间接ELISA法对禽霍乱抗体的动态监测   总被引：5，自引：0，他引：5  

梁荣  张耀相  刘再超  曹启学  李健强 《中国预防兽医学报》1999,(6)

将40只50日龄健康禽霍乱非免疫鸡随机分为四组，每组10只。用禽霍乱蜂胶佐剂灭活疫苗对各组鸡进行不同水平的免疫，同时设非免疫对照组。各组鸡间隔5-7天采血，以间接ELISA法测定血清P／N值，并确定临界值。将P／N值在2.1-4.7的13只试验鸡以一个最小致死量（相当于10个菌／ml）进行攻毒试验，同时设攻毒对照，在1周内3只对照鸡均表现感染发病并死亡，而试验鸡均健活，从而初步证明所确定的临界值是合理的。  相似文献   

大黄鱼C型凝集素受体Clec4e的分子鉴定及凝集特性     

张鑫洛  王永阳  吴子良  陈新华  张伟妮 《水产学报》2024,48(2)

C型凝集素受体（C-type lectin receptor，CTLR）是可以特异性结合糖类病原体相关分子模式（pathogen-associated molecular patterns，PAMPs）的模式识别受体（pattern recognition receptors，PPRs），在先天性免疫中发挥着重要作用。为了揭示硬骨鱼CTLR的生物学功能，本研究以从大黄鱼（Larimichthys crocea）转录组数据库中筛选出的一个CTLR基因—C型凝集素结构域家族4成员E基因（C-type lectin domain family 4 member E gene，Clec4e）为研究对象，研究其分子特征、表达分布和凝集特性。结果显示，LcClec4e cDNA全长1546 bp，开放阅读框（open reading frame，ORF）771 bp，编码254个氨基酸。LcClec4e的N端有一个跨膜区，无信号肽，C端含有一个糖识别结构域（carbohydrate recognition domain，CRD），其中含有糖结合位点EPN和WFD以及6个可形成二硫键的保守半胱氨酸。系统发育分析表明，LcClec4e与多种鲈形目鱼类Clec4e具有较近的亲缘关系。荧光定量PCR结果显示，LcClec4e在所检测的10种组织中呈组成型分布，且在肝脏中表达量最高；LcClec4e在来源于大黄鱼头肾组织的原代巨噬细胞、淋巴细胞和粒细胞中均有表达，且在巨噬细胞中表达量最高；经灭活溶藻弧菌刺激后，LcClec4e在3种免疫细胞中的表达均极显著上调。原核表达的重组LcClec4e胞外段（recombinant LcClec4e-extracellular domain，rLcClec4e-ex）具有Ca2+依赖性的凝集活性，可凝集小鼠、家兔的红细胞，以及嗜水气单胞菌、变形假单胞菌、溶藻弧菌和坎氏弧菌等4种水产常见的革兰氏阴性菌。D-葡萄糖、D-果糖、D-甘露糖、D-麦芽糖、α-乳糖和脂多糖均可抑制rLcClec4e-ex对大黄鱼重要病原菌变形假单胞菌的凝集作用，说明LcClec4e可能与变形假单胞菌表面的糖类物质结合。这些研究结果提示，LcClec4e可能作为一种PPR，通过结合病原菌表面的糖类PAMPs来识别病原，参与大黄鱼抗细菌感染的免疫防御。  相似文献   

A型口蹄疫病毒VP1蛋白间接ELISA检测方法的建立     

卢清侠  刘畅  郭官鹏  邢广旭  刘运超  邓瑞广  张改平 《西北农业学报》2014,23(1):30-35

以原核表达经纯化复性制备的A型口蹄疫病毒(FMDV)VP1蛋白代替传统病毒抗原包被,建立快速、安全、有效的A型FMDV抗体ELISA检测方法。对前期制备的A型VP1蛋白进行Western-Blot检测,结果表明,VP1蛋白能够特异性识别A型FMDV阳性牛血清,可作为检测抗原建立检测A型FMDV抗体的方法。以最佳质量浓度1mg/L VP1蛋白为检测抗原,方阵滴定法确定最佳检测血清稀释度为1∶50[V(血清)∶V(封闭液)],最佳的酶标二抗稀释度为1∶2 000[V(酶标二抗)∶V(封闭液)],建立A型FMDV抗体ELISA检测方法。该方法的敏感性为94.32%,特异性为99.09%,批内与批间重复试验变异系数均小于8%。采用该方法检测201份临床血清,与液相阻断ELISA试剂盒的符合率达92.54%。研制的VP1-ELISA试剂盒特异、敏感、稳定、操作简便,可用来监控A型口蹄疫抗体水平。  相似文献   

团头鲂血清抗病毒半乳糖凝集素样蛋白的分离与鉴定   总被引：1，自引：0，他引：1       下载免费PDF全文

何介华 《水产学报》2003,27(5):474-479

将草鱼出血病病毒(GCHV)的结构蛋白与Sepherose-4B偶联制备亲和柱，经亲和层析从团头鲂血清中分离到一种蛋白，能凝集兔红细胞，其血凝性依赖于β巯基乙醇的存在。红细胞凝集抑制实验证实该蛋白与D半乳糖有最高的亲和力，其次为甘露糖。梯度PAGE测得其分子量约为240000，SDS梯度PAGE证实该蛋白由分子量为15000的单个亚基组成，亚基之间没有共价连接。以上特性与半乳糖凝集素相符，故称其为团头鲂抗病毒半乳糖凝集素样蛋白。抗体阻断试验证实，此种凝集素样蛋白是团头鲂血清抗病毒及红细胞凝集活性的主要成分。N末段的氨基酸序列为Lys-Val-Asn-Leu-Asp-Glu-Lys-Cys-Pro-Phe，检索GenBank，未发现与这一段序列同源的蛋白质。  相似文献   

Indirect host effect on ectomycorrhizal fungi: Leaf fall and litter quality explain changes in fungal communities on the roots of co-occurring Mediterranean oaks     

Cristina Aponte  Luis V. García  Monique Gardes 《Soil biology & biochemistry》2010,42(5):788-796

Host trees can modify their soil abiotic conditions through their leaf fall quality which in turn may influence the ectomycorrhizal (ECM) fungal community composition. We investigated this indirect interaction using a causal modelling approach. We identified ECM fungi on the roots of two coexisting oak species growing in two forests in southern Spain - Quercus suber (evergreen) and Quercus canariensis (winter deciduous)-using a PCR-based molecular method. We also analysed the leaf fall, litter and soil sampled beneath the tree canopies to determine the concentrations of key nutrients. The total mycorrhizal pool was comprised of 69 operational taxonomic units (OTUs). Tomentella and Russula were the most species-rich, frequent and abundant genera. ECM fungi with epigeous and resupinate fruiting bodies were found in 60% and 34% of the identified mycorrhizas, respectively. The calcium content of litter, which was significantly higher beneath the winter-deciduous oak species due to differences in leaf fall quality, was the most important variable for explaining ECM species distribution. The evaluation of alternative causal models by the d-sep method revealed that only those considering indirect leaf fall-mediated host effects statistically matched the observed covariation patterns between host, environment (litter, topsoil, subsoil) and fungal community variables.  相似文献   

间接酶联免疫吸附试验检测猪生殖与呼吸系统综合征血清抗体的研究   总被引：2，自引：0，他引：2  

罗长保  孙颖杰 《中国兽医杂志》1997,23(10):6-7

本研究建立了检测猪生殖与呼吸系统综合征（ＰＲＲＳ）血清抗体的间接酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ），其抗原包被浓度为２μｇ／ｍｌ，血清最适稀释度为１∶１００。试验结果表明：ＥＬＩＳＡ的敏感性高于间接免疫荧光抗体试验（ＩＦＡ），是一种切实可行的诊断方法。  相似文献   

间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清4型鸭疫里默氏杆菌抗体的研究   总被引：7，自引：0，他引：7  

程安春  汪铭书  方鹏飞  郭宇飞  刘兆宇  陈孝跃  周毅 《中国家禽》2004,26(16):11-14

应用超声波裂解珐制备的血清4型鸭疫里默氏杆菌(RA)裂解物作为抗原包被酶标板，成功建立了4型RA抗体检测的间接ELISA法。  相似文献   

犬传染性肝炎病毒的血凝抑制抗体和中和抗体的关系   总被引：2，自引：0，他引：2  

范泉水  夏咸柱  邱薇  黄耕  何洪彬  余春  乔军  武银莲 《动物医学进展》2002,23(1):64-66

犬传染性肝炎病毒（Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ　ｃａｎｉｎｅ　ｈｅｐａｔｉｔｉｓ　ｖｉｒｕｓ，ＩＣＨＶ）能诱导动物机体产生中和（Ｓｅｒｕｍ　ｎｅｕｔｒｏｌｉｚａｔｉｏｎ，ＳＮ）抗体与血凝抑制（Ｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎａｔｉｏｎ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ，ＨＩ）抗体，本研究对８份ＩＣＨＶ免疫的犬血清同时进行了其ＳＮ抗体和ＨＩ抗体的检测，结果表明ＳＮ抗体和ＨＩ抗体具有正比线性关系ＳＮ≈８×ＨＩ，并绘制了标准曲线。由于血凝和ＨＩ试验不需应用活的试验宿主系统，而且可在３　ｈ内获得结果，操作经济简便，因此可通过测定ＨＩ抗体的效价来推算出ＳＮ抗体效价。  相似文献   

PRRSV重组N蛋白的抗原性分析及其特异性抗体制备   总被引：5，自引：1，他引：4  

夏向荣  李玉峰  姜平 《畜牧与兽医》2003,35(9):6-8

利用大肠杆菌表达技术和亲和层析法纯化出重组PRRSV N蛋白 ,用间接ELISA法和Western blot分析 ,证明其具有较好的抗原性。将该纯化蛋白采用大剂量长程免疫法免疫家兔 ,制备了兔抗重组N蛋白抗体 ,用Western blot分析和竞争抑制试验证明其具有很高的特异性 ,ELISA效价达 1∶32 0 0以上。  相似文献   

提高鸡传染性支气管炎病毒血凝抗原滴度途径及抗原灭活   总被引：4，自引：0，他引：4  

吴延功  刘虹 《中国兽医学报》1997,17(3):222-225

将７株传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）标准株（Ｍ４１、Ｈ１２０、Ｈｏｌｔｅ、Ｇｒａｙ、Ｃｏｎｎｅｃｔｉｃｕｔ、Ｉｏｗａ６０９和Ｔ株）和６株分离株（ＮＩＢＶ、ＧＩＢＶ、Ｍ、ＳＨ、Ｊ和Ｈ株）分别接种于鸡胚，收获尿囊液，经浓缩后，用魏氏梭菌培养液处理，制备血凝抗原。其中，Ｈ１２０株血凝滴度最高，Ｔ、Ｍ、Ｊ和Ｈ株无血凝性。应用含有不同滴度ＩＢＶ母源抗体的鸡胚增殖病毒制备抗原，效价与用ＳＰＦ鸡胚增殖病毒制备的抗原效价一致。尿囊液经反复冻融后再制备抗原会使血凝价降低。抗原分别用甲醛、高碘酸钠、硼氢化钾和ＳＤＳ灭活，其中甲醛灭活效果最理想。抗原对氯仿敏感，对乙醚稳定。适宜浓度的Ｎａ＋、Ｍｇ２＋可显著提高抗原的血凝性  相似文献