桃成花基因PpLFY的克隆与表达及多克隆抗体制备   总被引：5，自引：0，他引：5  

安丽君  李天红 《园艺学报》2008,35(11):1573-1580

 以‘八月脆’桃成花诱导期腋芽为试材,克隆得到一个FLORICAULA/LEAFY同源基因,命名为PpLEAFY（PpLFY）,GenBank登录号为EF175869,该基因cDNA全长1 314 bp,ORF为1 248 bp,编码一个含416个氨基酸残基的蛋白,与其他物种中的LEAFY蛋白的同源性较高,为（74.22%~84.69%）。时期及组织特异性表达分析表明,PpLFY主要在叶片、花瓣及成花诱导期及花芽形态分化初期中表达。构建了pGEX-4T-1/PpLFY原核表达系统,获得了可溶性融合蛋白rPpLFY,分子量约为36 kD。利用该蛋白免疫新西兰大白兔,获得了抗rPpLFY的多克隆抗体,ELISA效价为1:10 000。  相似文献   

牦牛EPF的原核表达及多克隆抗体制备     

曹艳桃  樊江峰  余四九  周应聪  杜培岩  李一娟  马进彪  赵生贤 《畜牧兽医学报》2022,53(2):470-480

本试验旨在制备牦牛早孕因子(early pregnancy factor,EPF)多克隆抗体,为牦牛妊娠早期高效快速诊断技术研究奠定基础.采用RT-PCR方法,从牦牛胎盘和卵巢组织中提取RNA,反转录为模板后进行EPF基因扩增,并将其克隆到改造后的载体pET28-His10-Sumo上,构建pET28-His10-Su...  相似文献   

鸡血清载脂蛋白AI浓度单向免疫扩散测定法的研究     

郭小权  曹华斌  胡国良 《江西农业大学学报》2005,27(6):895-897

介绍一种特异、灵敏、简便的蛋鸡血清载脂蛋白AI（apoAI）浓度单向免疫扩散测定法。用磷钨酸镁反复沉淀制备得高密度脂蛋白,经纯化、Bradford法蛋白定量后（3．208mg／mL）,作为新西兰白兔的免疫原及载脂蛋白AI测定的标准。本室免疫所得兔抗鸡apoAI抗血清制成免疫琼脂板,加样培养进行单向免疫扩散测定。本法的标准曲线相关性良好,可信性、重复性满意。  相似文献   

甘蔗线条花叶病毒P1蛋白基因原核表达及抗血清制备     

徐小伟  陈雯  丁诗文  甘海锋  张坤  贺振 《植物保护》2022,48(2):157-161

甘蔗线条花叶病毒Sugarcane streak mosaic virus(SCSMV)是引起甘蔗花叶病的主要病原之一,在世界各大蔗区普遍发生,严重威胁甘蔗产业的发展.建立快速有效的检测方法对于SCSMV的防控有着重要意义.本研究依据SCSMV P1基因序列合成一对引物,扩增获得1 074 bp的目的基因,将目的基因与...  相似文献   

黄鳝(Monopterus albus)H-Y抗原的研究   总被引：6，自引：0，他引：6  

邹记兴 《水产科技情报》1999,26(4):177-181

利用自制的抗Ｈ－Ｙ血清,对黄鳝进行脾淋巴细胞毒性试验,检测各发育时期的性腺,脑,脾及肌肉组织,结果如下：（１）雄性有Ｈ－Ｙ抗原存在,雌性无;（２）性逆转过程中,Ｈ－Ｙ抗原从雌性到雄性是从无到有逐渐递增的;（３）黄鳝经１７α－甲基睾酮处理后,雌性,间性,雄性三个发育阶段Ｈ－Ｙ抗原的存在状况并未发现显著改变。  相似文献   

三疣梭子蟹多克隆抗体与4种经济蟹类血细胞交叉反应的研究     

蔡鑫  邓灯  王颖  王文琪 《水产科学》2017,(3):303-310

采用激光共聚焦扫描显微镜技术、免疫印迹技术和流式细胞术3种方法对鼠抗三疣梭子蟹血细胞多克隆抗体与黄道蟹、日本蟳、中华绒螯蟹、勘察加帝王蟹血细胞的免疫交叉反应进行分析。激光共聚焦扫描显微镜结果表明,该抗体与黄道蟹、日本蟳、勘察加帝王蟹、中华绒螯蟹血细胞均发生了免疫交叉反应,且发生反应的抗原决定簇均位于细胞膜上;流式细胞术测定该抗体与黄道蟹颗粒血细胞和透明血细胞交叉反应阳性率最高,分别为99.45%、98%,与中华绒螯蟹颗粒血细胞和透明血细胞交叉反应阳性率最低,阳性率分别为81.34%、78.56%;免疫印迹结果显示该抗体与日本蟳血细胞结合的蛋白分子量是80、38.5ku;与勘察加帝王蟹血细胞结合的蛋白分子量是80、93ku;与中华绒螯蟹血细胞结合的蛋白分子量是82、41、30ku;与黄道蟹血细胞结合的蛋白分子量是70、43ku。  相似文献   

Development of immunodot blot assay for the detection of white spot syndrome virus infection in shrimps (Penaeus monodon)     

Mudagandur S Shekhar  Gopalapillay Gopikrishna 《Aquaculture Research》2010,41(11):1683-1690

The VP 28 gene encoding a structural envelope protein of the white spot syndrome virus (WSSV) was cloned into a pET32a(+) expression vector for the production of the recombinant VP28 protein. A purified recombinant protein of 39.9 kDa size was used for polyclonal antibody production in rabbit. Specific immunoreactivity of the rabbit anti rVP28 antiserum to the viral antigen was confirmed by a Western blot. The specificity of this polyclonal anti‐rVP28 antiserum to detect the presence of the virus in WSSV‐infected Penaeus monodon was verified using a immunodot blot assay. Immunodot blot showed a positive reaction in infected shrimp tissues with prominent colour development using 3,3′,5,5′‐tetramethylbenzidine (TMB) as a chromogenic substrate when compared with 3–3′ diaminobenzidine tetrahydrochloride (DAB). Highest signal intensities of the immunodots were observed in infected shrimp pleopod extracts and haemolymph. On comparison with polymerase chain reaction (PCR), immunodot blot could detect 76% of PCR‐positive WSSV‐infected shrimp samples. Immunodot blot was found to be equivalent to first‐step PCR sensitivity to detect WSSV particles estimated to contain 1.0 × 10⁵ viral DNA copies.  相似文献   

西瓜花叶病毒抗血清制备及其应用     

冀树娴  王姝雯  王健  李向东  朱天生  田延平 《植物病理学报》2018,48(6):833-837

 西瓜花叶病毒(Watermelon mosaic virus, WMV)是危害葫芦科作物的重要病毒。制备特异性强、效价高的抗血清对快速准确检测和鉴定WMV具有重要意义。本研究将WMV外壳蛋白(Coat protein,CP)基因克隆到原核表达载体pEHISTEV获得pEHISTEV-WMV-CP。将pEHISTEV-WMV-CP转化大肠杆菌Rosetta,经IPTG诱导,成功表达出分子量约为36 kDa的蛋白,与预期WMV CP大小一致。切胶回收WMV CP,与等体积弗氏不完全佐剂充分乳化后免疫健康新西兰大白兔。Western blotting结果表明,制备的抗血清与WMV CP有反应,与同属的番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)、马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)、小西葫芦黄花叶病毒(Zucchini yellow mosaic virus, ZYMV)和烟草花叶病毒属的黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)均无反应。酶联免疫吸附测定(PTA-ELISA)结果表明,本研究制备的WMV抗血清效价为1∶8 192,并且能够检测稀释512倍的病毒汁液。利用该抗血清对田间采集的10个RT-PCR检测为阳性的样品进行检测,全部呈现阳性。本研究利用大肠杆菌表达的CP制备的WMV抗血清具有较高的特异性和灵敏度。研究结果为WMV的快速检测和鉴定奠定了基础。  相似文献   

甘薯褪绿矮化病毒RNase3蛋白的原核表达及抗血清制备     

秦艳红  乔奇  王爽  张德胜  王永江  田雨婷  张振臣 《植物保护》2018,44(3):138-141

以本实验室保存的重组质粒为模板,利用PCR方法扩增获得了甘薯褪绿矮化病毒SPCSV的RNase3基因,RNase3基因由690个核苷酸组成,编码229个氨基酸。将RNase3基因克隆到原核表达载体pET-28a(+),转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,对诱导产物进行SDS-PAGE分析。结果表明,RNase3在大肠杆菌中能高效表达,融合蛋白分子量约为26.5kD。以表达的融合蛋白为抗原,免疫家兔,制备了SPCSV-RNase3的特异性抗血清。ACP-ELISA检测结果表明,制备的抗血清对RNase3融合蛋白的效价达10万倍。  相似文献   

吉富罗非鱼mIgD基因恒定区序列的原核表达及多克隆抗体的制备     

王培  王蓓  鲁义善  简纪常  吴灶和 《安徽农学通报》2016,22(8):10-13

实验采用原核表达方法成功获得吉富罗非鱼m Ig D基因恒定区融合蛋白,同时利用纯化的MIGD融合蛋白,制备了兔抗MIGD多克隆抗体。ELISA检测MIGD融合蛋白效价高达1∶512 000,说明MIGD蛋白具有较强的免疫原性,可以诱导罗非鱼机体产生相应较强的免疫应答。  相似文献