Effect of calf age on bovine viral diarrhea virus tests     

Scott McDougall 《Journal of veterinary diagnostic investigation》2021,33(3):528

  相似文献   

气肿疽梭菌CctA基因的原核表达及其间接ELISA检测方法的建立     

李新苹  陈晓洁  赵兵  刘强德  丁占强  张飞  唐慧芬  曹剑  侯凤  刘洋  王钢 《中国畜牧兽医》2021,48(5):1876-1882

研究旨在原核表达气肿疽梭菌细胞毒素A （CctA）基因,用纯化的重组蛋白建立其间接ELISA检测方法,a。利用大肠杆菌密码子的偏爱性优化CctA基因序列,克隆至原核表达载体pET-28a （+）,双酶切鉴定原核表达质粒pET28a-CctA并测序。将重组质粒转入大肠杆菌,经IPTG诱导得到高表达的重组CctA包涵体蛋白。包涵体蛋白变性后经镍（Ni）柱纯化,SDS-PAGE检测其纯化效果。以豚鼠抗气肿疽梭菌抗血清为一抗,用Western blotting方法检测重组CctA蛋白的反应原性。用棋盘滴定法建立间接ELISA检测方法,以复性后的重组CctA蛋白作为检测抗原,摸索抗原包被浓度、封闭液的种类及浓度、抗体的最适稀释度和反应条件等。选用3批气肿疽灭活疫苗免疫豚鼠后采集血清,同时用攻毒和间接ELISA两种方法验证疫苗的免疫效力。质粒双酶切结果显示,得到大小约853 bp的条带,与预期相符,且测序结果正确。SDS-PAGE结果表明,成功表达并纯化大小为35 ku的重组CctA蛋白。Western blotting结果显示,豚鼠抗气肿疽梭菌抗血清与重组CctA蛋白具有良好的反应原性。建立的间接ELISA法的最适条件为：抗原的包被浓度为0.5 μg/mL,于4 ℃包被过夜;封闭液选择10%胎牛血清,37 ℃孵育2 h;二抗的稀释度为1：8 000;室温避光显色10 min后终止反应,测定D_{450 nm}值。当P/N>4.6时,间接ELISA法检测结果与豚鼠攻毒试验结果拟合度较好。本研究成功表达CctA基因并纯化了重组CctA蛋白,建立的以重组CctA蛋白为检测抗原的间接ELISA检测方法,有望成为气肿疽灭活疫苗免疫效果验证的替代方法。  相似文献   

2020年新疆地区猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体检测与分析     

王紫阳  屈勇刚  孙琼飞  党瑞莹  周海琴  张小玉  张家瑞  常军帅  李岩 《中国猪业》2021,16(3):58-61

为了解2020年新疆地区猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒（PRRSV）抗体水平及其消长规律,本试验采用间接酶联免疫吸附试验（ELISA）法对1 218份血清中PRRSV免疫抗体水平进行检测和分析。结果显示,PRRSV抗体平均阳性率为78.49%（956/1218）,高于国家规定标准（70%）。S/P的平均值为1.22±0.84,变异系数为69.45%。不同类别猪群抗体平均阳性率在59.19%~91.50%之间,有一定的差异。在调查的10个规模化养殖场中,9个场PRRSV免疫抗体阳性率达到国家标准。不同类别猪群PRRSV变异系数较高,需进一步对现有的免疫程序进行调整和完善,确保各猪群健康。  相似文献   

倍他米松ELISA检测方法的建立     

郭璐  张晶  沙芳芳  赵兴然  王敬  王向红 《动物医学进展》2016,(12):50-54

为建立倍他米松(BET)ELISA检测方法,先使BET与琥珀酸酐反应,再采用活化酯法与牛血清白蛋白(BSA)偶联制备免疫原;其次,利用免疫动物获得多克隆抗体,经Sephrose 4B-proteinA方法对抗体进行纯化;最后,建立倍他米松ELISA检测方法。结果表明,免疫抗原偶联成功,获得了亲和力较高的多克隆抗血清,间接竞争ELISA测定其滴度为102 400、IC15为6.60×10-5 ng/mL和IC50为0.97ng/mL。该方法适用于残留在动物性食品中的BET现场大批量检测。  相似文献   

Evaluation of truncated LipL32 expressed by Escherichia coli and Pichia pastoris for serodiagnosis of Leptospira infection in rodents     

Kanae SHIOKAWA  Chandika D. GAMAGE  Nobuo KOIZUMI  Yoshihiro SAKODA  Kenta SHIMIZU  Yoshimi TSUDA  Kumiko YOSHIMATSU  Jiro ARIKAWA 《The Journal of veterinary medical science / the Japanese Society of Veterinary Science》2016,78(2):221-230

The applicability of the recombinant LipL32 for serodiagnosis of leptospiral infection in field rodents was assessed in this study. An immunodominant region of LipL32 was determined by monoclonal antibodies, and then, truncated LipL32 (tLipL32) was designed to contain the region (87–188th amino acid). The tLipL32 was compared between two recombinant expression hosts Escherichia coli and Pichia pastoris in ELISA. With field rat sera, tLipL32 expressed by P. pastoris (tLipL32p) had high antigenicity without background reactions, while tLipL32 expressed by E. coli (tLipL32e) showed high background reactions, which were reduced by pre-adsorption of sera with E. coli. To evaluate tLipL32-ELISA, field rat sera were tentatively divided into a Leptospira infection positive (12 sera) and a negative group (12 sera) based on the results from flaB gene PCR of kidney samples and WB with whole Leptospira cell. Consequently, the sensitivity of tLipL32p-ELISA for field rat sera was 83% . A similar result was obtained from tLipL32e-ELISA with adsorbed sera, (92%). However, sensitivity of tLipL32e-ELISA using sera without an adsorption treatment was 50%. Regardless of the expression host, tLipL32-ELISA had 100% specificity and sensitivity in experimentally infected laboratory rats. These results suggest that recombinant LipL32 expressed by P. pastoris is more applicable for serodiagnosis in field rats due to a lack of background reaction.  相似文献   

Improvement of an enzyme-linked immunosorbent assay for equine herpesvirus type 4 by using a synthetic-peptide 24-mer repeat sequence of glycoprotein G as an antigen     

Hiroshi BANNAI  Manabu NEMOTO  Koji TSUJIMURA  Takashi YAMANAKA  Ken MAEDA  Takashi KONDO 《The Journal of veterinary medical science / the Japanese Society of Veterinary Science》2016,78(2):309-311

To increase the sensitivity of an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for equine herpesvirus type 4 (EHV-4) that uses a 12-mer peptide of glycoprotein G (gG4-12-mer: MKNNPIYSEGSL) [4], we used a longer peptide consisting of a 24-mer repeat sequence (gG4-24-mer: MKNNPIYSEGSLMLNVQHDDSIHT) as an antigen. Sera of horses experimentally infected with EHV-4 reacted much more strongly to the gG4-24-mer peptide than to the gG4-12-mer peptide. We used peptide ELISAs to test paired sera from horses naturally infected with EHV-4 (n=40). gG4-24-mer ELISA detected 37 positive samples (92.5%), whereas gG4-12-mer ELISA detected only 28 (70.0%). gG4-24-mer ELISA was much more sensitive than gG4-12-mer ELISA.  相似文献   

Serology in Bovine Infectious Disease Diagnosis     

《Veterinary Clinics of North America: Food Animal Practice》2023,39(1):141-155

  相似文献   

棉花黄萎病菌毒素ELISA检测方法的建立及其应用   总被引：6，自引：1，他引：6  

刘凤权  章元寿 《棉花学报》2003,15(1):47-50

以纯化的棉花黄萎病菌毒素(PLPC)免疫新西兰白兔制备了PLPC特异性抗血清,建立了可特异性检测棉花黄萎病菌毒素的A蛋白双抗体夹心ELISA方法。应用建立的ELISA方法测定了病菌培养滤液、人工接种幼苗和大田病株不同组织中的毒素,结果表明:不同产毒能力菌株(VD 8和VD-5)在25℃下振荡培养3d后就能在培养滤液中检测到毒素,这比生物测定要早2～3d。将VD-8菌株的孢子以灌根方式接种泗棉3号幼苗5d后,就能从接种幼苗的茎杆和叶柄中检测到毒素,这比幼苗自然发病显症要早3～5d。在测定的30份大田病株茎杆、叶柄、叶脉样品中,阳性样品率为100%。这些结果表明建立的ELISA方法可用于菌株产毒能力的测定和大田棉花黄萎病的早期诊断。  相似文献   

间接竞争性ELISA检测甲胺磷残留   总被引：5，自引：1，他引：5  

董国伟  刘贤进等 《华中农业大学学报》2001,20(5):434-437

采用制备的兔抗血清建立了甲胺磷（methamidophos,MTP)残留的间接竞争性ELISA方法，证明了抗血清的特异性较好，并确立了测定参数：抗血清与包被抗原的最佳工作浓度分别为1：3000和1：5000；最适检测范围为0．01－0．1μg/ml；批内变异系数7．56％，批间变异系数5．70％。  相似文献   

鸡白细胞介素-6原核表达及双抗夹心ELISA方法的建立   总被引：1，自引：0，他引：1  

李卫  彭俊平  谷长勤  胡薛英  张万坡  程国富 《中国兽医学报》2011,31(11)

应用分子生物学技术原核表达ChIL-6，以ChIL-6重组蛋白为免疫原，按免疫程序分别制备兔抗和鼠抗IL-6重组蛋白的多克隆抗体。应用此抗体建立双抗夹心EL-ISA方法后，为了优化此方法本试验对该方法的最佳试验条件、标准曲线、重复性和初步应用进行确定。结果显示，经SDS-PAGE和Western-blot分析，表明ChIL-6在大肠杆菌中正确表达，为了建立检测ChIL6的双抗夹心ELISA方法，本试验应用表达的重组蛋白制备兔抗和鼠抗多克隆抗体。建立的双抗夹心ELISA方法最佳反应条件为包被抗体的质量浓度为50mg／L，4℃过夜；酶标二抗稀释度为1：400，37。C1h；应用该方法检测感染金黄色葡萄球菌后的ChIL-6，其结果与本实验室之前应用人的ELISA试剂盒检测的结果相似。结果表明，本试验建立的检测ChlL-6的双抗夹心ELISA方法可用于临床。  相似文献