Screening of lentiviral vectors carrying effective siRNA targeting S1P2 gene     

YAN Xiao  XIA Ji-yi  CHENG Bo  ZHU Yong-sheng  JIANG Rui 《园艺学报》2017,33(7):1338-1344

AIM:To screen the lentiviral vector carrying siRNA with higher efficiency of suppressing the sphingosine-1-phosphate receptor 2(S1P2) gene expression in the primarily cultured corpus cavernosum smooth muscle cells of spontaneously hypertensive rats (SHR).METHODS:SHR and SD rats (n=5 each) were used for primarily culturing corpus cavernosum smooth muscle cells.The cells were randomly divided into 6 groups:SHR siRNA-1,SHR siRNA-2,SHR siRNA-3,SHR GFP,SHR control (SHR non-transfection group),and SD control (SD rat control group).Each group had 5 samples with 1.0×10⁵ cells of each sample.At 72 h after transfection (MOI=60) with lentiviral vectors carrying S1P2 siRNA into the SHR corpus cavernosum smooth muscle cells,the expression of GFP was observed under fluorescence microscope.The protein expression of S1P2,ROCK1,ROCK2 and eNOS in the corpus cavernosum smooth muscle cells,and the mRNA expression of S1P2,ROCK1 and ROCK2 were determined by by Western blot and RT-PCR.RESULTS:The transfection efficiency of the corpus cavernosum smooth muscle cells in SHR siRNA-1,SHR siRNA-2,SHR siRNA-3 and SHR GFP groups were>80%.Compared with SHR control group,the mRNA levels and the protein expression of S1P2,ROCK1 and ROCK2 in SHR GFP group showed no remarkable changes,while those in SHR siRNA-1,SHR siRNA-2,SHR siRNA-3 and SD control groups were significantly lower than those in SHR control group (P<0.05).The protein expression of eNOS in SHR siRNA-1,SHR siRNA-2,SHR siRNA-3 and SHR GFP groups were not significantly changed as compared with SHR control group,but that in SD control group was significantly higher than that in SHR control group.CONCLUSION:Three groups of siRNA lentiviral vectors targeting S1P2 inhibit the expression of S1P2 in the corpus cavernosum smooth muscle cells of SHR,and by silencing the S1P2 expression,the expression of ROCK1 and ROCK2 is inhibited.Among them,siRNA-1 has the highest inhibitory efficiency.  相似文献   

寄主诱导的基因沉默提高植物真菌病害抗性研究进展     

程伟  李和平  何水林  廖玉才 《作物学报》2017,43(8):1115-1121

寄主诱导的基因沉默(host-induced gene silencing,HIGS)以病原菌生长发育、产孢繁殖、侵染或致病过程中的关键基因作为靶点,在寄主植物中表达针对靶基因的RNAi构建体,在病原菌侵染植物的过程中,摄入相应的ds RNA或si RNA分子,通过识别、结合特异核苷酸序列,干扰病菌靶基因表达,从而抑制病菌侵染和扩展,使植物表现抗病。这项技术为培育基于病原菌特异序列的植物抗病性奠定了基础,显示了巨大的应用潜力。本文综述了利用HIGS技术提高植物真菌病抗性的最新研究进展,总结了国内外利用这项技术改良植物真菌病害抗性的主要策略、技术路线,展望了发展应用前景。  相似文献   

多径衰落信道下OFDM系统的符号同步方法研究     

高亮  谢健 《湖南农业大学学报(自然科学版)》2014,(4):64-67

由于在正交频分复用（OFDM）的系统中存在符号时间同步误差，为了消除这种误差，提出了工作在多径衰落信道的符号时间频移（STO）估计方法，即基于CP的符号时间偏移估计和基于训练符号的符号时间偏移估计，通过仿真对基于循环序列（CP）估计技术的最大似然法（ML）和基于训练符号的最小均方差异法（Classen）两类性能比较分析，在无载波频移条件下，ML算法精确度更高，当存在载波频移时，Classen算法精确度更高。  相似文献   

七星瓢虫对草地贪夜蛾低龄幼虫的捕食能力评价   总被引：3，自引：0，他引：3       下载免费PDF全文

孔琳  李玉艳  王孟卿  刘晨曦  毛建军  陈红印  张礼生 《中国生物防治学报》2019,35(5):715-720

为了评估七星瓢虫Coccinella septempunctata对重大入侵害虫草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda（J.E.Smith）的防控效果，本试验在室内条件下开展了七星瓢虫对草地贪夜蛾1龄、2龄幼虫的捕食功能反应和种内干扰研究。结果表明：七星瓢虫对草地贪夜蛾幼虫的捕食功能反应均符合HollingⅡ模型，七星瓢虫对草地贪夜蛾1龄幼虫的日最大捕食量、瞬时攻击率和处理时间分别为233.100头、1.204和0.103 h；对草地贪夜蛾2龄幼虫的日最大捕食量、瞬时攻击率和处理时间分别为41.220头、1.075和0.582 h。七星瓢虫的搜寻效应随猎物密度的增加而逐渐降低。七星瓢虫对草地贪夜蛾的捕食作用受到较强的种内干扰。试验证明七星瓢虫对草地贪夜蛾具有较好的控害效果，可用于对草地贪夜蛾的防控实践。  相似文献   

ApoB RNA编辑高效蛋白检测体系的构建     

李慧萍江文娇  齐庆远 《安徽农业科学》2014,(10):2865-2867

[目的]建立一个载脂蛋白B(apoB)RNA编辑蛋白检测体系。[方法]在慢病毒表达质粒载体pCSII-CMV-IRES-Neor中插入apoB RNA编辑保守序列,并在其2端嵌入红色荧光蛋白(DsRed)、绿色荧光蛋白(GFP)表达序列,以此慢病载体转染大鼠肝癌细胞系CBRH-7919获得稳定表达。采用共聚焦显微镜测序方法检测apoB RNA的编辑。[结果]目的指示基因能够在CBRH-7919细胞中稳定表达,表现出指征RNA编辑的多色特征。[结论]试验成功构建了在细胞水平上以颜色变化指示apoB RNA编辑的检测体系,该体系为快速检测以apoB RNA编辑为靶的降胆固醇药物筛选提供了基础。  相似文献   

适用于转录组测序的大白菜小孢子总RNA提取方法筛选     

林燕  李菲  张淑江  张慧  章时藩  孙日飞  张振贤 《中国蔬菜》2014,1(11):15

为了找到适用于转录组测序要求的大白菜小孢子总RNA 提取方法，以出胚率较高的吉红82 为试材，以热激诱导处理后的小孢子为研究对象，比较分析了TRIzol 法、改良CTAB 法及超纯试剂盒法3 种方法的RNA 提取效果。结果表明：TRIzol法（磨样）和改良CTAB 法提取的RNA 浓度较高，但完整性较差；超纯RNA 提取试剂盒法提取的RNA 质量最高，且完整性好，能够满足转录组测序的要求。  相似文献   

不同温度下TMV侵染枯斑三生烟的LncRNA差异表达     

贾海燕  宋丽云  徐翔  解屹  张超群  刘天波  赵存孝  申莉莉  王杰  李莹  王凤龙  杨金广 《中国农业科学》2020,53(7):1381-1396

【目的】 筛选不同温度下烟草花叶病毒（Tobacco mosaic virus,TMV）侵染后枯斑三生烟（Nicotiana tabacum var. Samsun NN）差异表达的长链非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNA）,研究lncRNA在枯斑三生烟抗性反应中的作用。【方法】 N基因的温度敏感性使枯斑三生烟在25℃时具备对TMV的抗性、在31℃抗性丧失,在这两个温度条件下对枯斑三生烟接种TMV和磷酸盐缓冲盐水（phosphate buffered saline,PBS）,48 h后提取系统叶总RNA,构建链特异性文库后进行深度测序。对测序结果进行过滤后利用HTSeq将有效数据与近缘品种TN90（N. tabacum var. TN90）基因组比对,筛选得到lncRNA后利用FPKM法估计lncRNA的表达水平。通过edgeR筛选差异表达lncRNA（differentially expressed lncRNA,DElncRNA）,并利用qRT-PCR技术对这一结果进行验证。通过共定位及共表达分析预测DElncRNA的靶基因,通过参考基因组注释、GO和KEGG富集分析研究靶基因的功能。【结果】 4个处理共12个样本经lncRNA-seq各测得约8 000万条clean reads,共获得4 737条已知lncRNA、40 169条新lncRNA。其中64个lncRNA在不同温度条件下TMV侵染后存在差异表达,qRT-PCR测定结果显示这些lncRNA的测序正确率在80%左右,表明本研究所得测序数据具备较高的可信度。对DElncRNA进行靶基因预测,发现一些基因同时被25℃下调和31℃上调的DElncRNA靶向。靶基因注释功能丰富,主要参与植物抗病、激素和代谢等生理过程。部分可能与激素通路相关的lncRNA,在25℃下TMV侵染时呈现下调趋势,而在31℃下TMV侵染则呈现上调趋势。GO富集分析显示靶基因主要参与构成膜、囊泡等组分,具备钙、钾离子通道抑制剂活性等分子功能,使相应离子得以转运引发随后的反应,同时也参与发病、抗原加工和呈现、细胞分裂素代谢等生理过程。KEGG分析发现靶基因显著富集在植物激素信号转导通路,25℃下调和31℃上调的DElncRNA靶基因同时富集在激素信号传导、ABC运输蛋白、苯丙烷类生物合成等通路。【结论】 不同温度（25℃和31℃）条件下TMV侵染枯斑三生烟后,长链非编码RNA差异表达,DElncRNA通过作用于激素信号传导、物质转运等过程参与寄主系统获得性抗性反应。研究结果可为揭示植物系统获得性抗性中lncRNA的调控功能以及新型抗病毒技术开发提供依据。  相似文献   

Variation in RNA-editing sites of chloroplast protein-coding genes in early-maturity mutant induced by carbon-ion beam in Sweet Sorghum     

Ruiyuan Liu  Wenjian Li  Dong Lu  Jiangang Li  Ying Qu  Wenjie Jin  Xicun Dong 《Plant Breeding》2020,139(4):762-778

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油菜种子低亚油酸和亚麻酸含量异交稳定技术的建立     

郎春秀  王伏林  吴学龙  石江华  陈锦清  吴关庭 《核农学报》2016,(9):1716-1721

为降低油菜种子中的亚油酸和亚麻酸含量并使之在异交条件下保持基本稳定,以高油品种CY2作为受体亲本,采用RNA干涉技术沉默油菜内源Bn FAD2基因的表达,抑制油酸脱饱和反应。育成的3个独立转基因株系的亚油酸和亚麻酸含量下降到6%以下,其中亚油酸含量较受体亲本降低78.2%~86.5%,亚麻酸含量降低53.4%~65.8%。将3个转基因株系与2个亚油酸和亚麻酸含量较高的常规品种正反交,F1种子中这2种脂肪酸的含量依然保持在与转基因亲本相仿的低水平。由此可知,通过RNA干涉技术沉默Bn FAD2基因的表达可赋予油菜低亚油酸和亚麻酸含量的异交稳定特性。这一特性的获得对于今后培育异交稳定的高油酸油菜新品种具有重要意义。  相似文献   

试验干扰下土壤中微量元素空间变异性研究     

黄富饶  冉惠文 《安徽农业科学》2015,(9):75-78

[目的]为了解烟草试验站土壤中微量元素的空间变异性,进而为大田试验布局提供依据。[方法]用地统计学方法,分析彭水试验站的耕层土壤养分的空间变异特征。[结果]该站内土壤有效铁、有效铜、有效钙的含量丰富;有效锌和有效锰为中等含量水平,有效硫和有效镁含量从低至高均有分布。各中微量元素间具有显著的相关性。所有元素均可用指数模型和球状模型进行较好拟合;有效锌、有效镁和有效硫由于受结构性因素影响而呈现强空间自相关性;其余元素的空间自相关性由结构性因素和随机因素共同作用而呈现中等空间相关性。Kriging插值显示,东部及东北部较高,中部和西南部区域含量较低;有效铁、有效钙和有效硫的空间分布的规律性差。[结论]该试验站土壤中微量元素含量存在较大的空间变异性。在安排大田试验时,要充分认识这种变异性,合理布局大田试验。  相似文献