天山雪莲遗传转化体系建立   总被引：2，自引：0，他引：2  

管岩岩  任国栋  郭新勇  祝建波 《西北农业学报》2010,19(7):84-88

采用根癌农杆菌介导法进行GFP基因的遗传转化,建立了农杆菌介导天山雪莲遗传转化体系。以天山雪莲胚性愈伤组织为受体;40 mg/L的卡那霉素为胚性愈伤组织筛选质量浓度;胚性愈伤组织预培养2 d后用含100μmol/L AS和500 mg/L脯氨酸的感染工程菌液侵染25 min,能够取得比较理想的转化效果。对8株卡那霉素抗性植株进行PCR及GFP荧光蛋白检测,共获得6株阳性植株。结果表明GFP基因已整合到天山雪莲的基因组中并得到表达。  相似文献   

Differential colonization and defence responses of resistant and susceptible melon lines infected by Fusarium oxysporum race 1·2     

T. Zvirin  R. Herman  Y. Brotman  Y. Denisov  E. Belausov  S. Freeman  R. Perl‐Treves 《Plant pathology》2010,59(3):576-585

  相似文献   

粟酒裂殖酵母蛋白质细胞定位载体的构建     

杨景  于莹莹  黄鹰 《安徽农业科学》2010,38(24):12971-12972,12977

[目的]构建用于研究粟酒裂殖酵母蛋白质细胞定位的载体。[方法]将gfp＋和nmt1＋启动子基因克隆到pJK148质粒中,构建含有GFP的表达载体,并利用野生型trz1＋检测荧光表达效果。[结果]nmt1＋启动子与trz1＋的起始密码子相距45个碱基时,无荧光信号。当nmt1＋启动子与trz1＋的起始密码子相距6个碱基时,荧光信号很强。[结论]可以利用pYJ4研究粟酒裂殖酵母蛋白质的细胞定位。  相似文献   

脂质体转染陆川猪胎儿成纤维细胞条件的优化   总被引：1，自引：0，他引：1  

粟文俊 《中国农学通报》2011,27(7):300-303

本研究旨在脂质体介导基因转染陆川猪胎儿成纤维细胞时获得较高转染效率,同时以GFP为报告基因探讨影响外缘基因转染效率的参数,如DNA和脂质体的用量、转染的细胞数量及细胞与DNA与脂质体复合物的孵育时间。结果表明, 6μgDNA与15μl脂质体转染8h,可获得较满意的转染效率.  相似文献   

适于植物转基因体系优化的绿色荧光蛋白表达载体构建及其瞬时表达验证   总被引：1，自引：1，他引：0  

王锐 王俊斌丁博  李明包曙光  谢晓东 《中国农学通报》2013,29(15):164-168

在建立和优化植物的转基因体系时,通常期望转化载体同时具有适用植株范围广、尺寸较小、具有多重选择标记或报告基因等优点。为此,通过Gateway技术,构建了含有绿色荧光蛋白基因GFP的植物表达载体pGWB14-GFP,并经PCR鉴定和测序验证了序列的准确性。利用基因枪转化法,将该载体转入洋葱表皮和小麦叶片中,通过荧光显微镜检测,发现绿色荧光蛋白在洋葱表皮细胞和小麦叶片表皮细胞中均能瞬时表达,表明pGWB14-GFP在双子叶和单子叶植物中都能正常发挥功能。本载体在双子叶和单子叶植物植物中都可使用,大小低于17 kb,含有GFP报告基因,具有两套卡那霉素和潮霉素选择标记基因,用于在细菌和植物中筛选,为植物转基因体系的构建和优化提供了功能强大的转化载体。  相似文献   

绵羊羊水干细胞外源基因高效转染及快速筛选方法的建立     

王凤武  郝斐  魏著英  刘东军  荣威恒 《中国畜牧兽医》2013,40(11):16-20

试验旨在建立绵羊羊水来源多潜能干细胞(amniotic fluid-derived stem cells,AFSC)外源基因高效转染及快速筛选方法,同时保持其多潜能特性。采用脂质体法,以pCMV-DsRed为报告质粒,转染绵羊AFSC,36 h后,流式细胞仪分析外源基因的瞬时转染效率为69.17%。以浓度为6 mg/mL的G418筛选5 h获得纯化转基因绵羊AFSC单克隆。转基因绵羊AFSC RT-PCR检测表达Oct-4、SSEA-1,体外悬浮培养可形成类胚体。结果表明,转基因标记绵羊AFSC保持了发育全能性的潜能,构建的转基因绵羊AFSC可以示踪性研究其在体内的分化路径和最终宿主。  相似文献   

CHX-GFP融合基因的构建及在胡萝卜愈伤组织中瞬时表达     

张红心  陈超  王桂兰  乔永旭  赵璞  马春红 《华北农学报》2014,(6)

为构建CHX-GFP融合基因并将其在胡萝卜愈伤组织中瞬时表达。采用融合PCR方法,将属于CAP2家族的Na+/H+反向转运蛋白基因CHX和GFP基因相融合,利用中间载体,采用DNA重组技术将CHX-GFP融合基因插入到p1301植物表达载体中,采用冻融法将重组质粒导入到农杆菌中,遗传转化时所用侵染液为1/2MS+AS 100μmol/L,共培养基为MS+6-BA 0.5 mg/L+2,4-D 0.5 mg/L+琼脂6 g/L+蔗糖30 g/L+葡萄糖10 g/L+AS 50μmol/L,共培养时间为4 d。成功构建了p1301-35S-CHX-GFP-Nos植物表达载体,CHX-GFP融合基因在胡萝卜愈伤组织中得到瞬时表达,表达效率为75%。采用融合PCR获得CHX-GFP融合基因的方法比较简单,无须知道DNA序列的酶切位点,省时省力,CHX-GFP融合基因及其表达载体的成功构建将为进一步探查CHX亚细胞定位及CHX基因的功能奠定了基础。  相似文献   

Effect of calcium on porcine ICSI embryos expressing EGFP is related to activation of ooplasmic DNase I     

Shuaishuai WU  Heng CHEN  Yingzheng WANG  Hui GAO  Shenming ZENG 《农业科学与工程前沿(英文版)》2015,2(1):84

Several reliable methods to produce transgenic animals use the male genome. After penetration into oocytes, sperm DNA undergoes dramatic conformational changes that might represent an opportunity for exogenous DNA to integrate into the zygote genome. A nuclease,DNase I, with Ca2+/Mg2+dependent activity and Zn2+inhibition, is one of the enzymes responsible for sperm DNA remodeling. To date, the effect of different calcium concentrations in manipulation media on porcine intracytoplasmic sperm injection has not been fully investigated.The present study was conducted to examine the effect of calcium in the surrounding media, and we found that the number of embryos expressing green fluorescent protein(EGFP) was increased in media containing Ca2+. However, the number did not change over Ca2+concentrations from 2 to 8 mmol$L–1(P 0.05). Moreover, free Ca2+concentrations in the media were found to affect the efficiency which is porcine intracytoplasmic sperm injection(ICSI) embryos expressing EGFP protein, which was related to the activation of ooplasmic DNase I. These findings reveal a mechanism and pathway involving EGFP expression in ICSI embryos.  相似文献   

Dry mycelium of Penicillium chrysogenum activates defense responses and restricts the spread of Tobacco Mosaic Virus in tobacco     

《Physiological and Molecular Plant Pathology》2015

  相似文献   

拮抗内生细菌Bacillus mojavensisZA1在马铃薯根内及根际的定殖动态及其对土壤微生物的影响   总被引：2，自引：0，他引：2       下载免费PDF全文

王颖  杨成德  薛莉  崔月贞  杨小利 《中国生物防治学报》2016,32(3):372-378

利用GFP标记和平板分离法研究了拮抗内生细菌Bacillus mojavensisZA1在马铃薯根内及根际的定殖动态及其对土著微生物的影响。结果表明,标记菌株ZA1-gfp在土壤中定殖数量为3.7×10⁴~7.3×10⁴cfu/g;马铃薯根际为3.0×10³~1.5×10⁵cfu/g,根内为49~630cfu/g;马铃薯的根部横切面、根毛和根表皮等部位均观察到发绿色荧光的菌株ZA1-gfp菌体或聚集菌落。利用灌根法施入生防菌后,土壤中细菌、放射菌数量显著增加(P<0.05),土壤真菌数量在中期下降;土壤中细菌、真菌和放线菌的数量分别在相对稳定范围内(数据之间差异不显著)消长。该结果说明菌株ZA1-gfp能够在马铃薯根内及根际定殖且不影响土壤中土著微生物的群落稳定性。  相似文献