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弧菌素合成酶的A结构域在弧菌素的合成过程中发挥着重要作用。使用DNAStar软件对A结构域的蛋白质二级结构进行预测,截取了多组不同氨基酸长度的A结构域片段。使用PCR方法从霍乱弧菌N16961的基因组中克隆了A结构域基因,通过酶切、连接等方法将其构建到表达载体pET-21b(+)上,并在大肠杆菌BL21(DE3)中得到高效表达。在30个不同氨基酸长度的A结构域蛋白片段中获得5个可溶性表达的片段;并且通过三步分离纯化的方法获得了一性状良好、均一和高纯度的A结构域蛋白(N861-1410),从而为A结构域蛋白质晶体生长提供了基础。 相似文献
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旨在分析南美白对虾养殖水体中霍乱弧菌(Vibrio cholerae)的毒力、抗菌素耐药性以及重金属抗性特性,为致病性霍乱弧菌流行预警的研究提供数据支撑。利用聚合酶链反应技术检测了84株霍乱弧菌分离菌株的毒力以及整合接合元件(ICEs)相关基因;采用美国临床与实验室标准研究所(CLSI)标准Kirby-Bauer纸片扩散法以及最小抑菌浓度法测定了受试菌株的抗菌素和重金属抗性;运用脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术对部分受试菌株进行了分子分型。结果显示:受试霍乱弧菌菌株均不携带致病性肠毒素基因ctxA B以及毒素相关基因sto、tcpA、ace、zot;含有毒素表达调控蛋白基因toxR,其中19.05%菌株还含有RTX家族毒素基因rtxA;携带SXT-R391家族ICEs保守功能模块部分相关基因(int、traI、traC、setR、attR)。受试霍乱弧菌菌株对六大类十种抗菌素的耐药性存在显著差异,其中对氨苄西林的耐药率最高为13.10%,其次是庆大霉素(2.38%);利福平、链霉素、氨苄西林、卡那霉素、壮观霉素的中介耐药率为25.00%~1.19%;对四环素、氯霉素、甲氧胺苄嘧啶、复方新诺明均敏感。此外,30%的受试霍乱弧菌菌株对重金属铅、锌具有高度抗性,而对铬、镉、铜、镍、汞、钡敏感;PFGE分子分型可分为5种Not I-PFGE型13种亚型,相似性值为56%~100%。本研究结果为进一步探讨致病性霍乱弧菌的进化起源奠定了基础。 相似文献
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台湾牛蛙感染霍乱弧菌的检验报告 总被引：1，自引：0，他引：1
本文报告从台湾进境的食用牛蛙中多次检出霍乱弧菌，其中O1群霍乱弧菌6批次，非O1和非O139群霍乱弧菌2批次，经、血清学和噬菌体试验确定这些O1群霍乱弧菌均为稻叶型非流行株，动物实验表明这些菌株对小鼠有较强的致病力和致死率。 相似文献
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本文对中国对虾糠虾幼体的一种病原菌———非０１群霍乱弧菌作了研究报道。这种病的症状是病虾运动能力差、趋光性弱、镜检发现肠道肿胀。从垂死病虾中分离到５株细菌，经感染健康糠虾幼体得到与病虾相同症状。５株细菌的４７项形态及生理生化特性与霍乱弧菌相同，但不被０１群霍乱弧菌多价血清凝集。血清学分型结果均为不同的ＶＢＯ血清型ＶＢＯ５，１４，２６，４７，５６。用ＤＮＡ霍乱ＣＴ基因探针菌落原位杂交及小鼠肠结扎法测肠毒素，表明菌株有强毒力。分离菌株对小鼠的ＬＤ５０为１５８×１０８个／只。 相似文献
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为研究霍乱弧菌体内感染机制,寻找新的抗霍乱药物靶标和候选疫苗。以转座子上无启动子的kan-rpsL融合基因作为体内外双重抗生素报告基因,通过与霍乱弧菌埃尔托型C6706接合建立转座子突变库,经体内外各两轮筛选,获得对卡那霉素(Kan)体内抗性体外敏感、链霉素(Str)体外抗性体内敏感的突变株,即转座子插入位点上游包含了能够在体内被诱导激活的启动子。初步建立了筛选霍乱弧菌体内诱导表达基因的成年小鼠模型,最终获得5株阳性克隆。对转座子插入位点进行序列分析,分别为编码渗透敏感型钾离子通道组氨酸激酶的kdpD,谷氨酸合酶大亚基的gltB1,亮氨酰氨基肽酶的pepB以及核苷渗透酶的nupC。对kdpD基因融合lacZ报告基因进行表达调控研究,发现该基因在LB和霍乱毒素诱导培养基AKI中不能被诱导表达。以上结果表明霍乱弧菌通过调节氨基酸及核酸代谢,感知体内外环境来适应宿主体内环境的变化。 相似文献
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基于霍乱弧菌lolB基因保守序列设计1对特异性引物,建立了SYBR GreenⅠ实时定量PCR检测霍乱弧菌的方法。常规PCR检测仅霍乱弧菌扩增出大小为519bp的目的片段,其他3种病原弧菌均为阴性;SYBR GreenⅠ实时定量PCR,在Tm为86.5～87℃,扩增产物的熔解曲线只出现1个单特异峰,无引物二聚体,表明该引物具有较好的特异性。SYBR GreenⅠ实时定量PCR扩增曲线反映了PCR的指数增长阶段和平台阶段;所制作的标准曲线在2.59×108～2.59×100拷贝数之间有较好的线性关系,相关系数为0.993,能对霍乱弧菌进行准确的定量分析。该方法检测时间从核酸抽提到结果分析仅需4～5h,较传统方法敏感、操作简单、耗时短,是霍乱弧菌引起的水产动物疾病的快速诊断及流行病调查的有效方法。 相似文献
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Fangfang Bai 《Aquaculture (Amsterdam, Netherlands)》2008,274(1):36-40
Quorum sensing is a mechanism in which bacteria coordinate the expression of certain genes in response to their population density by producing, releasing and detecting signal molecules called autoinducers. Quorum sensing is responsible for controlling a plethora of virulence genes in several bacterial pathogens. Disruption of the quorum sensing system of Vibrio harveyi has been proposed as a new anti-infective strategy. AiiA is a protein which can block the bacterial quorum sensing by hydrolyzing AHL-lactone, and could greatly attenuate the disease caused by many bacterial pathogens in which quorum sensing regulate the expression of virulence genes. In this study, primers were designed from the conserved sequences of aiiA gene in the genomes of several Bacillus strains, and the gene was amplified from Bacillus thuringiensis BF1 by PCR. AiiA gene was cloned to a cloning vector pUC and sequenced. The open reading frame of the aiiA gene was 753 bp, and the similarity of aiiA gene from B. thuringiensis BF1 to other sequences in the GenBank was as high as 99%. This gene was subsequently cloned into an expression vector pET-24d(+), and the recombinant AiiA protein was overexpressed in Escherichia coli overexpression strain BL21(DE3). The molecular weight of the expressed AiiA protein was estimated to be 28 kDa by SDS-PAGE. The optimized expression condition for the recombinant AiiA protein was at 25 °C for 6 h with 1 mM IPTG induction. The lysate of the recombinant E. coli could not only repress the pigment synthesize of the quorum sensing system reporter strain Chromobacterium violaceum ATCC 12472, but also attenuate the intensity of bioluminescence of V. harveyi VIB391 by 85%. This study was very important for further research on the disruption of infections caused by V. harveyi in aquaculture. 相似文献
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【目的】 筛选抗噬菌体菌株并分析其受体基因突变位点,为解析猪霍乱沙门菌噬菌体抗性突变的产生机制提供理论依据。【方法】 以猪霍乱沙门菌CICC 21501及其裂解性噬菌体vB_SenS_S528（噬菌体S528）为研究对象,通过波动实验筛选自发突变的抗噬菌体菌株,观察菌落形态,并测定其对噬菌体的敏感性、吸附特性、生长曲线及对温度和pH的敏感性。通过全基因组重测序结合PCR验证定位耐受基因突变位点。【结果】 成功筛选出1株抗噬菌体S528的突变菌株,命名为B6-2。B6-2菌落边缘粗糙,与野生菌相比,生长曲线无显著差异,对pH表现出敏感性,在40、50 ℃时表现出温度耐受性。噬菌体S528对抗噬菌体菌株B6-2的吸附率减少60%（对野生菌吸附率为93%）。通过全基因组重测序及比对分析得知,B6-2菌株有3个位点发生了突变,分别为PROKKA_04510基因中2个位点和rfbC基因中的1个位点发生突变。突变基因片段的PCR产物电泳及测序结果均表明,PROKKA_04510基因上的2个位点并未发生突变,而真正发生突变的位点位于rfbC基因的350 bp处,碱基由C突变为T。【结论】 筛选到1株与受体改变有关的抗噬菌体菌株B6-2,其通过rfbC基因上的碱基突变来阻止噬菌体吸附。 相似文献