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842.
用天然毒素蛋白杀灭害虫是农林病虫害防治的一个重要发展方向。利用家蚕核型多角体病毒(BmNPV)多角体蛋白基因的部分序列与蝎毒素蛋白基因(BmK ITa1)融合表达,SDS-PAGE分析通过融合表达策略构建的含有蝎毒素蛋白基因的重组病毒具有较高的蝎毒素蛋白表达水平,重组病毒vBmBac(polh-)PH5B/35B-BmK ITa1.6His,在家蚕BmN细胞内的BmKITa1蛋白表达水平分别为0.4、0.2 mg/mL。以家蚕和棉铃虫为供试昆虫,探讨融合蝎毒素蛋白的杀虫效果,结果表明:经口添食含融合蝎毒素蛋白的BmN细胞液对不同龄期家蚕幼虫均具有毒性,尤其对低龄幼虫的毒性较强,蚁蚕添食后的死亡率达80%;给1龄期的家蚕和棉铃虫幼虫经口添食含有不同剂量融合蝎毒素蛋白的BmN细胞破碎液,当添食剂量在2.8μg/头时,家蚕的死亡率即达100%,棉铃虫的死亡率达74%。研究结果提示:BmNPV多角体蛋白编码基因的部分序列与蝎毒素蛋白基因融合表达,可提高蝎毒素蛋白的表达水平,且重组病毒表达的蝎毒素蛋白具有较好的杀虫活性,在较低剂量下即可对低龄昆虫产生良好的杀灭效果。 相似文献
843.
大肠杆菌志贺毒素stxB融合基因的构建及其高效表达 总被引:3,自引:0,他引:3
利用PCR方法,从肠出血性大肠杆菌O157:H7的基因组DNA中,分别扩增出Stx1B和Stx2B亚基的结构基因片段,然后再通过PCR将这2个片段连接起来,并定向克隆到表达质粒pET28a的Nco1和EcoR 1位点之间,构建了重组表达质粒pMB1。将重组质粒转化到宿主菌BL21(DE3)中,对重组菌株BL21(pMB1)用IPTG进行诱导表达,并对最佳诱导时间进行了探索。SDS-PAGE电泳检测结果表明。重组菌株表达出了16300的目的蛋白Stx2B-L-Stx1B;经薄层扫描分析表明,表达量约占菌体总蛋白的68.4%,且目的蛋白为包涵体表达,表达量约占细菌沉淀的84.6%。研究还表明,未用IPTG诱导的BL21(pMB1)菌株也可有少量目的蛋白的基础表达。不同诱导时间的结果表明,在3~7h的诱导时间内,目的蛋白的表达量没有明显变化。 相似文献
844.
金黄色葡萄球菌耐药性及肠毒素分型研究 总被引:1,自引:0,他引:1
为了解从生鲜乳中分离得到的31株金黄色葡萄球菌的耐药性和肠毒素分布情况,用微量肉汤稀释法进行药敏试验,用PCR方法进行肠毒素的检测和分型。结果表明,31株金黄色葡萄球菌耐药率在50%以上的抗菌药有7种,药耐药率小于10%的有3种;敏感率大于50%的抗菌药有6种,敏感率小于10%的有5种。31株金黄色葡萄球菌毒素基因携带率为93.5%,同时携带2种及以上毒素的菌株占67.7%,有SEA基因的占38.7%,含其他传统的毒素基因类型SEB、SEC、SED和SEE基因的菌株只占40.4%,携带新发现的毒素基因SEG、SHE、SEI和SEJ的菌株占67.7%。说明本次试验中的31株金黄色葡萄球菌对6类13种抗菌药都有不同程度的耐药性,且多重耐药现象比较严重。生鲜乳中分离的金黄色葡萄球菌带毒率高,且携带新发现的肠毒素基因较多。 相似文献
845.
以接种粉红单端孢霉(Trichothecium roseum)的红富士苹果为试材,通过测定果实中毒素种类及含量、粉红单端孢霉生长情况及相关生理指标的变化,研究不同气调贮藏条件对接种苹果产生毒素水平及相关生理指标的影响。结果表明:在气调Ⅰ(3%~4% O2+1%~2% CO2)、气调Ⅱ(3%~4% O2+3%~4%CO2)、气调Ⅲ(3%~4% O2+5%~6% CO2)3种气体环境中,粉红单端孢霉均能生长,在贮藏的中后期,气调Ⅱ环境中苹果的腐烂直径显著高于气调Ⅰ和气调Ⅲ(P<0.05)。气调Ⅱ环境中接种苹果的毒素含量始终高于气调Ⅰ和气调Ⅲ。在3种气调环境下贮藏25 d时,气调Ⅲ苹果的可溶性固形物含量最低,气调Ⅱ环境下的苹果中可滴定酸含量高于气调Ⅰ和气调Ⅲ,高体积分数的二氧化碳可以推迟果实呼吸高峰和乙烯高峰的出现。综上所述,适当提高CO2体积分数可以影响接种苹果中毒素含量及相关生理指标,进而延长果实贮藏期。 相似文献
846.
847.
旨在探究副猪格拉瑟菌(Glaesserella parasuis,GPS)突破猪呼吸道上皮屏障引起系统性感染的机制。通过超速离心和密度梯度离心提取副猪格拉瑟菌外膜囊泡(outer membrane vesicles, OMVs),OMVs经SDS-PAGE显示,蛋白质条带分布在55~100 ku,经透射电子显微镜(TEM)观察,OMVs的粒径在100~200 nm,纳米粒子直径分析(NTA)结果显示,样品在100~200 nm处的粒子数目最多。进而用制备的HbpA及OmpP2多克隆抗体对OMVs及不含OMVs的细菌上清进行Western blot验证,证实所提取的样品为外膜囊泡,且进一步结果证明细胞致死性膨胀毒素(CDT)在GPS培养物中主要以OMVs的形式存在。用OMVs或CdtB处理猪气管上皮细胞(swine tracheal epithelial cells, STEC)36 h,检测STEC中cleaved-caspase3、ZO-1和Occludin的蛋白表达水平,并用FITC-葡聚糖(FD-4)检测STEC单层细胞的细胞旁通透性。结果发现,OMVs与CdtB处理后凋亡相关蛋... 相似文献
848.
本研究旨在调查规模化养鸡场内鸡源产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens,CP)的致病性和耐药性,并评价阿维拉霉素和磷酸泰乐菌素预防CP感染鸡群发生坏死性肠炎(necrotizing enteritis,NE)的效果,为鸡NE的防治提供指导。在河北、山西两地选择有CP引起NE发病史的规模化养鸡场,随机采集新鲜粪便,分离CP,并通过多重PCR测定其毒素型。选定3个不同养殖场分离到的A型CP,以109CFU·只-1的剂量,连续5 d经灌胃的方式感染14日龄SPF鸡,观察肠道病变和NE发生情况,评价分离菌株的致病力。使用微量肉汤稀释法测定分离到的CP对阿维拉霉素、林可霉素和磷酸泰乐菌素的最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)。根据MIC结果,选择药物敏感性较好的两种药物对因CP引起NE发病的鸡群中未出现临床症状的鸡进行预防试验,观察精神食欲、腹泻症状、肠道病变情况,统计CP检出率和NE发生率,评价两种药物预防效果。结果显示:自753份鸡粪便样品分离到91株CP,且毒素型全部为A型。攻毒试验结果显示:A、B、C组攻毒组NE病变发生率均显著高于未攻毒组D组(P<0.05),攻毒组肠道病变评分均显著高于未攻毒组(P<0.05)。与未攻毒组相比,攻毒组出现明显的腹泻症状和肠道病变,差异显著(P<0.05),3株CP都可以引起鸡NE。MIC结果表明:阿维拉霉素、林可霉素和磷酸泰乐菌素的MIC范围分别是0.25~4、0.125~128和0.25~32 μg·mL-1。药物疗效试验结果表明:通过拌料连续21 d给予阿维拉霉素预混剂,给药期间及停药后1周可保护鸡群,防止出现NE症状或防止病变恶化,显著降低NE发生率、NE病变评分以及CP检出率(P<0.05)。通过拌料连续7 d给予磷酸泰乐菌素预混剂,效果与阿维拉霉素预混剂相当,但停药14 d后,6只鸡(6/11)又出现NE症状。目前,河北、山西省部分规模化鸡养殖场内流行的CP多为A型,并且可以引起NE,同时,A型CP对阿维拉霉素和磷酸泰乐菌素仍较敏感,其预混剂用于发病鸡群的预防效果较好。 相似文献
849.
通过田间试验,评价小麦赤霉病防控药剂的有效性,为植保部门提供药剂选择参考依据。采用‘镇麦12’、‘镇麦9号’为试验品种,以参试杀菌剂的登记最高剂量在小麦扬花期施药2次,最后一次施药25天后调查小麦赤霉病病情及籽粒中DON毒素含量,计算各杀菌剂对赤霉病防效。结果表明,当一个区域内小麦赤霉病菌对多菌灵抗性频率达50%以上时,多菌灵等药剂对赤霉病防效由90%下降到低于80%;当采用含有甲氧基丙烯酸脂类的药剂75%肟菌酯.戊唑醇SC防治赤霉病时,将会刺激DON毒素在小麦籽粒中的积累,毒素含量达到1.405 mg/L,高于对照处理0.598 mg/L。而且,通过有效性监测,初步明确了戊唑醇在本地区小麦赤霉病防治的最低有效用量为120 g/hm2。对防治农药进行有效性监测是小麦赤霉病有效防控的重要保障机制。 相似文献
850.