H5N1亚型禽流感病毒HA、NA基因在杆状病毒中的重组体的构建   总被引：5，自引：0，他引：5  

杨若松  李明义  赵雪丽  张志 《上海畜牧兽医通讯》2006,2(1):22-23

本实验将禽流感病毒的HA,NA基因克隆到转移载体Pfastbackdual中,然后使其转入到杆状病毒,经卡那霉素、四环素、庆大霉素抗性及蓝白斑筛选得到阳性克隆,转染昆虫细胞,获得一株重组病毒。本研究为该病毒的亚单位疫苗的进一步研究奠定了基础。  相似文献   

H1N1亚型猪流感病毒血凝素基因的克隆与表达     

马祥  顾万军  刘镇明  黄良宗  彭启明 《动物医学进展》2006,27(8):73-76

应用RT-PCR方法扩增了1株H1N1亚型猪流感病毒的血凝素基因,并克隆到pMD 18-T Simple载体中,经PCR、酶切和测序验证克隆正确后,亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1( )中,构建了重组质粒pcDNA-HA。在脂质体作用下重组质粒pcDNA-HA转染Vero细胞。间接免疫荧光试验结果表明,血凝素基因在Vero细胞中成功进行了瞬时表达,这为猪流感病毒DNA疫苗的进一步研究奠定了基础。  相似文献   

表达H5亚型禽流感病毒HA基因的重组马立克氏病病毒的构建     

郦晓琼  吴艳涛  徐晓静  王郁杨 《中国兽医学报》2009,29(10)

采用聚合酶链反应或反转录聚合酶链反应扩增出H5亚型禽流感病毒(AIV)的HA基因、网状内皮增生症病毒的长末端重复序列(LTR)、马立克氏病病毒(MDV)Rispens CVI988毒株基因组的sorf 1和sorf 2序列、两端带loxp位点的lac/smGFP标志基因,构建含这些基因的转移载体质粒pMHA;以MDV Rispens CVI988毒株的基因组DNA和PMHA质粒DNA共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),采用同源重组方法将LTR、lac/smGFP和HA基因插入到MDV基因组,获得重组病毒rMDV-HA/GFP;以cre介导的同源重组去除lac/smGFP标志基因,再转染CEF,获得仅带LTR启动子和HA基因的重组MDV疫苗毒株rMDV-HA.rMDV-HA仍保留了MDV RispensCVI988疫苗毒株的复制特点,并能稳定表达AIV的HA.  相似文献   

5株H9N2亚型禽流感病毒血凝素蛋白分子特征分析和豚鼠间传播能力的评估     

桑晓宇  高玉伟  李林  丁洁  朱晓文  张钊伟  于志君  张坤  程凯慧  冯娜  刘红  王铁成  杨松涛  黄耕  夏咸柱 《中国预防兽医学报》2012,(2):92-95

为研究H9N2亚型禽流感病毒(AIV)在哺乳动物间的传播能力,本研究以豚鼠为模型评价了5株H9N2亚型AIV在豚鼠体内的复制能力和水平传播能力,并分析了5株病毒血凝素(HA)蛋白的分子特征。结果表明,5株病毒均属于CK/Beijing谱系,其中2株病毒的HA具有人样受体特征(Lys226),2株病毒具有禽样受体特征(Gln226),而A/Chicken/JN/Li-2/2010(H9N2)株在该位点的氨基酸残基为苯丙氨酸(Phe226)。裂解位点分析表明,5株病毒均具有低致病性AIV特征。个别病毒的潜在糖基化位点存在增加或缺失现象。感染试验表明,5株病毒均能够在豚鼠呼吸道复制。并且在鼻甲骨处复制稳定,平均病毒滴度为2.01 Log EID50/mL～4.5 Log EID50/mL。传播试验表明,所有病毒株的人工接种豚鼠的鼻洗液中均能够检测到病毒,最长排毒期为接毒后第8 d,而接触组豚鼠鼻洗液中未检测到病毒。本研究表明,5株H9N2亚型AIV均属于CK/Beijing谱系,部分病毒株的HA蛋白已具备人样受体结合特征,并且关键氨基酸位点(226位)处出现新的突变。5株病毒均能够在豚鼠呼吸道复制并通过上呼吸道排毒,但不能在豚鼠间同群传播。  相似文献   

猪流感病毒血凝素基因的研究进展     

赵孟孟  潘俊斌  王衡 《中国畜牧兽医》2010,37(11):69-72

猪流感是由猪流感病毒引起的一种急性、热性、高度接触传染性呼吸道疾病,可继发和并发多种细菌病和病毒病,已日益成为危害世界猪群的主要传染病之一。猪流感病毒血凝素基因作为流感病毒表面最主要的抗原基因,其表达蛋白具有丰富的生物学作用,对流感病毒的致病性起着主导作用。作者主要对猪流感病毒血凝素基因的研究进行了综述,为进一步防治猪流感及开发新型疫苗提供帮助。  相似文献   

禽流感病毒血凝素保守氨基酸对其受体结合位点的影响   总被引：2，自引：0，他引：2  

贾红玲  苏艳  吴润 《中国预防兽医学报》2008,30(7)

采用PCR定点突变技术,对H5N1亚型禽流感病毒的血凝素HA基因受体结合位点相关的保守氨基酸分别进行以下位点的定点突变：35位K→R、45位D→N、98位Y→F、193位K→R和267位A→T,构建突变表达载体pCI-HA,转染293T细胞进行瞬时表达。流式细胞检测结果显示：193位K→R的突变体的HA的表达显著增加;98位Y→F突变体的HA的表达受到显著抑制。同时,血球吸附试验表明,同一HA突变体吸附鸡红细胞和马红细胞时,显示出不同的红细胞吸附能力。因此,受体结合位点相关的193位和98位的保守氨基酸不仅对受体结合位点结构域的形成有影响,它们还在决定AIV感染的宿主特异性中具有重要的作用。  相似文献   

猪传染性胃肠炎病毒的血凝位点的定位研究     

田志军  王玉春  周连华 《中国预防兽医学报》2000,(Z1)

通过转瓶培养ＩＢＲＳ２细胞，选择最佳接毒剂量、接毒时间和收毒时间生产出凝集价（ＨＡ）达２１２的猪传染性胃肠炎病毒（ＴＧＥＶ）血凝抗原。用抗ＴＧＥＶＳ蛋白和 Ｍ蛋白的单克隆抗体与不同稀释度的ＴＧＥＶ血凝抗原等量混合，在 ３７℃作用 ３０分钟后接种ＩＢＲＳ２细胞和做中和试验（ＮＴ）和血凝抑制（ＨＩ）试验。结果表明ＴＧＥＶ血凝位点与中和位点一致，血凝素位于Ｓ蛋白Ａ位点或其附近。  相似文献   

犬瘟热病毒疫苗免疫逃逸株的血凝素基因变异研究     

黄娟  隋晓梅  王怡男  单虎 《华北农学报》2016,(2):231-238

为了弄清是否有新基因型犬瘟热病毒出现,对山东省不同地区的免疫水貂、狐狸和犬进行了犬瘟热病毒检测,扩增了病毒核衣壳基因和血凝素基因(H),并对13个犬瘟热病毒山东株(8株貂源,2株狐狸源,3株犬源)血凝素基因进行了测序。结果表明,13个犬瘟热病毒山东株之间H基因核苷酸同源性为99.1%~100.0%,均为Asia-1型,这也是我国目前水貂犬瘟热病毒唯一的基因型。与2012年之前的犬瘟热病毒中国分离株及疫苗株相比,13个毒株H基因有4个氨基酸的一致性变异,即P200S、M263I、I542N和Y549H,N-糖基化位点比Onderstepoort株多6或7个,比CDV3株多3或4个。抗原性分析表明,与疫苗株相比,13株山东株在540-549位氨基酸出现一个新的抗原区域,210-230,327-347位的抗原区域也与疫苗株不同,这些变异可能是我国貂狐犬瘟热免疫失败的原因。  相似文献   

2009甲型H1N1流感病毒的研究综述(英文)   总被引：1，自引：0，他引：1  

刘超  刘连芬  王波  李付国  姜乃化  曾晓辉 《农业科学与技术》2012,(2):424-427

[目的]介绍2009甲型H1N1流感病毒的研究进展。[方法]从病毒的分类与宿主,病毒学,分子特征及疫苗等方面简要介绍了2009甲型H1N1流感病毒。[结果]2009年4月初出现的一种新型甲型(H1N1)流感病毒通过人-人传播迅速蔓延全球,该病毒包含一组新的基因片段,已知的最接近的前体为在猪体内发现的病毒。该病毒似乎保留着重新感染猪的潜力从而可能继续与猪源病毒发生重组。所有已注册的2009甲型流感疫苗均在对志愿者的临床试验中测试了安全性和免疫原性,发现所有疫苗都是安全的,并且单剂量的疫苗给药后引起保护性抗体反应。[结论]为进一步研究2009甲型H1N1流感病毒提供依据。  相似文献   

鹅源新城疫病毒JG97株HN基因的克隆与遗传分析     

刘梅  戴亚斌  李文良  周生  徐玲霞  冯太兰  赵宝华 《中国兽医学报》2009,29(9)

根据GenBank中公开的鸡新城疫病毒(NDV)血凝素-神经氨酸酶(HN)基因序列合成了1对引物,通过RT-PCR扩增出了鹅源NDV JG97分离株的HN基因.将扩增产物克隆到pGEM-T载体中,并进行了序列测定.结果表明,扩增的基因片段含1个完整的、长1 716 bp的HN基因阅读框(ORF),编码的571个氨基酸中含13个Cys残基和5个潜在的糖基化位点.同源性分析结果表明,JG97株与SF02、GD/1/98/Go、JS/1/97/Go、JS/2/98/Go、JS/5/01/Go、NA-1、SD/5/04/Go和ZJ/1/00/Go等8个毒株的HN基因和氨基酸同源性分别为96.3%～98.2%和97.0%～98.9%,而与F48E9株分别为84.8%和89.8%,与La Sota株分别为82.1%和86.9%,表明JG97株与我国其他鹅源NDV毒株的亲缘关系较近,它们可能具有共同的来源,但与经典NDV毒株间差异较大.此外,鹅源NDV毒株HN蛋白中有6个独特的氨基酸变异,另有14个仅与Taiwan95和VOL95毒株共有的氨基酸变异.  相似文献