荧光标记技术在新型农用化合物创制中的应用现状及进展     

文鼎  张亚  刘双清  王翀  廖晓兰 《河南农业科学》2023,(9):1-13

荧光标记技术广泛应用于现代社会的各个方面，但其在农用化合物创制领域的应用鲜见综述。基于近10 a国内外农用化合物创制领域的荧光标记技术相关文献，系统总结了荧光标记技术中荧光染料的种类，综合介绍了荧光探针技术和免疫荧光技术在新型农用化合物创制领域的应用现状及进展，分析了目前荧光标记技术在新型农用化合物创制领域存在的局限与不足，并对未来荧光标记技术的发展趋势进行了展望。  相似文献   

鳜下丘脑神经元细胞培养     

旷玉兰  梁旭方  蔡文静  何珊  徐晶  高俊杰  魏君冉 《水产学报》2021,45(2):179-186

为了建立可行、高效的下丘脑神经元细胞技术,本研究通过分离鳜下丘脑组织,用Ⅰ型胶原酶将组织消化成单细胞悬液,并用完全培养液进行培养,在培养的第3、4、5和6天观察细胞的形态.结果 显示,培养第3天时细胞贴壁量少,胞体小并且呈单个分布;在培养第4天,细胞的数量显著增多,且具有典型的神经元的形态,胞体饱满;第5天神经元胞体的...  相似文献   

鸡异质核糖核蛋白AB单克隆抗体的制备及鉴定     

罗俊  党露  郑鹿平  刘金玲  柴书军  赵东  杨艳艳  滕蔓 《河南农业科学》2022,51(2):127-132

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3型鲤疱疹病毒白介素10单克隆抗体制备与鉴定     

陈静  张艳维  刘琴  朱晓真  贾钊  王俊亚  高娃  贾智英  桂朗  邹钧 《上海海洋大学学报》2024,(1):18-29

白介素（Interleukin,IL）10是脊椎动物Th2细胞（T helper 2 cell）和先天淋巴细胞（Innate lymphoid cell）分泌的一种多效应细胞因子。3型鲤疱疹病毒（Cyprinid herpesvirus 3, CyHV3）ORF134编码IL10样蛋白,本研究构建了ORF134原核表达质粒,在大肠杆菌DE3感受态细胞中表达CyHV3-IL10重组蛋白。SDSPAGE分析结果表明,重组CyHV3-IL10蛋白约为18 ku,主要以包涵体形式表达。将CyHV3-IL10包涵体进行变性和复性,经分子筛凝胶柱层析纯化获得了纯度较高的重组CyHV3-IL10蛋白,利用CyHV3-IL10重组蛋白免疫小鼠制备了单克隆抗体,通过酶联免疫吸附测定法（Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）筛选,获得了2株亲和力强的抗体,并利用激光共聚焦技术和Western blotting对抗体进行鉴定。结果表明,FITC标记的单克隆抗体能够特异性识别HEK293细胞中表达的CyHV3-IL10重组蛋白和感染CyHV3的镜鲤脾和鳃组织中表达的C...  相似文献   

灵武长枣叶片阿拉伯半乳糖蛋白分布特征          下载免费PDF全文

陶珊珊  王静  章英才  白琳  刘迎雪 《干旱地区农业研究》2023,(5):22-31

以膨大前期、快速膨大期、着色期和完熟期灵武长枣叶为试验材料，通过免疫荧光定位的方法，研究不同发育时期灵武长枣叶阿拉伯半乳糖蛋白(AGPs)的分布特征。结果表明：不同时期叶表皮细胞外切向壁均较厚，抗体所识别的抗原荧光AGPs分布较多，形成了较厚的角质层；垂直于叶片方向的细胞壁较薄，抗体所识别的抗原荧光AGPs分布较少，下表皮气孔保卫细胞分布着少量AGPs。叶肉全部由发达的栅栏组织细胞组成，不同发育时期叶肉细胞壁和细胞内部均密集分布着抗体所识别的抗原荧光AGPs,是叶AGPs分布的主要部位。主脉维管束木质部、形成层和韧皮部细胞壁和细胞内部均分布着大量抗体所识别的抗原荧光AGPs,但快速膨大期主脉AGPs相比其他时期略有减少；而位于叶肉中的侧脉和细脉维管束木质部和韧皮部细胞壁和细胞内部始终分布着大量抗体所识别的抗原荧光AGPs;不同时期主脉、侧脉和细脉维管束鞘中均没有抗体所识别的抗原荧光AGPs分布，可能与维管束鞘细胞中分泌物的形成有关。主脉和侧脉处表皮下的机械组织和薄壁细胞细胞壁分布着较多抗体所识别的抗原荧光AGPs;薄壁组织中的分泌道内部没有AGPs荧光分布。以上结果表明不同时期叶表皮细...  相似文献   

蜕皮激素氧化酶基因在家蚕丝腺中的表达特征及重组表达分析     

刘雪冰  李珊  张基开朗  杨宏国  程廷才  刘春 《蚕学通讯》2023,(2):1-9

昆虫蜕皮激素氧化酶(EO)是分解蜕皮激素的关键酶之一，该酶通过蜕皮激素3位异构化途径将蜕皮激素分解成3异构化蜕皮激素，从而调控蜕皮激素的滴度。课题组前期通过家蚕转录组学分析发现一个在丝腺组织特异表达的蜕皮激素氧化酶基因(EOs),为了研究该基因的时空表达模式及蛋白质功能，对丝腺蜕皮激素氧化酶基因的表达谱进行了分析，同时利用原核表达系统对其进行重组表达及分离纯化。RT-PCR和qRT-PCR检测表明，EOs在家蚕幼虫5龄期的丝腺组织特异表达，且主要在中部丝腺的前部表达；免疫荧光实验结果表明，EO不仅存在于家蚕中部丝腺细胞，而且还会分泌到丝腺腺腔中。将EOs全长cDNA克隆到pMD-19T载体中，再进一步亚克隆到原核表达载体PET-28a,然后将构建好的pET28-BmEOs质粒转入大肠埃希菌BL21中进行表达，通过SDS-PAGE检测发现在1 mmol/L IPTG诱导后的上清中有一条大小约60 kD的蛋白质条带，经Western blot检测该蛋白质可与抗体发生特异性结合，表明BmEOs被成功表达。将大量上清经过Ni亲和柱纯化后，获得了纯化的目的蛋白质。研究结果为进一步分析丝腺中蜕皮激...  相似文献   

新型番鸭细小病毒Rep蛋白羧基端亚片段的原核表达及多克隆抗体制备     

胡非凡  梁齐章  黄瑜 《福建农业学报》2023,(8):889-893

【目的】获得特异性识别新型番鸭细小病毒（New-genotype muscovy duck Parvovirus,N-MDPV）Rep蛋白羧基端亚片段的多克隆抗体。【方法】通过蛋白序列分析，选取N-MDPV Rep羧基端亚片段区域487～627 aa，后全基因合成序列，并在其C末端添加His-tag标签，利用无缝克隆的方法，将该段基因克隆至pET-28a(+)载体，随后转化Rosetta(DE3)大肠杆菌，诱导表达得到重组蛋白。利用镍柱亲和层析技术纯化表达重组蛋白，将纯化的重组蛋白免疫新西兰白兔，制备针对Rep蛋白羧基端亚片段的多克隆抗体。【结果】构建了pET-28a-Rep-487-627原核表达质粒，纯化表达了该重组蛋白。SDS-PAGE结果表明该重组蛋白分子大小约24 kDa，主要以可溶性形式表达。间接免疫荧光和免疫印迹试验表明制备的多克隆抗体能与细胞内过表达的N-MDPV Rep蛋白特异性反应。【结论】制备的Rep多克隆抗体具有良好反应特异性，可识别Rep蛋白的构象表位和线性表位，满足进一步研究的需要。  相似文献   

不同方法检测乳腺癌循环肿瘤细胞的诊断价值研究     

王一恬  高瑜振  钟晓力 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》2021,42(5):45-50,60

以一年内临床收治的乳腺癌和乳腺纤维瘤患者为研究对象,同期健康者为对照,利用微流控免疫磁珠筛选十免疫荧光检测法(Microfluidic-beads)、差异富集-荧光免疫染色原位杂交技术(SE-iFISH)、RNA原位杂交法(RNA-FISH)3种方法对研究对象外周血循环肿瘤细胞(CTCs)进行检测,比较观察组和对照组CTCs阳性检出率的差异,探究不同检测方法对乳腺癌患者的CTCs检测效果及诊断价值.结果 表明:采用SE-iFISH法和RNA-FISH法检测时,观察组患者阳性检出率较高,分别为88％和100％.但采用Microfluidic-beads法时,观察组患者阳性检出率较低,仅为48％.基于CTCs的检测表征乳腺癌方面,SE-iFISH法和RNA-FISH法具有较高的灵敏度及特异性.这一研究对后期乳腺癌患者的临床诊断与治疗具有一定的指导意义.  相似文献