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以柑橘溃疡病菌特异性高的假定蛋白基因(登录号:AE008923.1)为靶标,设计并筛选4条引物来特异性识别靶标序列中的6个独立区域,建立柑橘溃疡病菌LAMP实时浊度检测方法。该方法利用实时浊度仪检测反应过程中产生的焦磷酸镁白色沉淀,实现对LAMP整个反应过程的实时监控。从镁离子浓度、甜菜碱浓度、dNTPs浓度、引物浓度和反应温度5个变量参数对 LAMP检测体系进行优化,并对方法的特异性、灵敏度、稳定性及实际样品检测效果进行评价。结果显示,该体系经优化后稳定性良好,可在66 ℃ 恒温条件下,60 min内完成检测;DNA检测下限可达0.02 ng/μL,灵敏度与荧光定量PCR方法相同,比常规PCR方法高1个数量级;能快速、准确地对田间疑似样品进行检测,与荧光定量PCR方法的检出情况一致,没有漏检。结果说明柑橘溃疡病菌实时浊度LAMP检测方法操作简便、所需时间短,特异性与灵敏度高,为柑橘溃疡病菌的快速筛查提供较好的途径。 相似文献
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<正>随着肉鸡集约化养殖模式的推广,在我国很多养殖密集地区出现了以生长不均匀、消瘦、整齐度差、采食量低、过料等外观症状为特征的发育鸡群。剖检发现,腺胃肿大且乳头变硬、或腺胃乳头扁平甚 相似文献
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张贵贤 《广东畜牧兽医科技》2007,32(1):34-34,37
葡萄球菌广泛分布于空气、饲料、饮水、地面及物体表面,在人及畜禽的皮肤、粘膜、肠道、呼吸道及乳腺中也存在,大部分无致病性[1].但使机体抵抗力下降的诸因素,特别是皮肤和粘膜受损时,可导致葡萄球菌病的发生.2006年9月,在河北昌黎地区某养猪场,从外地购买的100头仔猪陆续发生以背部、四肢渗出性皮炎为主要症状,并伴有体温升高、眼结膜潮红等症状的疾病.作者从该养猪场病猪皮肤溃疡浆液中分离出2株表皮葡萄球菌,并对分离菌的主要生物学特性进行了初步研究,旨在为临床上防治本病提供参考. 相似文献
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PCR、DIA与致病性测定法检测柑桔溃疡病菌的比较 总被引:3,自引:0,他引:3
依据柑桔溃疡病菌全基因组序列的独有保守区域设计筛选出的特异性引物对JYF5/JYR5,用于柑桔溃疡病菌的PCR检测,具有很好的检测特异性、灵敏度和稳定性。同时比较了PCR与DIA(斑点免疫结合技术)及传统的致病性测定法在检测灵敏度、稳定性及田间样品检出率等方面的差异。结果表明,PCR的检测灵敏度可达103~104 cfu·ml-1(每个反应体积约10个细菌),明显高于DIA(104~105 cfu·ml-1,每个样点约300个细菌);PCR、DIA和致病性测定法检测田间显症样品的检出率均可达到100%,而检测柑桔无症样品的检出率依次降低。此外,通过排除PCR抑制物质和在PCR反应体系中加入终浓度为15%的甘油,有效地降低了检测中存在的假阴性。 相似文献