山羊乳腺上皮细胞重编程过程中细胞上清液外泌体不同提取方法的比较     

魏梦珍  张丹丹  汤文魁  刘权辉  王国栋  黄奔 《黑龙江畜牧兽医》2024,(1):42-46

为了比较不同方法提取山羊乳腺上皮细胞重编程过程中细胞上清液外泌体的效果，试验采用超速离心法和试剂盒法提取细胞上清液中的外泌体，利用透射电子显微镜观察外泌体形态，以纳米流式仪检测外泌体浓度和粒径，Western-blot法检测外泌体表面标志物蛋白并通过Image J软件分析其相对表达量。结果表明：超速离心法和试剂盒法提取的外泌体均具有圆盘状的双层膜结构，且轮廓清晰，但是试剂盒法提取的外泌体中存在其他蛋白质颗粒。超速离心法提取获得的外泌体较为分散，外泌体粒径集中在55～60 nm之间；试剂盒法提取获得的外泌体大小更为均一，外泌体粒径集中在58 nm左右。两种方法提取的外泌体表面特异性标志物CD63和TSG101蛋白均呈阳性。试剂盒法提取的外泌体浓度极显著高于超速离心法(P<0.01),提取的外泌体表面特异性标志物CD63和TSG101蛋白相对表达量也极显著高于超速离心法(P<0.01)。说明超速离心法和试剂盒法均可以从山羊乳腺上皮细胞重编程过程的细胞上清液中提取出外泌体，区别在于超速离心法提取的外泌体纯度更高，试剂盒法提取的外泌体浓度更高。  相似文献   

不同商品化病毒DNA提取试剂盒对非洲猪瘟病毒检测效果的比较研究     

杨云龙  冯永智  高琦  吴小仪  龚浪  张桂红 《广东畜牧兽医科技》2023,(1):39-43

为建立快速、准确的非洲猪瘟（African swine fever,ASF）检测方法，试验针对ASFV的晚期翻译p72蛋白基因构建了标准品质粒和标准曲线，并利用荧光定量PCR技术对OIE和CADC提供的引物和探针进行灵敏性的比对及对多种DNA提取试剂盒提取的ASFV DNA检测效率进行了评价，为ASFV的高效检测提供数据参考。结果表明：构建的ASFV晚期p72基因的标准品质粒和标准曲线中，p72标准品质粒的检测效率与灵敏度较优。通过使用OIE、CADC分别提供的引物、探针和多种DNA提取试剂盒进行ASFV荧光定量PCR检测，发现CADC提供的引物和探针对于ASFV的检测更加灵敏，Axygen品牌的DNA提取试剂盒对ASFV的检测性价比更高。  相似文献   

市售农残速测试剂盒对5种有机磷农药的敏感性评价     

罗俊霞  赵建波  赵倩倩  张刚  王峰  刘青  张洁  潘玲  赵利敏  马蕾 《农学学报》2022,12(8):73-80

为了对商品化农残速测试剂盒进行评价,全面了解市售农残速测试剂盒的质量,本研究采用市售的6个品牌农残速测试剂盒,在2种情况下（提取液取用2.5 mL和3 mL）对甲拌磷、蝇毒磷、二嗪磷、对硫磷、久效磷进行敏感性测定,根据5种农药在5个浓度水平下的测定结果,绘制6个品牌的试剂盒的抑制率对农药浓度的效应曲线并用抑制率和农药浓度之对数进行线性拟合、计算出相关系数、IC₅₀和IC₁₀,根据IC₁₀对各种试剂盒对每种农药的敏感性进行比较并以此判定试剂盒的优劣。结果表明同一种试剂盒对不同的农药、不同的试剂盒对同一种农药的敏感性均不同;抑制率和农药浓度对数相关性较好的试剂盒其相关系数R²分别为0.4835~1（提取液取用2.5 mL）和0.6602~1（提取液取用3 mL）,IC₁₀分别为2.01×10^-4~3.78 mg/kg（提取液取用2.5 mL）和3.92×10^-3~3.36 mg/kg（提取液取用3 mL）;6种试剂盒对甲拌磷均不敏感,除了A试剂盒外其他试剂盒在5个浓度水平下抑制率均为0。根据所测试的5种农药,将试剂盒分为3个等次,D试剂盒最优,其次是C和E,第三是A、B和F。建议国标和行标修改50%或者70%的判定阈值。  相似文献   

酶抑制-比色法农残速测试剂盒检测效果及贮存条件的研究     

罗俊霞  宋伟  赵建波  乔礼  于璐  宋延娟  王峰  张洁  潘玲  叶茂  桑丽雅  王倩 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》2021,42(5):111-116,129

为探讨商品化农残速测试剂盒的贮存条件及检测效果,将某一品牌试剂盒在28℃室温下存放30 d,用农残快速检测仪测定其3 min的吸光度;同时用6种商品化酶抑制-比色法农残速测试剂盒测定蔬菜中的农药残留,与使用气相色谱-FPD、液相色谱-质谱联用仪定量检测蔬菜中甲胺磷等50种有机磷及涕灭威等10种氨基甲酸酯类农药残留的测定结果相比,得出各试剂盒检测样品的假阳性率、假阴性率及符合率.结果 表明:未配制的试剂在28℃室温下存放30 d及配置后试剂在12℃冰箱中存放15d不影响使用;6种试剂盒检测样品均有一定的假阳性、假阴性样品产生,与色谱、质谱检测结果相比符合率有所差异,D品牌试剂盒检测结果与色谱、质谱检测结果符合率最高.综合而言,酶抑制-比色法农残速测试剂盒作为现阶段的主流检测手段,在检测结果的准确性方面存在较大偏差,不同品牌试剂盒检测效果存在一定差异,这不仅取决于试剂盒的质量,还受制于样品的选取,广大生产者、销售者和使用者应引起重视.  相似文献   

布鲁氏菌抗体镧系高敏荧光快速检测试剂盒的研制     

章健  侯巍  张朝辉  曲伍  李劲  尹杰  郇敏  王泽洲 《四川畜牧兽医》2023,(8):22-25

本试验选用镧系元素铕（Eu）为荧光物质标记布鲁氏菌脂多糖抗原（LPS），建立了布鲁氏菌抗体高敏荧光免疫层析快速检测试剂盒（Bru-LFICA）。经相关试验验证，得出该试剂盒特异性强，敏感性高，重复性好，符合率高，且兼具操作方便，检测快速（15 min），价廉，不需特殊设备和专业技术人员等优点，特别适合于基层兽医站、养殖场的即时快速检测。  相似文献   

两种H7N9流感病毒荧光RT-PCR试剂盒的敏感性和特异性评价          下载免费PDF全文

冯肖肖  赵灵燕  刘霞  黄靖  陈伟良  董建斐  张璐  徐辉 《中国动物检疫》2022,39(10):122-126

为评价两种（A、B）H7N9流感病毒荧光RT-PCR试剂盒的检测性能，对50份疑似感染H7N9流感病毒的禽拭子样品进行H7N9流感病毒核酸检测，使用TG-ROC分析方法筛选荧光RT-PCR最适Ct值（阈值），通过2×2列联表分析两种试剂盒的敏感性和特异性，并用Kappa检验评估其一致性。结果显示：以国家禽流感参考实验室的鸡胚病毒分离鉴定结果为“金标准”，A和B两种试剂盒的敏感性、特异性分别为90.9%（10/11）、56.4%（22/39）和54.5%（6/11）、94.9%（37/39）；两种试剂盒检测结果差异较大，Kappa值为0.28。TG-ROC分析得出：A试剂盒的检测阳性最适阈值为33，对应的敏感性和特异性为90.91%和92.31%；B试剂盒的检测阳性最佳阈值为37，对应的敏感性和特异性分别为81.82%和87.18%。通过调整阈值，A试剂盒的敏感性和特异性均达到90%以上，B试剂盒均达到81%以上，Kappa值为0.85，检测结果一致。结果表明，虽然不同H7N9流感病毒荧光RT-PCR试剂盒的检测性能有差别，但通过调整阈值，可以达到检测所需的最适敏感性和特异性，从而增加临床检测结果的可靠性。本研究为H7N9流感病毒检测试剂盒的应用提供了指导。  相似文献