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鸡Rab7b在细胞晚期内吞体定位和结合恒定链的分子特征 总被引:1,自引:1,他引:0
Rab蛋白是介导胞内活性蛋白转运的分子家族。恒定链(invariant chain,Ii)具有协助抗原肽转运、B细胞成熟和作为细胞因子的受体等免疫学功能。前期研究发现,鸡(Gallus gallus)Rab5a在细胞早期内吞体中与Ii结合,但不清楚是否还有其他转运蛋白有该特性。基于Rab7b分子定位于晚期内吞体,并与胞内分子转运相关,本研究探索了鸡Rab7b与Ii结合的分子结构特征。首先,用自行设计的引物扩增了鸡和小鼠(Mus musculus)Rab7b基因,并进行了氨基酸同源性比对分析;构建了含鸡Rab7b及其67位氨基酸突变体Rab7bQ67L的原核和真核重组质粒。其次,将含红色荧光蛋白和目的基因的重组质粒转染鼠巨噬细胞系Raw264.7,培养后用绿色荧光素(FITC)标记的鼠抗晚期内吞体蛋白1(LAMP1)抗体染色,观察目的蛋白在内吞体的定位。进一步将鸡Rab7b和Rab7bQ67L分别与Ii共转染293T细胞,观察它们与Ii的共定位。最后用拉下法和免疫印迹检测鸡Rab7b及Rab7bQ67L与Ii的结合。结果表明,所克隆获得的鸡Rab7b基因与预期大小一致,其开放阅读框为624 bp,编码208个氨基酸。鸡和鼠的Rab7b蛋白质结构相似性为74%。尽管鸡Rab7b和突变体Rab7bQ67L均能结合Ii,但只有Rab7b可以定位于晚期内吞体,而突变体却改变了该定位特性。综上所述,鸡Rab7b与Ii不仅在晚期内吞体共定位,而且还能互相结合;鸡Rab7b的第67位氨基酸影响其在细胞内定位而不影响与Ii结合。综上表明,Rab分子参与了Ii在细胞内细胞器的转运,为进一步研究Ii在细胞内的转运机制提供了新的途径。 相似文献
994.
Yun-long ZOU Zhi-yuan LI Yun-jing ZOU Hai-yang HAO Jia-xiang HU Ning LI Qiu-yan LI 《农业科学学报》2019,18(6):1329-1336
CRISPR/Cpf1 has emerged recently as an effective tool for genome editing in many organisms, but its use in pigs to generate precise genetic modifications has seldom been described. Myostatin(MSTN) is a well-characterized negative regulator of muscle development, and natural mutations in this gene cause a double-muscled phenotype in many species. However, to the best of our knowledge, no naturally occurring mutation in MSTN has been found in pigs. In addition, no living pig models with sophisticated modifications orthologous to natural mutations in MSTN have yet been reported. In this study, we exploited the CRISPR/Cpf1 system to introduce a predefined modification orthologous to the natural MSTN mutation found in Belgian Blue cattle(thus known as the Belgian Blue mutation). Our research demonstrated that the cutting efficiency of CRISPR/Cpf1 was 12.3% in mixed porcine fetal fibroblasts in drug free medium, and 41.7% in clonal colonies obtained using G418 selection. Then, the Cpf1-sgRNA vector, ssODN template, and a self-excision cassette were co-transfected into porcine fetal fibroblasts. After G418 selection, 8 clonal colonies were examined and 5 with genetic modification were found. Of these 5, 2 harbored the precise 11-bp deletion. Using 1 heterozygous clonal colony, 2 cloned Duroc piglets were successfully generated, which was heterozygous for the Belgian Blue mutation. In summary, our results demonstrate that CRISPR/Cpf1 system can be used efficiently to generate double-stranded breaks, and also to mediate homologous recombination to introduce precise genomic modifications in pigs. 相似文献
995.
为构建禽网状内皮组织增生症病毒(REV)MD-2株的感染性克隆,将MD-2株的前病毒基因组全长克隆至pMD18-T Simple载体中构建MD-2全长质粒,经转染CEF细胞后进行病毒拯救及鉴定,并对拯救病毒进行了生物学特性研究。结果表明,成功构建了MD-2全长质粒,拯救病毒感染CEF细胞后用间接免疫荧光试验检测到病毒抗原;拯救病毒的生长特性与亲本病毒相比无明显差异。随后对env基因进行了多个位点的定点突变,并拯救出相应的突变株,结果显示env基因第1433位碱基突变后不能拯救出病毒,推断1433位的突变为致死性突变。MD-2株感染性克隆的构建和病毒拯救的研究为继续研究REV基因和蛋白功能提供了技术支持。 相似文献
996.
为了揭示寿光市冬季负积温的变化规律,合理利用气候资源,本研究基于寿光市1960—2018年逐日平均气温观测资料,统计负积温及最长持续日数,利用现代气候诊断分析方法,分析负积温及最长持续日数变化特征及产生影响,为寿光工农业生产提供参考依据。结果表明,(1)寿光市1961—2018年负积温总体呈减少趋势,气候倾向率为-32.8℃/10 a。冬季各月负积温变化趋势均呈减少趋势,1月对冬季变暖贡献最大。负积温在1989年发生了突变;(2)冬季负积温最长持续日数总体呈减少趋势,气候倾向率为-5.0 d/10 a。负积温最长持续日数初日年代平均值推迟了12天。21世纪初10年,冬季寒冷开始晚,结束的早,较历年平均值缩短了18天;(3)负积温变化对农业影响利弊并存;(4)负积温对工业影响利大于弊。 相似文献
997.
基于CiteSpace的外生菌根知识图谱计量分析 总被引:1,自引:1,他引:0
为更好地了解和掌握外生菌根的国内研究进展,以“外生菌根”为主题词,时间跨度为1979—2018年,从CNKI数据库中得到相关文献1607篇,运用CiteSpace知识图谱分析工具对关键词、作者、机构进行可视化分析,并对外生菌根的研究进展、发展趋势和资助基金等方面进行相关分析。结果表明:(1)外生菌根研究经历了起步阶段、快速增长阶段和稳定发展阶段3个阶段;(2)1979年以来,外生菌根研究主要围绕外生菌根、外生菌根真菌、樟子松、马尾松、菌根真菌、油松、大型真菌、多样性等展开;(3)内蒙古农业大学林学院、抚顺矿业集团林业处、西北农林科技大学林学院是最主要的研究机构;(4)闫伟是外生菌根研究领域发文量最多学者;(5)《内蒙古农业大学学报》是外生菌根相关研究刊载论文数量最多的期刊;(6)国家自然科学基金是研究外生菌根投入最多的基金项目。随着国内学者的研究逐渐深入,国内外生菌根的研究取得了快速发展,相关研究逐渐深入,可以预见国内外生菌根的研究会取得非常可喜的成果。 相似文献
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999.
从播期、播量、条播行距和播深等四个方面对水稻折衷直播栽培的播种技术进行研究,结果表明:选用龙粳8号品种,播期在5月6日至5月13日之间,播量112.5 kg/hm2,行距30 cm,播深0.5~1.0 cm。 相似文献
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