Cdc42蛋白在牛卵母细胞中的表达分布及对其成熟的影响     

刘扬  银凤霞银凤霞  白春玲白春玲  魏著英魏著英  昝林森昝林森  李光鹏李光鹏 《中国农业科学》2014,47(3):574-585

【目的】探明Cdc42蛋白在牛卵母细胞成熟过程中的表达及分布规律,并且研究抑制Cdc42活性对于牛卵母细胞成熟的影响。【方法】首先通过收集体外成熟不同时间（0-24 h）的牛卵母细胞,用Western blotting的方法检测Cdc42蛋白在牛卵母细胞中的表达量变化情况,通过免疫细胞化学的方法检测Cdc42蛋白在牛卵母细胞中的分布及定位情况。根据GenBank公布的牛Cdc42基因（GenBank登录号：NM_001046332.1）的mRNA序列设计引物,并在正向和反向引物的末端分别加上KpnⅠ和EcoRⅠ酶切位点,用PCR的方法扩增牛Cdc42基因的CDS区,将PCR产物和pMD19T载体连接得到野生型的克隆载体pMD19T-Cdc42WT。用定点突变引物以pMD19T-Cdc42WT为模板进行PCR反应,得到Cdc42的显性负性突变体Cdc42T17N的克隆载体pMD19T-Cdc42T17N。将pMD19T-Cdc42WT和pMD19T-Cdc42T17N分别酶切后,将Cdc42WT（775 bp）和Cdc42T17N（775 bp）片段分别连接到pcDNA3.1（+）的多克隆位点区域,得到相应的原核表达载体pcDNA3.1（+）-Cdc42WT和pcDNA3.1（+）-Cdc42T17N。用体外转录的方法分别得到Cdc42WT和Cdc42T17N的cRNA,用显微注射的方法将相应的cRNA分别注入到牛GV期卵母细胞质内,检测其成熟率的变化。【结果】①Cdc42蛋白分别在牛卵母细胞中成熟培养0、4、8、12、16、20以及24 h时表达量没有明显差异,但是其分布规律随着减数分裂的进行发生着动态的变化：Cdc42蛋白在卵母细胞皮质区域集中分布的模式在生发泡（germinal vesicle,GV）期卵母细胞中很少出现,而在第一次减数分裂中期（metaphase Ⅰ,MⅠ）卵母细胞中出现得最多也最为明显;Cdc42蛋白在染色体附近的皮质富集的现象开始出现于前中期（pro-metaphase Ⅰ,pMⅠ）,并且出现频率从pMⅠ期到第2次减数分裂中期（metaphase Ⅱ,MⅡ）逐渐增多;Cdc42蛋白和纺锤体重叠定位的现象在第1次减数分裂后期（anaphase Ⅰ,AⅠ）到末期（telophaseⅠ,TⅠ）的卵母细胞中占有有很高比例,而到MⅡ期时这种现象又很少出现。②从牛卵母细胞的总cDNA中扩增Cdc42基因得到785 bp的片段,构建的牛Cdc42的野生型及其显性负性突变体的克隆载体pMD19T-Cdc42WT和pMD19T-Cdc42T17N经酶切鉴定和以及测序比对后,符合预期结果,即成功克隆了牛野生型Cdc42基因并得到其显性负性突变体Cdc42T17N;③构建的相应的原核表达载体pcDNA3.1（+）-Cdc42WT和pcDNA3.1（+）-Cdc42T17N经酶切鉴定和测序比对,符合预期结果,经过体外转录均得到一个3079 bases和987 bases的RNA片段,符合预期结果,即成功构建了相应的原核表达载体并获得相应的cRNA;④与正常成熟培养组和注射Cdc42WTcRNA的牛卵母细胞相比,注射Cdc42T17NcRNA的成熟率显著降低（P<0.05）。【结论】卵母细胞在卵泡发育过程中就已经积累了足够的Cdc42蛋白,而在减数分裂过程中Cdc42可以在卵母细胞的皮质以及纺锤体的位置发挥作用,而且正常的Cdc42活性是牛卵母细胞完成成熟过程并排出第一极体所必需的。  相似文献   

橡胶树树干注输营养液施肥法成效初探     

周敏  钱云  刘学敏陈鸿洁  李春  李芹  郑定华 《热带农业科学》2014,(2):6-11

采用树干注射输液法在老龄RRIM600橡胶树上进行相同配比不同浓度的营养液注输施肥试验。连续注输营养液2个月和4个月后分别对各试验处理后橡胶树胶乳的产量和叶片中养分元素含量进行定量分析。结果显示:在本试验条件下,树干注输营养液施肥法对橡胶树的胶乳产量没有显著的影响,但有助于提高橡胶树叶片中营养元素含量。相同配比不同浓度的营养液连续注输2个月后橡胶叶片中大部分养分元素含量均有一定程度的增长,连续注输4个月后各试验处理的差异开始显现。输液后叶片中养分元素增长量最大的溶液配比浓度为:尿素0.1 g/L,磷酸二氢钾6.81 mg/L,硫酸钾50.6 mg/L,硫酸镁34.5 mg/L,硫酸铜1 mg/L,硫酸亚铁1.39 g/L,硫酸锰2 mg/L,硫酸锌1 mg/L,硼酸2 mg/L。  相似文献   

在线耦合化学发光法测定叶绿素     

赵芳  郭瑜萍  张玲 《安徽农业科学》2008,36(5):1742-1743

[目的]探讨测定植物叶绿素含量的新方法。[方法]利用氢离子将叶绿素中的镁离子定量置换而形成去镁叶绿素,置换出来的镁离子注入高锰酸钾与鲁米诺混合液时发生后化学发光反应,利用这种耦合反应,结合流动注射分析技术,建立了间接测定叶绿素流动注射化学发光新方法。[结果]该方法线性范围为8.0×10-8～8.0×10-5 g/ml的镁(Ⅱ),检出限达3.3×10-8 g/ml的镁(Ⅱ),对浓度为8.0×10-7g/ml的镁(Ⅱ)连续11次平行测定的相对标准偏差为2.3%。[结论]首次提出用化学发光测定叶绿素释放出的镁离子而间接测定叶绿素量的分析方法。该方法无需叶绿素标准物质,且分析方法简单、快速、灵敏,可用于植物中叶绿素含量测定。  相似文献   

术中无水酒精注射治疗不能切除胰腺癌的效果观察     

周占春  李朝龙  朱玮冰 《湛江医学院学报》2007,25(4):391-392

目的 观察术中注射无水酒精治疗不能切除胰腺癌的效果.方法 1995年5月至2005年8月60例不能切除之晚期胰腺癌患者,其中36例(A组)在行胆肠和(或)胃肠改道手术基础上,术中行瘤体内以及腹腔神经丛无水酒精注射处理,术后定期随访,观察症状缓解和生存期(术后0.5、1a存活率情况).余24例(B组)同期仅行胆肠和(或)胃肠改道手术,仅观察生存期(术后0.5、18存活率)作为对照.结果 A组36例的顽固性腰背痛症状术后即基本消失,其余临床症状均有不同程度缓解;瘤体在术后2个月均有缩小(平均缩小29%);随访平均生存期(8.9±2.4)个月,较B组(5.5±0.4)个月长,差异有统计学意义(P＜0.01).A组术后0.5、1a存活率分别为81.8%、45.5%;B组术后0.5、1a存活率分别为54.5%、18.2%,A组高于B组,两组间差异有显著性意义(P＜0.05).结论 术中瘤体内及腹腔神经丛无水酒精注射治疗不能切除之胰腺癌,能延缓肿瘤生长,显著减轻癌性疼痛,从而延长患者生存期,提高其生存质量,是一种安全、简便、有效的治疗措施.  相似文献   

牛注射口蹄疫疫苗过敏反应的处置及预防     

孙彪 《畜牧兽医科技信息》2011,(2):50

牛在注射口蹄疫疫苗后,常出现以精神沉郁,厌食,呕吐,皮肤发红,体温升高,腹泻,重者骨骼肌痉挛,唾液腺分泌增加,呼吸困难,患牛僵直或休克等过敏反应。如果脱敏抢救不及时,会造成个别死亡或少数母畜流产等。1过敏情况在2010年10月秋防过程中,富源村前玻璃屯  相似文献   

畜禽免疫接种的应对     

韩仕平 《中国牧业通讯》2011,(14)

畜禽免疫是预防传染病发生和流行的重要技术措施。但在免疫接种过程中,由于畜禽个体差异、健康状况、操作技术及疫苗保存质量等多种因素的影响,经常引发因免疫不当引起的应激反应或病理过程,甚至引起死亡,造成养殖场户对畜禽防疫工作的怀疑与误解。笔者经多年实践与观察,现就其引发原因及预防做一浅析。  相似文献   

禽病防治疑难问答     

《动物保健》2012,(10):51-51

问：散养青脚麻鸡，按以前的免疫程序，鸡到70日龄以后鸡瘟比较难控制，朋友给我介绍了一个新免疫程序：4日龄小二联点鼻，8日龄法氏囊饮水，18日龄法氏囊饮水，25日龄大二联饮水，35日龄新流H9二联或新流H5＋H9三联注射，39日龄ZM10或30饮水，50日龄I系注射，我育雏在笼子里，第四天的小二联可以换成喷雾吗？请问这样的程序可以吗？  相似文献   

3起牛、羊注射炭疽疫苗后发生免疫副反应的救治报告     

卜仁英  张洪野 《养殖技术顾问》2012,(4):204-204

2011年8月份,我县有3人发生疑似炭疽病,经调查,发病人员均为牛贩运、屠宰人员。近期从比邻地区又引入了活牛,而此地区已有多人感染发病,为防止引入疫情在我县扩散,当地政府采取果断措施,  相似文献   

普鲁卡因封闭治疗仔猪关节囊炎     

傅高新  陈俊 《农家顾问》2009,(12):37-37

仔猪关节囊炎主要发生在盛夏深秋季节,以危害未满月的奶猪和小仔猪较多。病猪四肢关节囊肿胀成竹节状,手触之发热有波动感,生针刺之则流出灰黄、白色液体,严重者呈恶脓状或干罗粉样。患猪站立不稳,四肢跪地而爬行,嘶叫、疼痛不安、死亡率高。我们在临床诊治中运用普鲁卡因稀释青霉素对病猪的患肢进行环形封闭注射治疗,治愈率高达98%以上,深受畜主欢迎。  相似文献   

浅谈中西医结合治疗犬的后躯瘫痪     

许建国  季珉珉  王传锋 《吉林畜牧兽医》2013,(2):62-64

通过5例犬的后躯瘫痪病例,经采用穴位注射疗法、电针疗法和按摩疗法,其中4例都先后治愈,仅1例无效死亡,治愈率为80%,结果表明,轻度患犬1～2周可取得较好的治疗效果。本法疗效确实,值得宠物临床进一步推广和应用。但对于采用保守疗法无效的患犬,手术疗法可能更有效,对此法的路径和方法有待于探讨。瘫痪是指骨骼肌随意运动能力减弱或丧失,也称麻痹。是多种疾病损伤神经所引起的一种  相似文献