苎麻咖啡酰辅酶A甲基转移酶基因原核表达及其结构分析     

陈建荣  郭清泉  张学文  陈金军 《勤云标准版测试》2008,(12)

为了研究苎麻木质素合成关键酶——咖啡酰辅酶A-甲基转移酶(CCoAOMT)基因编码的酶蛋白,了解其结构特点;采用原核表达系统——大肠杆菌表达系统pQE,对苎麻CCoAOMT cDNA编码区进行了高效表达,获得了分子量为29.4kD的苎麻CCoAOMT融合蛋白。采用SwissModel服务器模拟构建了该酶蛋白的空间结构。并利用InsightII软件包中的Docking模块构建了该酶蛋白与辅酶Sinapoyl、SAH和Ca2 相互作用的复合物的结合模型,并利用Discover模块对模拟的结构进行结构优化。可以推知所克隆的苎麻CCoAOMT cDNA编码了咖啡酰辅酶A甲基转移酶,具有O-甲基转移酶蛋白典型的催化功能,参与苎麻木质素单体前体的甲基化反应。  相似文献   

弓形虫ROP2基因在大肠杆菌内高效表达条件的优化     

江涛赵年彪  赵俊龙 《长江大学学报》2007,4(2):60-62

采用SDS-PAGE方法检测弓形虫(Toxoplasma gondii)棒状体蛋白(Rhoptry protein)ROP2基因原核表达质粒在大肠杆菌BL21Codon Plus中的表达量。通过改变菌体密度、诱导剂浓度和诱导时间进行高效表达条件的优化。结果显示,在菌体密度D600nm为0·6、IPTG浓度为0·4mmol·L-1和诱导表达3.5h时,融合蛋白的表达量最大,达到159mg·L-1培养液。这为利用重组ROP2研究和制备弓形虫病的诊断抗原奠定基础。  相似文献   

山羊痘病毒结构蛋白P32基因的表达   总被引：2，自引：0，他引：2  

张强  马维民  吴国华  颜新敏  李健  朱海霞  朱彩珠  吴润  刘湘涛  才学鹏 《甘肃农业大学学报》2007,42(5):5-8

将山羊痘病毒结构蛋白P32基因从重组质粒pMD-P32中亚克隆至pGEX-4T-1原核表达载体上,用构建的重组表达质粒pGEX-P32转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,1 mmol/L IPTG诱导表达,细菌裂解物经SDS-PAGE检测到分子量约为58 ku的目的蛋白,与预期的产物大小一致.Western-blotting表明该重组蛋白可被山羊痘阳性血清所识别.  相似文献   

运用差异显示技术分离水花生在干旱胁迫下表达上调的基因     

高建明  肖强  尹亮  何光源 《农业科学与技术》2007,8(1):2-6

干旱发生时,水花生的须根将转变成又长又粗的肉质根,这有利于保水和从土壤深处汲取水分以减轻旱害.本研究中采用差异显示技术克隆干旱发生时与水花生根形态发生相关的基因,为进一步通过转基因提高农作物抗旱性奠定基础;共使用15对引物组合,回收到20个可能的在干旱诱导后表达上调的带,其中有一个能被反向northern所证实;而后对其进行了克隆和测序;同源性比对表明它可能是一个新基因的片段.半定量RT-PCR分析进一步证明该基因在干旱和盐胁迫下表达上调.  相似文献   

辐照对高羊茅愈伤组织诱导及农杆菌介导转化的影响     

胡繁荣  夏英武 《上海交通大学学报(农业科学版)》2005,23(2):158-162

以高羊茅成熟种子及产生的愈伤组织为试验材料，研究了辐照对愈伤组织诱导和农杆菌介导转化的影响。结果表明，5—20Gy辐照对高羊茅成熟种子诱导愈伤组织有一定的促进作用，使出愈率比对照提高4．7％-12．3％，其中以10Gy处理的效果最好，剂量超过30Gy对愈伤组织形成产生抑制作用。其转化前，愈伤组织被1-4Gy的剂量辐照处理，其GUS瞬间表达率随剂量的增加逐渐提高，但当剂量高于4Gy时，愈伤组织的GUS瞬间表达率随剂量的增加而下降。综合考虑辐照后愈伤组织的存活率和GUS瞬间表达率，2Gy为高羊茅愈伤组织转化的最佳剂量。深入观察表明，辐照后继代培养24h最适合农杆菌介导感染。  相似文献   

新基因RSTA14-44在大肠杆菌中的表达及抗体制备     

袁莉刚  田永强  缪时英  王琳芳  刘英 《甘肃农业大学学报》2004,39(5):499-502

RSTA14-44 基因是中国协和医科大分子生物学试验室在研究中获得的一个新基因,全长 1124 bp,可读编码框自 100bp~684 bp,编码 194 个氨基酸,预测其编码蛋白质分子量为 21.8 KDa。构建了包含 RSTA14-44 cDNA 全部编码框的 pET30a(+)-14 表达载体质粒,经过聚丙烯酰氨凝胶电泳纯化,免疫家兔制备了抗 RSTA14-44 抗体。Western免疫印迹分析表明,该抗体具有较高的反应性和特异性,适合用作 RSTA14-44 蛋白的进一步研究。  相似文献   

犬瘟热病毒水貂分离株F基因真核表达载体的构建与表达     

苏凤艳  宗春苗  王卓聪 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》2007,35(8):24-28

为了构建犬瘟热病毒F基因真核表达载体,利用RT-PCR方法扩增出水貂源犬瘟热病毒分离株的F基因,将其克隆至pMD-18T载体上,用BamHⅠ和KpnⅠ进行双酶切,回收目的基因。将目的基因亚克隆至pcD-NA3.1(+)中,获得真核重组质粒pcDNA3.1-CDVF。通过脂质体介导法将pcDNA3.1-CDVF转染至BHK-21细胞中,并利用间接免疫荧光试验和RT-PCR法检测pcDNA3.1-CDVF在BHK-21细胞中的表达情况。结果表明,真核重组表达质粒pcDNA3.1-CDVF构建成功,F基因可在BHK-21细胞中表达。  相似文献   

乳腺良性病变及乳腺癌组织中基质金属蛋白酶-2、-9的表达及其意义     

赵颖海  苟新敏  陈小毅  李飞虹  蔡琼珍 《湛江医学院学报》2002,20(4):251-252

目的：探讨基质金属蛋白酶—2、—9(MMP—2、MMP—9)在乳腺良性病变及乳腺癌组织中的表达及意义。方法：应用免疫组化SP法检测10例乳腺良性病变及29例乳腺癌组织中MMP—2和MMP—9的表达。结果：MMP—2和MMP—9在乳腺癌中的表达明显高于乳腺良性组织。且乳腺癌患者中有淋巴结转移组MMP—2、MMP—9的表达明显高于无淋巴结转移组。结论：MMP—2和MMP—9在乳腺癌组织中有高表达且在乳腺癌细胞突破基底膜向外扩散、转移中起着重要作用，两者参与了乳腺癌的转移过程。  相似文献   

基因工程菌表达效率对细菌总蛋白和包涵体中目的蛋白含量的影响     

薛爱群  贾锋  齐顺章 《中国农业大学学报》1994,(1):104-107

测定了猪生长激素基因工程菌不同表达效率时细菌总蛋白的含量以及包涵体中重组猪生长激素占包涵体总蛋白的比值。结果表明:随着表达效率的提高,细菌总蛋白含量缓慢增加,最后稳定在一定水平上;当表达效率增加,包涵体中重组猪生长激素占包涵体中总蛋白的百分数也增加,两者上升趋势基本一致。  相似文献   

水貂阿留申病毒VP2基因主要抗原表位区的原核表达   总被引：1，自引：0，他引：1  

梁冬莹  华育平  曾祥伟 《东北林业大学学报》2007,35(6):39-41

根据GenBank中已发表的水貂阿留申病毒(ADV)VP2基因核苷酸序列分别设计合成两对引物,用PCR方法扩增ADV国内分离株VP2基因中主要抗原表位区的两个片段,分别将其克隆到原核表达载体pMAL-c2的多克隆位点中。经酶切、PCR扩增和测序分析证实其已正确插入到表达载体中,且阅读框是正确的,构建原核表达载体pMAL-VPa和pMAL-VPb。阳性重组质粒转化宿主菌TB1,用IPTG进行诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE检测和免疫印迹分析。结果表明两段蛋白均获得了表达,表达产物的分子质量分别约为63、65kD,与理论推测的分子质量一致;并在终浓度为1mmol/L的IPTG诱导下,4h时其表达量达到高峰;Western blot分析表明表达蛋白能被兔抗MBP抗体所识别,具有一定的抗原性。  相似文献