CHO表达生长激素释放因子的生物活性测定     

任晓慧  刘松财  张永亮  欧阳红生  赵建军  张玉静 《吉林农业大学学报》2003,25(6):672-673

在对生长激素释放因子(GRF)基因改造和化学合成，并构建了其真核表达载体pCDNA3-GRF(1-32)的基础上．用Lipofectin将上述载体转染CHO细胞进行瞬时表达，采用体外单层垂体细胞培养的方法对表达的GRF(1-32)进行了体外生物活性测定，即先将垂体用酶进行消化，再将消化细胞培养，形成单层细胞，利用其能合成与释放生长激素的能力来检测GRF的活性。结果表明：表达产物可刺激生长激素释放，并且比对照组提高3．8倍，  相似文献   

绿脓杆菌外毒素A与人组蛋白H4嵌合蛋白基因克隆及其原核表达载体的构建     

邓景致  欧阳红生  涂长春  朱平  张国利  廖晓萍  薛崧 《黑龙江八一农垦大学学报》2002,14(3):60-63

设计引物以pCDPT2质粒(含PEA全序列)为模板亚克隆获得PEA功能区Ⅰa及功能区Ⅱ基因片段(1100 bp); 提取人染色体DNA作为模板,利用一对设计引物扩增获得了人组蛋白H4基因片段(316 bp);将两基因片段连接,构建了融合基因中间载体pMD-18T-PEA-H4;融合基因经NcoⅠ及XhoⅠ酶切,以正确阅读框架插入相同酶切的pET-28A中,经酶切分析及PCR扩增检测,筛选到阳性克隆,其质粒测序结果表明成功地构建了毒性基因缺失的PEA与人组蛋白H4融合基因的原核表达载体,为进一步表达并获得大量的融合蛋白奠定了基础。  相似文献   

Cloning and Identification of Porcine HSPC117Gene Differentially Expressed in F1 Crossbreds and Their Parents     

XIE Hong-tao  LEI Ming-gang  XIONG Yuan-zhu  DENG Chang-yan  JIANG Si-wen  LI Feng-e  ZUO Bo  XU De-quan 《中国农业科学(英文版)》2007,6(5):613-619

  相似文献   

新城疫病毒HN基因克隆及其在大肠杆菌中的表达     

刘铀  毕英佐  曹永长 《西南大学学报》2004,26(6)

用RT-PCR方法扩增新城疫病毒HN基因并将其克隆至T载体,测定其核苷酸序列.尔后用PCR扩增球状头部编码区,并将其克隆至pSOC质粒soc基因3端EcoR Ⅰ位点,重组质粒pSOC-HN转化E.coli BL-21(DE 3)感受态细胞,以终浓度1 mmol/L的IPTG诱导表达,在SDS-PAGE凝胶上可检测到分子量约67 KD的融合蛋白特异条带,west-blot证实表达产物与NDV抗血清具有良好的反应性.  相似文献   

农杆菌介导葡萄糖氧化酶基因转化油菜   总被引：1，自引：0，他引：1  

何晓兰  刘桂华  张保龙  佘建明  阮庆霞  薛启汉  倪万潮 《江苏农业学报》2007,23(6):546-551

以甘蓝型油菜带柄子叶为转化受体材料,采用农杆菌介导法进行葡萄糖氧化酶(Glucose oxidase,GO)基因的转化,经卡那霉素抗性筛选获得大量的不定芽.PCR检测结果显示其中22株呈阳性.淀粉-KI染色结果表明在转基因植株中检测到H2O2.在转基因植株×非转基因植株(F1代)中,卡那霉素抗性筛选显示86%的株系呈现典型的孟德尔单基因显性遗传.F1代盛花期茎秆菌核病活体接种结果证实,转基因植株后代菌核病抗性明显提高.证实GO基因已转入油菜植株中并得到有效表达.  相似文献   

昆虫抗真菌肽基因的分泌型表达及活性鉴定     

桑延霞  邓小娟  杨婉莹  刘文权  王文献  黄亚东  曹阳 《中国农业科学》2007,40(4):842-849

 【目的】黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)抗真菌肽Drosomycin (Drs)及其同系物Drosomycin-like C (Drs-lC)和斑腹刺螠蝽(Podisus maculiverntris)抗真菌肽Thanatin对丝状真菌具有广谱高效的抑杀作用。实现抗真菌肽基因在酵母中的高效分泌型表达，对探讨利用转基因酵母的发酵液直接进行果蔬、食品和农产品防腐保鲜的生物技术研发有重要意义。【方法】将Drosomycin基因（Drs）及其同系物基因Drs-lC和Thanatin基因分别与酵母分泌型表达载体pPICZαA重组，构建成重组表达质粒pPICZαA-Drs、pPICZαA-Drs-lC和pPICZαA–Thanatin。利用电转化将重组质粒转化毕赤酵母GS115，经表型筛选和PCR鉴定获得的重组毕赤酵母转化子，在甲醇诱导下进行抗真菌肽的分泌表达。【结果】3种抗真菌肽基因的酵母表达产物对6个供试真菌中的5个有明显的抑制作用，Thanatin同时对供试细菌有抗菌活性。【结论】Drs、Drs-lC和Thanatin抗真菌肽基因成功地转化毕赤酵母，并实现其分泌型表达。  相似文献   

缺失GDD保守区的黄瓜花叶病毒复制酶基因的克隆及植物表达载体构建          下载免费PDF全文

温瑞  郑重  周雪平 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》2001,27(5):531-534

以CMV亚组1株系Fny-CMV RNA2基因组为模板,根据其序列设计引物进行PCR扩增,得到2.5 kb的全长复制酶基因扩增产物.对此产物进行纯化,并用NcoI和BspHI进行双酶切,得到3个片段,将不含有GDD保守区的2个片段用T4 DNA连接酶连接,并对连接产物进行PCR扩增,得到2.2kb左右缺失GDD保守区的黄瓜花叶病毒复制酶基因的扩增产物.将其克隆到pGEM-T Easy Vector上,进行序列测定,结果表明GDD保守区确已缺失.该缺失不导致开放阅读框架的移码将缺失GID保守区的基因定向克隆到植物表达载体pBI121中,并经三亲交配导入根癌农杆菌中,经PCR及酶切鉴定,证实质粒已被导入.  相似文献   

溶菌酶基因合成及其原核表达          下载免费PDF全文

刘兴敏  何自福  李华平  虞皓 《华南农业大学学报》2007,28(1):55-57

根据T4噬菌体溶菌酶的氨基酸序列,选用植物偏爱的密码子设计并人工合成了溶菌酶基因,并在N-端加上23个氨基酸残基的α-淀粉酶信号肽序列和信号肽酶切位点HQP;用苷氨酸残基替代C-端的酰胺;新基因全长为576 bp,共编码190个氨基酸.为了检测该基因生物活性,将其克隆到原核表达载体pET28b( )中,导入宿主细菌E. coli BL21(DE3) pLysS,经IPTG诱导后,宿主细菌在2 h内全部被溶菌酶基因的表达产物裂解,说明该溶菌酶基因对细菌具有很强的抗性.  相似文献   

双表达H9N2禽流感病毒HA基因的假型重组杆状病毒系统的构建          下载免费PDF全文

林文耀  樊惠英  程晓亮  陈筱薇  叶煜  廖明 《华南农业大学学报》2011,32(2):80-84

以含有H9N2禽流感病毒HA基因的重组质粒pMD18-H9HA为模板,扩增HA基因,将其亚克隆入杆状病毒表面展示质粒pBACsurf-1中,再次将含有H9HA及gp64的基因片段克隆到质粒pcDNA3.1(+),获得重组质粒pcDNA-H9-HA.然后将含有CMV启动子、H9HA及gp64的基因片段克隆到杆状病毒转移质...  相似文献   

英语委婉表达中语用失误原因分析     

熊永红 《中南林学院学报》2003,23(3):94-96

针对英语委婉表达中的语用—语言失误和社交—语言失误现象。从语用的角度。分析了英语委婉表达中语用失误的原因；语境差异、语体差异、词汇感情色彩差异、文化习惯差异以及对语用原则遵守与取舍的差异．  相似文献