鸡白介素10(chIL-10)单克隆抗体的制备及鉴定     

《中国兽医杂志》2016,(12)

为制备鸡白介素10(chIL-10)单克隆抗体,以常规分子生物学技术从禽细胞系MDCC-MSB1克隆chIL-10基因,将去信号肽chIL-10基因亚克隆至原核表达载体p ET-30a,并在大肠杆菌中表达,纯化后作为免疫原免疫BALB/c小鼠。经4次免疫后,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)融合。将原核表达的GST-chIL-10融合蛋白作为包被抗原,利用间接ELISA筛选阳性克隆。阳性细胞株经3次亚克隆后,获得3株稳定分泌chIL-10抗体的杂交瘤细胞克隆,分别命名为4B2、4F3以及1E3。经间接ELISA测定,以上3株杂交瘤细胞腹水效价为1∶3.2×10~6,亲和力解离常数(Kd)分别为1.05×10~(-9)、5.01×10~(-10)以及7.59×10~(-10)。抗体重链类型分别为Ig G2a、Ig G2a以及Ig G1。经Western Blot试验证明,3株单抗均能特异地识别原核或真核表达的chIL-10蛋白,4B2、4F3单抗识别的抗原表位区域为chIL-10 N端的1 aa~52 aa,1E3识别的是N端的52 aa~102 aa。这些单抗为鸡IL-10的检测及生物学功能研究奠定了基础。  相似文献   

一个大豆ERF转录因子的克隆与表达分析     

ZULFIQAR A  何晓兰  刘晓庆  张大勇  徐照龙  易金鑫  许玲  马鸿翔  黄益洪 《江苏农业学报》2011,(5):957-963

利用RT-PCR方法从聚乙二醇(PEG)处理的大豆根部组织中克隆了1个大豆乙烯响应因子(ERF)基因,由于其位于大豆基因组第7染色体上,故命名为GmERF7,基因座为Glyma07g02930.序列分析结果表明:该基因含有1个237 bp长的内含子,开放阅读框(ORF)长585 bp,编码194个氨基酸,蛋白质分子量为...  相似文献   

花生抗黄曲霉相关基因PnLOX2的原核表达及RNAi载体的构建与转化   总被引：1，自引：0，他引：1  

张廷婷  ;马登超  ;宫清轩  ;李春娟  ;闫彩霞  ;赵小波  ;单世华 《山东农业科学》2014,(9):1-6

本研究对利用基因芯片技术从抗、感黄曲霉花生品种中分离出的差异表达基因PnLOX2进行原核表达,得到分子量为121.5 kD的融合表达产物;构建了PnLOX2基因的3'端反向重复结构并转化花生,得到了转基因花生苗,为反向鉴定PnLOX2基因在花生抗黄曲霉侵染过程中的功能奠定基础。  相似文献   

亚洲棉GaPP2C24基因的克隆及表达分析     

蔡肖  甄军波  刘琳琳  刘迪  唐丽媛  张素君  李兴河  王海涛  刘存敬  张香云  张建宏  迟吉娜 《华北农学报》2020,35(3):33-39

PP2C是一大类重要的蛋白磷酸酶,广泛参与不同的逆境胁迫响应。为了解PP2C基因在干旱响应中的功能,以亚洲棉石系亚1号为材料,利用RT-PCR方法从中克隆了GaPP2C24基因,并对该基因进行了生物信息学分析,荧光定量PCR研究了其在亚洲棉不同组织和干旱胁迫下的表达情况。结果表明,GaPP2C24基因CDS序列全长为1 251 bp,编码416个氨基酸。序列同源比对发现,GaPP2C24与其他植物的PP2C氨基酸序列有较高的相似性,其中与可可树(EOY33930.1)、黄麻(OMO91132.1)的相似性分别为85%,84%。进化分析表明,GaPP2C24与同属锦葵目的黄麻聚在一支,亲缘关系最近,与可可树的亲缘关系次之。实时荧光定量PCR结果表明,GaPP2C24基因在子叶、下胚轴、胚根、叶、茎和根均有表达,且在茎中的表达量最高,根中次之。GaPP2C24受干旱胁迫的诱导表达,其在根和叶片中的相对表达量在处理1 h后最高,分别达到对照的53.9,6.9倍,推测该基因在棉花干旱响应中有重要作用。  相似文献   

巴西橡胶树HbSERK2的克隆与表达分析     

周永凯  王颖  朱家红  李辉亮  郭冬  彭世清 《分子植物育种》2019,17(2):445-451

  相似文献   

水稻转录因子OsHOX6过量表达及其对水稻根生长作用     

玉山江·麦麦提  杨渡  韩盛  Inez Hortense Slamet-Loedin 《分子植物育种》2019,17(19):6350-6355

  相似文献   

花楸树热激蛋白70基因的克隆及表达分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

刘聪聪  张泽  关雪莲  裴鑫  郑健 《分子植物育种》2019,17(19):6276-6286

  相似文献   

杉木BR生物合成酶ClDET2基因的克隆及表达分析     

理挪  林思祖  张健  张家君  吕蒙  陈宇 《分子植物育种》2019,17(24):8058-8064

  相似文献   

Cloning of Buffalo BMP1 Gene and its Expression Pattern Investigation in Different Tissues     

LEI Xiao-can  CUI Kui-qing  SU Jie  LI Zhi-peng  ZHAO Xian-hong  LIU Qing-you  SHI De-shun 《中国畜牧兽医》2015,42(9):2215-2223

Buffalo BMP1 gene was cloned in the present study, the BMP1 sequence was systemically analysed by bioinformatics techniques, and the expression level of BMP1 gene in different tissues were also assayed with Real-time fluorescence quantitative PCR (QRT-PCR).The results showed that with RT-PCR a 3 195 bp buffalo BMP1 gene was cloned and sequenced, including the whole ORF of 2 967 bp (coding 988 amino acid).The sequence multialigned results showed that buffalo BMP1 gene shared 99%, 96%, 96%, 96% and 95% of similar amino acid sequence with Bos taurus, Sus scrofa, Equus, Homa sapiens and Mus musclus, respectively.It was predicted that buffalo BMP1 protein contained a signal peptide domain, a preregion, a metalloproteinases domain, five complement-Uegf-BMP-1 domain (CUB domain) and two epitheloid growth factor-like domain (EGF-like domain).In addition, we also analyzed the expression level in different tissues through QRT-PCR, the results showed that BMP1 gene mRNA existed in all nine tissues with the most abundant expression in heart, followed by testis, ovary, genital ridge, while with lower amount of bone and other tissues, the minimal expression in liver was observed.  相似文献   

葡萄耐铝毒基因MATE的克隆与表达分析     

张永福  莫丽玲  徐金会  徐仕琴  裴徐梨 《江西农业大学学报》2020,42(5):906-914

  相似文献