猪瘟病毒蛋白E2、N^pro基因的克隆表达及纯化     

高璐璐  张思春  郭焕成  涂长春 《中国兽医学报》2012,(8):1101-1104

克隆了猪瘟病毒(CSFV)石门株E2和Npro基因,并分别插入pGEX-6p-1表达载体中,构建了原核重组表达质粒。经IPTG诱导后,应用SDS-PAGE电泳检测结果表明,重组质粒均得以成功表达。使用超声法破碎菌体获得蛋白,将带有GST标签的融合蛋白进行亲和层析,其中E2和Npro的表达形式分别为包涵体表达和可溶性蛋白表达。将E2变性后重折叠,应用亲和层析法纯化蛋白,Western blot检测发现CSFV蛋白E2能够被CSFV阳性血清识别,具有良好的反应原性,而Npro不能与CSFV阳性血清反应。  相似文献   

新型猪瘟疫苗研究进展     

谢沄  白华 《动物医学进展》2008,29(2):79-82

猪瘟(Classical swine fever,CSF)是一种严重威胁养猪业的传染病,预防猪瘟最主要的方法为注射弱毒疫苗,由于传统弱毒疫苗存在着一些不足,需要研制高效而更具特异性的新型猪瘟疫苗。该文简要介绍了新型猪瘟疫苗的研究现状,并对其应用前景进行了分析。  相似文献   

冀鲁豫交界地区PCV-2和CSFV血清抗体调查   总被引：2，自引：0，他引：2  

江成  刘文强  刘桂芹  李吉楠 《动物医学进展》2009,30(8):119-122

调查了冀鲁豫三省交界地区规模养殖场猪群圆环病毒2型(PCV-2)抗体阳性率与其他地区的差异和流行病学特点、PCV-2抗体阳性率对猪瘟病毒(CSFV)抗体的影响。在该地区选择了7个猪场采集了222份血清,用ELISA试剂盒检测PCV-2型和CSFV的抗体水平并进行统计学分析。检测结果表明,7个养猪场的猪群都感染过PCV-2,发生疑似感染的猪病例中PCV-2的平均抗体阳性率在62.2%~72.0%之间,高于其他地区。而猪瘟免疫合格率仅有32.4%~42.4%。PCV-2抗体水平高的猪,猪瘟抗体水平低。表明该地区PCV-2的感染情况比较严重。  相似文献   

牛病毒性腹泻病毒感染对猪瘟免疫的影响   总被引：2，自引：0，他引：2  

张慧英 《四川畜牧兽医》2010,37(10):21-22,25

猪瘟病毒（CSFV）与同属的牛病毒性腹泻病病毒（BVDV）同源性较高,抗原性上有交叉。本次调查对368份猪瘟免疫猪血清样本进行BVDV抗原检测,其中7份呈阳性,阳性率1.90%。对7份BVDV阳性血清采用ELISA和IHA两种方法检测猪瘟（CSFV）抗体水平,抗体合格率偏低,两者的结果符合率为71%。研究表明：BVDV在一定程度上干扰了猪瘟疫苗的免疫效果,影响抗体水平。  相似文献   

猪瘟病毒荧光定量PCR检测方法的建立   总被引：3，自引：1，他引：3  

王云龙  刘建营  韩洁  陈小科  李玉林 《动物医学进展》2009,30(5)

通过RT-PCR方法克隆了猪瘟病毒(CSFV) 5′端非编码区(UTR)的一段靶序列,构建重组质粒作为标准阳性模板.同时根据GenBank中的靶序列设计了用于FQ-PCR的一对引物和一条TaqMan探针.通过条件优化,以定量的10倍系列稀释的质粒为标准品进行荧光定量PCR扩增并制作标准曲线,建立了CSFV检测的荧光定量PCR方法.结果表明,该方法检测灵敏度可达1.0×100拷贝/μL,线性范围为 109～100,达10个数量级;对起始浓度为1.0×109、1.0×108、1.0×107拷贝/μL的标准品的最终实际测得值(Ct)分别为19.73、22.95和26.24;变异系数分别为0.61%、1.77%和1.18%,均小于5%,说明此方法具有良好的准确性和重现性.对阳性组织病料的检测表明,该方法的检测灵敏度高出常规PCR,与套式PCR具有相近的灵敏度.  相似文献   

猪瘟病毒蛋白E2、N^pro基因的克隆表达及纯化     

高璐璐  张思春  郭焕成  涂长春 《兽医大学学报》2012,(8):1101-1104

克隆了猪瘟病毒（CSFV）石门株E2和Npro基因,并分别插入pGEX-6p-1表达载体中,构建了原核重组表达质粒。经IPTG诱导后,应用SDS-PAGE电泳检测结果表明,重组质粒均得以成功表达。使用超声法破碎菌体获得蛋白,将带有GST标签的融合蛋白进行亲和层析,其中E2和Npro的表达形式分别为包涵体表达和可溶性蛋白表达。将E2变性后重折叠,应用亲和层析法纯化蛋白,Western blot检测发现CSFV蛋白E2能够被CSFV阳性血清识别,具有良好的反应原性,而Npro不能与CSFV阳性血清反应。  相似文献   

猪瘟病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立   总被引：2，自引：1，他引：2  

任夫波  张志  张丽丽  杨若松  韩艳  张燕霞  李晓成  单虎 《动物医学进展》2011,32(5):82-85

本研究在CSFV 5'端非编码区设计一对引物和一条特异性TaqMan探针,以构建的重组质粒为标准品,建立了一种检测CSFV的荧光定量PCR方法(FQ-PCR),对该方法进行特异性、敏感性和重复性试验.结果显示,可特异地检测CSFV,该方法在101～107拷贝/μL范围内具有良好的线性关系,灵敏度可达10拷贝/μL,重复...  相似文献   

单克隆抗体捕捉猪瘟病毒抗原ELISA方法的建立   总被引：9，自引：0，他引：9  

刘建文  余兴龙  张丽颖  涂长春 《畜牧兽医学报》2006,37(5):474-479

分别用原核表达的猪瘟病毒（CSFV）主要抗原E2蛋白和猪瘟基因疫苗免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合与克隆筛选出5株稳定分泌CSFV抗体的杂交瘤细胞株1E2、1G7、3A2、3B7和4B6.间接免疫荧光和Western-blotting试验结果表明,5株单抗均与CSFV E2蛋白和全病毒抗原反应.将筛选的CSFV特异性单抗1E2、3B7和4B6纯化后等量混合后包被酶标板（捕捉抗体）,与兔抗CSFV IgG（检测抗体）联合应用,建立起CSFV抗原捕捉ELISA（AC-ELISA）方法.随后采用方阵滴定法确定了单抗与多抗的最适工作浓度及判定检测结果的OD450临界值.最后以建立的AC-ELISA检测CSFV细胞培养物、CSFV攻毒死亡猪的病料和临床猪瘟组织样品,结果表明,该方法敏感、特异、重复性好,与病毒分离和RT-PCR方法符合率分别为86.2%和90.3%.  相似文献   

一步法RT-PCR同时检测CSFV和PRRSV方法的建立及应用     

李圣  郑欢莉  李红炳  孔令富  张晓敏  钏有科  孙永科  杨玉艾 《动物医学进展》2011,32(6):40-44

猪瘟(CSF)和猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是严重危害云南养猪业的传染病,为了建立一种能快速诊断猪瘟和猪繁殖与呼吸综合征混合感染的方法,根据NCBI上已发表的猪瘟病毒(CSFV)保守基因Erns和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)保守基因M基因的核苷酸序列,利用Oligo 6.0设计了2对特异性引物,经过PCR反应...  相似文献