   

捻转血矛线虫重组H11抗原山羊免疫保护性试验   总被引：1，自引：0，他引：1  

严若峰  徐立新  李祥瑞 《中国兽医学报》2007,27(6):842-844

以重组H11-1、H11-2及H11-1与H11-2混合物分别免疫山羊后,ELISA检测发现血清抗体均在首次免疫后14 d达到较高水平,在第2次免疫后10 d达到高峰。用10 000只捻转血矛线虫第3期幼虫攻击山羊后,对不同免疫组山羊排出虫卵数、虫卵孵化率和成虫数的统计分析结果表明,免疫组与对照组间差异不显著,但免疫组雌虫数显著少于对照组,这对防治捻转血矛线虫病可能会起一定的作用。  相似文献   

传染性法氏囊病的研究进展   总被引：5，自引：4，他引：5  

高崧  刘秀梵  崔治中 《动物医学进展》2001,22(3):44-49

本文综述了传染性法氏囊病病毒（IBDV）的分子结构与功能的关系。IBDV的抗原变异主要与病毒VP2蛋白的2个亲水区有关；分子流行病学调查结果显示，不同地区分离到超毒株与欧洲的超强毒株间有相似的来源，超强毒株赖以产生的分子基础尚不明确，且新的超强毒株不断出现。表达VP2基因的重组疫苗有一定的保护作用。  相似文献   

牛腺病毒载体研究进展     

邱薇  夏咸柱  范泉水  扈荣良  孙阳  杨美峰 《动物医学进展》2003,24(6):11-14

动物腺病毒与人腺病毒具有相似基因组结构 ,用其构建的动物腺病毒载体可将外源基因转移到人体细胞内表达 ,却又不能在其中复制繁殖 ,且人体内不存在针对它们的免疫应答 ,有望代替人腺病毒作为基因治疗和基因免疫的载体 ,目前已构建了多种动物腺病毒载体。文章综述了近年来牛腺病毒载体构建的一些研究进展。  相似文献   

A和B亚群禽白血病病毒gp85基因的表达及其抗血清的亚群特异性比较     

王丽  张青婵  赵鹏  武专昌  崔治中 《中国兽医寄生虫病》2011,19(3):8-13

为制备快速鉴定禽白血病病毒A和B亚群（Avian leukosis virus subgroup A/B,ALV-A/B）的特异性诊断试剂,并鉴定分析ALV-A SDAU09C1株和ALV-B SDAU09C2株抗血清的亚群特异性,将两株病毒的gp85基因进行克隆、原核表达后,免疫家兔分别制备抗ALV-A和ALV-B的血清。血清交叉中和反应显示,SDAU09C1株和SDAU09C2株间的抗原同源性相关系数r=0.366,属于不同亚群;间接免疫荧光表明,两种抗血清均与ALV-A和ALV-B反应,但与ALV-J无反应。结果表明本试验制备的重组蛋白具有较好的反应原性,制备的二种兔抗血清可快速识别ALV-A/B与ALV-J。  相似文献   

Ⅰ群禽腺病毒12个血清型毒株Hexon蛋白全基因序列测定和酶切位点分析     

李海英  尹燕博  徐守振  王建琳  王晓红  王守春 《中国兽医学报》2012,(1):33-37,43

利用3对引物(A、B、C)分别进行Ⅰ群禽腺病毒的12个血清型毒株的Hexon全基因序列PCR扩增,并进行序列测定和PCR-RFLP分析,通过DNAStar软件和MEGA软件进行序列分析并绘制遗传发育进化树。结果显示,Hexon基因全长为2 800左右个核苷酸,编码约940个氨基酸,不同血清型之间的同源性为75.2%～99.5%,变异范围是0.0%～24.3%。推导的氨基酸同源性为20.7%～98.8%,差异性为0.0%～24.2%。12个血清型之间Hexon全基因序列信息用来评价Ⅰ群禽腺病毒家族的种系发育关系,构建的进化树显示出5个主要的分支。选用限制性内切酶HaeⅡ,利用存在差异的Hexon序列片段D特异性可以有效区分大部分血清型。结果表明,获得了Ⅰ群禽腺病毒12个血清型不同毒株的Hexon全基因序列并进行了分子进化分析,同时结合12个血清型PCR-RFLP分析,为进一步分析鉴别Ⅰ群禽腺病毒不同血清型提供依据。  相似文献