PRRSV血清抗体间接ELISA检测方法的建立     

陈义平  邓珣  彭长凌  刘文博  吴晓东  李林  王志亮  刘秀梵 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》2006,27(4):1-4

用亲和层析纯化的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)重组核衣壳蛋白GST-N作为诊断抗原,建立检测PRRS血清抗体的间接ELISA方法。抗原最佳包被量为每孔400 ng,待检血清最佳稀释度为1∶100,待检血清样品的D_(490 nm)≥0．43D_(po■) 0．57D_(neg)判为阳性,反之判为阴性。对采自14个猪场的364份猪血清样品进行检测,PRRS阳性率为51．4%,略高于HerdChek ELISA的阳性检出率49．7%。与HerdChek ELISA相比,间接ELISA的敏感性为94．5%,特异性为91．3%,总符合率为92．9%,Youden指数为0．86。同时还证明该方法具有良好的批间和批内重复性,并且不与猪瘟、猪伪狂犬病等阳性血清发生反应。该方法的成功建立将为我国PRRS的防制工作作出贡献。  相似文献   

Partial susceptibility of the SSN-1 fish cell line to a crustacean virus: a defective replication study     

Hernandez-Herrera RI  Chappe-Bonnichon V  Roch P  Sri Widada J  Bonami JR 《Journal of fish diseases》2007,30(11):673-679

This study evaluated the possible use of the fish SSN-1 cell line to investigate the development of Macrobrachium rosenbergii nodavirus (MrNV). Cells were incubated with viral particles and cytopathic effects were observed. De novo synthesis of viral capsid proteins was shown by immuno-fluorescence labelling and a sandwich ELISA test. Viral genomic replication was demonstrated by RT-PCR using primers specific to RNA-1 as well as by quantitative RT-PCR (RT-qPCR). Using electron microscopy, only a few empty particles were observed and attempts to isolate complete infectious particles or to re-infect healthy cells (second passage) were unsuccessful. As complete viral particles were rarely observed, it appeared that defaults in MrNV virogenesis might arise resulting in the formation of scarce and non-infectious particles. SSN-1 cells were found to be partially permissive to MrNV infection that induced cell lysis, but key elements for viral infection were lacking such as regulatory factors for gene replication or post-translational modifications.  相似文献   

温氏附红细胞体双抗体夹心ELISA检测方法的建立     

王健  秦建华  张富梅  高轩  包永占 《河北北方学院学报(自然科学版)》2007,23(2):39-43

采用辛酸硫酸铵法从温氏附红细胞体高免血清中提取IgG,过碘酸钠法标记辣根过氧化物酶,建立了检测温氏附红细胞体抗原的双抗体夹心ELISA.结果显示:抗体最佳包被量为156μg/mL,酶标抗体最适工作浓度为1∶400,抗原最低检出量为6.64μg/mL,抗原及酶标抗体的最佳作用时间分别为1 h.应用建立的检测方法对河北省内222份奶牛血样进行了检测,阳性检出率为91.0%.证实:该方法灵敏度高,简便快速,适合作群体检测.  相似文献   

动物饲料中玉米赤霉烯酮ELISA检测方法的建立   总被引：4，自引：0，他引：4  

张晓  张晴晴  程罗根  张心明  刘媛  刘贤进 《江苏农业学报》2007,23(4):351-355

为检测动物饲料中玉米赤霉烯酮的含量,建立酯联免疫检测法(ELISA).结果显示:该方法检测回收率范围为67%～99%,其最低检出限为0.1 μg/kg;以建立的ELISA法对随机添加的35个普通动物饲料样本进行分析,并以HPLC法对同一批样品进行检测,两种方法回收率相关系数为0.956 1.证明建立的ELISA检测方法适合动物饲料中玉米赤霉烯酮的检测.  相似文献   

小反刍兽疫病毒核蛋白单克隆抗体的制备与初步应用     

龙云凤  周晓黎  杨俊兴  王琼  祝贺  叶玲玲  董俊  吕建强  王金萍  陈朝银  花群义  杨仕标  尹尚莲  徐维佳  艾军 《畜牧兽医学报》2012,(4):588-595

针对小反刍兽疫病毒核蛋白制备特异性的单克隆抗体,并对其进行生物学特性鉴定和初步应用。以纯化的Bacmid-PPRV-N重组蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的致敏脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞在PEG作用下融合,获得单克隆抗体,并通过染色体技术等方法研究其生物学特性,将其作为竞争单抗,Bacmid-PPRV-N重组蛋白作为检测抗原建立竞争ELISA检测方法。结果表明:经克隆和间接ELISA筛选,获得了2株能稳定分泌抗小反刍兽疫病毒N蛋白抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为5B11和3H10-3B8。生物学特性鉴定试验表明:5B11和3H10-3B8抗体类型和亚类均为IgG2b;5B11单抗腹水的效价达1∶819 200,3H10-3B8达1∶12 800;血清学试验证明2株单抗均能与Bacmid-PPRV-N重组蛋白抗原结合,具有高度的特异性;相加ELISA试验结果显示,5B11和3H10-3B8 2株单克隆抗体分别识别N蛋白上不同的抗原位点;2株杂交瘤细胞的染色体均为99～104。应用建立的c-ELISA检测方法对222份血清样品进行PPRV抗体的检测,与参考试剂盒比较得到98.20%的符合率。本研究获得了2株能稳定分泌抗PPRV N蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,以单抗5B11作为竞争抗体建立了PPRV的c-ELISA检测方法。  相似文献   

沙丁胺醇残留的酶联免疫检测方法的建立   总被引：6，自引：0，他引：6  

孙海新  凌红丽  王雷  王宏华  赵玉惠  董瑞娥 《中国动物检疫》2009,26(12):44-47

用自主制备的沙丁胺醇特异性抗体建立了针对沙丁胺醇残留的间接竞争酶联免疫检测方法,对该检测体系的灵敏度、准确度、精密度、特异性等性能进行了测定,并与高效液相色谱方法进行了对比性分析。结果显示:沙丁胺醇药物残留的间接竞争酶联免疫检测体系的检测范围为1～80ng/mL,灵敏度为0.58ng/mL,检测限为1ng/mL,回收率为70～99%,与盐酸克仑特罗、硫酸特布他林交叉反应率分别为107%、10%,与盐酸莱克多巴胺及肾上腺素的交叉反应率小于0.01%;采用HPLC方法进行沙丁胺醇药物残留的检测时,其检测范围为10μg/mL～200μg/mL,检测限为1μg/mL,回收率为80～95%。该方法与高效液相色谱法相比灵敏度较高,特异性强,检测结果准确度相近,但是在检测结果稳定性方面逊与HPLC方法。  相似文献   

福建省龙岩市部分地区猪伪狂犬病野毒感染血清学调查     

李圣元 《福建畜牧兽医》2019,(1):9-11

为了探究福建省龙岩地区的2018年猪伪狂犬病野毒感染及流行概况,本试验随机选取龙岩新罗区、连城县、武平县以及长汀县的部分规模化猪场共21个,应用ELISA法对763份血清样品PRV g E抗体进行血清学调查。结果显示样品检测总阳性率为30.41%,其中保育猪、育肥猪、能繁母猪及后备母猪的阳性率分别为:25.29%、30.98%、30.85%、31.75%;用SPSS19.0对其进行差异显著性分析,结果显示不同阶段的猪群gE抗体阳性率差异不显著(P=0.741>0.05);各场场均阳性率为31.89%;各地区阳性率分别为:41.58%、18.18%、30.14%、26.29%,场均阳性率分别为41.14%、23.50%、29.60%、33.33%,对其进行差异显著性分析,结果表示不同地区之间gE抗体阳性率差异极显著(P=0.0003<0.001),即各地区之间伪狂犬病野毒感染情况差异较大,部分地区更需要加强其控制和净化措施。  相似文献   

间接ELISA检测禽多杀性巴氏杆菌抗体中包被抗原的选择     

龚建森  施祖灏  单艳菊  陆俊贤  葛庆联  刘学贤 《吉林畜牧兽医》2008,29(1):10-12

间接ELISA已在抗体检测中广泛应用,而抗原包被作为间接ELISA中必不可少的一步可直接影响试验的准确性。本试验分别使用超声波裂解抗原、脂多糖蛋白抗原和全茵抗原作为包被抗原,建立相应的检测方法并进行重复性试验。试验证明全菌抗原建立的禽多杀性巴氏杆菌ELISA检测方法在敏感度、特异性、稳定性方面均优于其他两种抗原。  相似文献   

新孢子虫和弓形虫ELISA及western blot检测方法的建立及应用     

陈亮  闫双  刘启生  曹雯丽  王真  巴音查汗 《中国预防兽医学报》2012,34(7):558-562

为建立牛新孢子虫和弓形虫的免疫学检测方法,并调查新疆部分地区牛新孢子虫和弓形虫的感染情况,本研究应用纯化的新孢子虫重组蛋白SRS2(NcSRS2)和弓形虫重组蛋白SAG2(TgSAG2)作为包被抗原,分别建立新孢子虫和弓形虫的ELISA和western blot血清学检测方法,并进行特异性和重复性试验,以其检测662份疑似样品,并与商品化试剂盒检测结果比较验证。特异性和重复性试验结果表明,建立的方法特异性强、重复性良好。采用建立的两种ELISA方法对662份临床样品的检测结果表明,新孢子虫和弓形虫的抗体阳性率分别为13.44%(89/662)和5.29%(35/662);与IDEXX试剂盒和永辉试剂盒的符合率分别为94.11%和95.92%。此外,western blot检测的新孢子虫和弓形虫抗体阳性率分别为5.14%(34/662)和3.17%(21/662);与建立的ELISA检测方法的符合率分别为91.69%和97.89%。本研究为分析奶牛流产的原因提供了一定的依据。  相似文献   

单抗ELISA试剂盒检测肉鸽新城疫病毒初步研究     

李玉峰  曹福敏  李峰  马秀丽  王春玲  刘玉山 《水禽世界》2004,(6):7-8

应用新城疫病毒单克隆抗体建立的抗原捕捉ELISA试剂盒,对人工攻毒和自然发病的肉鸽进行检测,结果表明,从人工攻毒肉鸽各脏器组织均可检出新城疫病毒,从自然发病肉鸽泄殖腔内也可检出病毒。  相似文献