王鸽脑神经细胞原代分离培养与纯化的研究     

王敏  崔雅莉  李文军  徐世文  李术 《东北农业大学学报》2008,39(3):84-87

研究采用7～8日胚龄的王鸽脑组织,采用胰蛋白酶消化法制备神经细胞悬液,接种于包被多聚赖氨酸的6孔培养板中培养,用阿糖胞苷抑制非神经细胞的生长,以寻求一种简单、可行的原代王鸽脑神经细胞培养方法。结果表明,试验成功地进行了原代王鸽脑神经细胞培养、纯化,并保证有足够数量的神经元存活,证明酶消化法原代培养王鸽脑神经细胞是一种可靠、稳定的获得神经元的方法。  相似文献   

鲤疱疹病毒Ⅱ型对异育银鲫背鳍细胞的显微形态与免疫基因表达水平的影响     

夏思瑶  王浩  Patorida Podok  许丹  姜有声  吕利群  佐野元彦 《水产学报》2016,40(12):1915-1922

为研究鲤疱疹病毒Ⅱ型(Cy HV-2)体外感染复制特征以及异育银鲫抗病毒免疫应答反应。本实验采用组织块培养法建立了异育银鲫背鳍细胞的原代培养体系。结果显示,在10 d左右可观察到组织块迁移分离出新的单层细胞,3周左右细胞可覆盖底部面积为25cm2培养瓶的底部;经Cy HV-2悬液感染离体培养的原代细胞,3 d后病毒滴度增殖至106拷贝/m L;在病毒感染6 d后出现典型的细胞病变效应;Cy HV-2感染原代细胞后,分析前期通过鱼体水平实验鉴定出的与该病毒感染相关的免疫基因:PNP5a、MPO、MHCⅠ、LYZ-C、IL-11、ITLN、PNP5a和DUSP,Real-time Rt-PCR结果显示大部分基因在细胞水平均有显著性的上调,与鱼体水平实验结果一致。本研究建立了原代培养的异育银鲫背鳍细胞,用于构建体外感染Cy HV-2病毒的细胞模型,为深入研究Cy HV-2的感染复制规律及其与宿主的相互作用关系,以及细胞水平筛选抗病毒药物实验奠定了基础。  相似文献   

斜带石斑鱼肝细胞分离及原代培养方法的建立     

骆源  张春晓  王玲  张冬玲  霍振华  宋凯 《水产学报》2016,40(4):558-565

本研究以斜带石斑鱼肝细胞为实验对象,在不同培养条件下进行原代培养,旨在探讨稳定可靠的斜带石斑鱼肝细胞分离及原代培养方法。采用组织块分离法和胰蛋白酶(含EDTA)消化法分离肝细胞,并通过密度梯度离心法分离纯化肝细胞,细胞悬液于DMEM/F-12、M199和L-15培养液中培养;细胞活力及数量采用血球计数板计数,并通过MTT法测定细胞增殖率;同时,测定不同时间培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性、白蛋白(ALB)和尿素氮(BUN)的含量,以分析肝细胞生长状态。结果表明,组织块方法不适于斜带石斑鱼肝细胞的培养,未见细胞从组织块中迁出,而胰蛋白酶消化法获得良好稳定的培养效果,细胞产量达到1.6×108个/g肝重,活细胞数达到95%;L-15培养基细胞生长明显优于DMEM/F-12和M199培养基;启动原代培养的48~72 h阶段肝细胞生长代谢旺盛,培养上清液中LDH活性显著降低,ALB和BUN含量显著升高。结果显示,0.25%的胰蛋白酶常温消化法适合斜带石斑鱼肝细胞的分离,斜带石斑鱼肝细胞原代培养的最适培养基为L-15培养基,肝细胞在启动原代培养的48~72 h生长代谢旺盛。  相似文献   

喹乙醇诱导鲤肝细胞凋亡的研究   总被引：6，自引：0，他引：6  

汪开毓 《水产学报》2004,28(6):733-737

细胞凋亡(apoptosis)是受基因控制的细胞自主的有序死亡。凋亡细胞的形态特征主要表现为细胞核的染色质浓缩,边移,聚集在核膜下,进而核发生裂解,核碎片与细胞碎片有单层膜包裹形成凋亡小体(apoptosisbody)[1]。目前已发现某些物理因素(辐射、高温等)、细胞因子、病毒感染和  相似文献   

一起雏鸭黄曲霉毒素中毒的诊治     

梁林 《广西畜牧兽医》2015,(1):41

<正>雏鸭黄曲霉毒素中毒是一种严重的中毒性疾病,是由于雏鸭误食了被黄曲霉毒素或寄生曲霉污染了的饲料而引起。黄曲霉毒素主要对肝脏造成损害,可引起肝细胞变性、坏死。临床上以肝功能障碍、全身出血、消化机能紊乱、腹水、神经症状为特征。各种畜禽均可发生本病,尤其以雏鸭最为敏感,表现为与雏鸭病毒性肝炎相类似的神经症状,并出现大量死亡,容易被误诊为雏鸭病毒性肝炎。1发病情况广西桂平市某养殖场2014年4月初购进近  相似文献   

地塞米松对猪原代脂肪细胞分化及perilipin和PPARγ mRNA表达的影响     

张晓威  梁静  杨晓静 《中国兽医学报》2010,30(12)

由断奶仔猪皮下脂肪分离血管基质细胞,增殖培养至80%融合时以10-6mol/L地塞米松处理48 h,同时设地塞米松拮抗剂RU486对照组。采用油红O染色提取法测定细胞内甘油三酯含量,相对定量实时荧光PCR方法检测细胞perilipin,GR,C/EBPβ,PPARγmRNA表达。结果显示,地塞米松显著增加细胞甘油三酯含量(P0.05),添加RU486后这种作用显著降低(P0.05);地塞米松处理组细胞中perilipin,PPARγ的mRNA表达显著高于对照组(P0.05),而C/EBPβmRNA表达较对照组显著降低(P0.05);GR mRNA表达与对照组相比无显著差异。以上结果提示:地塞米松能显著促进猪原代脂肪细胞的分化,这种作用可能通过上调perilipin mRNA表达而实现,其中PPARγ基因参与了调节。  相似文献   

新西兰兔肌内和皮下前体脂肪细胞原代培养与诱导分化的研究     

陈涛  马立霞  李志鑫  曾勇庆  陈伟 《中国畜牧杂志》2019,(6):39-44

为建立新西兰兔前体脂肪细胞的体外培养模型,比较新西兰兔肌内和皮下前体脂肪细胞分化过程中相关基因的差异表达,实验采集 1 日龄新西兰兔背最长肌和皮下脂肪组织,采用胶原酶消化方法,分别从 2 种组织中分离前体脂肪细胞,进行细胞原代培养,绘制细胞生长曲线,并对肌内和皮下前体脂肪细胞诱导分化,利用 RT-PCR 检测相关基因的表达变化。结果表明:细胞在分离后 2 h 已经贴壁,24 h 时呈现出短梭形的细胞形态,第 2 天细胞变成长梭形,第 3 天进入对数生长期。肌内和皮下前体脂肪细胞在诱导分化后均被油红O 染色,皮下前体脂肪细胞的脂质积累在诱导分化的第 2 天显著高于肌内前体脂肪细胞(P<0.05);荧光定量结果表明,肌内和皮下前体脂肪细胞 CCAAT 增强子结合蛋白(C/EBPα)基因的表达趋势在诱导分化过程中相同,肌内前体脂肪细胞过氧化物酶体增殖激活受体(PPARγ)第 4 天的表达量显著高于第 6 天,而皮下前体脂肪细胞 PPARγ表达量差异不显著;肌内前体脂肪细胞脂蛋白脂肪酶(LPL)表达量在第 0天和第 2天差异不显著,而皮下前体脂肪细胞第 2 天显著高于第 0 天(P<0.05);肌内前体脂肪细胞脂肪酸合酶(FAS)基因第 0、2、4 天的表达量差异不显著,而皮下前体脂肪细胞第 2、4 天显著高于第 0 天(P<0.05)。本研究成功构建了新西兰兔肌内和皮下前体脂肪细胞的体外培养和诱导分化模型,并发现皮下前体脂肪细胞分化早于肌内前体脂肪细胞,为进一步研究新西兰兔前体脂肪细胞的分化机制和脂肪沉积奠定基础。  相似文献   

绵羊耳成纤维细胞的体外培养   总被引：5，自引：1，他引：5  

李桂芳  李岩  赵宗胜  李大全 《中国草食动物》2003,23(4):5-7

用组织块法和冷消化法对绵羊耳成纤维细胞在含血清培养液(RPMI—1640)中进行原代和传代培养，探讨动物体细胞培养模式，并对正常细胞形态进行观察。结果表明组织块法和冷消化法培养可获得比较均一、稳定的细胞群，细胞呈典型的成纤维形态，并成功进行传代培养，建立了绵羊耳成纤维细胞系。  相似文献   

新生仔猪肝脏发育的肝细胞生化分析     

陈才勇  王恬  霍永久  许若军  周根来 《畜牧兽医学报》2005,36(2):153-157

选择新生仔猪15头，分别于出生当日(0 d)、出生后3d及7d屠宰取样，制作肝脏电镜切片进行组织学分析，并测定肝脏中DNA、RNA含量及常规生化指标。结果显示：新生仔猪肝细胞中内质网、线粒体等细胞器都很丰富，而且各细胞器的结构已经发育成熟。肝脏质量在仔猪出生后1周尤其是3d内迅速增加(P＜O．01)，远远快于体重增加的速度。仔猪肝脏的蛋白质含量在生后1周也迅速增加(P＜O．01)；而肝糖原贮备在刚出生时较高，出生后迅速下降(P＜O．01)。仔猪出生后肝脏中DNA和RNA浓度的变化趋势正好相反，前者在出生后3d内明显下降(P＜O．05)，4～7d又有增加趋势，而RNA浓度以3d为最高。试验结果表明，仔猪到出生时肝细胞的结构和功能基本发育成熟。仔猪出生以后，肝脏的生长发育十分迅速，不仅肝细胞的数量快速增加，肝细胞的体积也不断增大。  相似文献   

高铜对雏鸭肝氧化状态及肝细胞凋亡的影响     

赵丽  崔恒敏杨帆彭西  邓俊良 《中国兽医科技》2008,38(1):54-58

将360只1日龄天府肉鸭随机分为6组,分别以对照日粮（Cu8mg／kg）和高铜日粮（Ⅰ组：Cu100mg／kg;Ⅱ组：Cu200mg／kg;Ⅲ组：Cu400mg／kg;Ⅳ组：Cu600mg／kg;Ⅴ组：Cu800mg／kg）饲喂6周,研究日粮铜水平对雏鸭肝氧化状态及肝细胞凋亡的影响。结果显示,与对照组比较,Ⅳ组和Ⅴ组肝铜锌SOD和谷胱甘肽过氧化物酶活性降低（P〈50．01）,Ⅲ组、Ⅳ组和Ⅴ组羟自由基和丙二醛含量显著升高（P〈0．01）,Ⅰ组和Ⅱ组肝铜锌SOD和谷胱甘肽过氧化物酶活性升高（P〈0．01）。高铜组肝细胞凋亡率随日粮铜水平的升高而增加。表明,日粮铜水平为400mg／kg以上时可引起肝抗氧化功能降低和肝细胞凋亡率升高。  相似文献