采用通用引物PCR配合SSCP和RFLP技术检测鱼病病原菌   总被引：8，自引：0，他引：8  

彭宣宪 《水产学报》2000,24(4):345-348

采用通用引物PCR（UPPCR）、PCR－RFLP、PCR－SSCP技术,研究快速鉴别鱼病病原菌的分子生物学诊断技术。结果发现,采用细菌16S rRNA基因保守区特异性引物,以嗜水气单胞菌、鲁克氏耶尔森菌、鳗弧菌、柱状曲挠杆菌、乙型链球菌、荧光假单胞菌等部分常见鱼病病原菌为对象,可以建立一种UPPCR技术。该技术能在保证实验条件不变的基础上,检出上述所有细菌,并还可检出大肠杆菌和双歧杆菌等非鱼病病原菌。并且认为,该法与SSCP配合即采用UPPCR－SSCP技术能较好地鉴别被检菌而用于鱼病病原菌的快速诊断。  相似文献   

拟穴青蟹GRP78基因的克隆与应激表达     

巩杰  叶海辉  于坤  黄辉洋  李少菁 《水产学报》2013,37(10):1479-1486

葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78 ku,GRP78)是热休克蛋白70家族成员之一,在调节蛋白质折叠和维持内质网稳态过程中起着分子伴 侣作用。采用RT-PCR、RACE等技术,首次从拟穴青蟹获得了GRP78的cDNA全长序列。该序列全长2 284 bp,开放阅读框(ORF)为1 962 bp,编码653个氨基酸残基。 同源分析显示,该基因编码的蛋白含有HSP70家族的签名序列,C末端为内质网蛋白滞留信号KDEL,与其他物种具有很高相似性。实时荧光定量PCR结果表明,GRP78 基因在拟穴青蟹多个组织中均有表达。第一期仔蟹在不同的温度和盐度下暴露12 h后,GRP78基因表达量随环境温度升高而增加;在高盐(30)条件下GRP78表达量 较高,进而推测拟穴青蟹GRP78参与蛋白质折叠和环境胁迫的应答。  相似文献   

马蔺cbf转录因子的克隆及序列分析   总被引：3，自引：0，他引：3  

车代弟  张微微  王金刚  姚丹青  樊金萍 《园艺学报》2009,36(6):861-866

根据GenBank已发表的拟南芥cbfs转录因子基因序列设计特异性引物, 采用PCR和RT-PCR方法, 从鸢尾科野生花卉马蔺基因组DNA和cDNA中克隆出cbf转录因子基因片段, 将其克隆到pMD18-T-Vector上。经序列测定及分析表明, 两种途径得到的cbf基因序列相同, 基因全长642 bp, 可编码213个氨基酸。同源性分析表明该基因的核苷酸序列和推导的氨基酸序列与其它植物cbf类基因具有同源性, 尤其与拟南芥cbf1和黄瓜cbf1基因有很高的同源性, 氨基酸同源性高达97%。鉴于同cbf1基因高的同源性, 初步确定克隆到马蔺cbf1转录因子基因, 命名为Ilcbf1, 在GenBank中登录号为DQ131497。  相似文献   

白菜S位点糖蛋白基因的克隆与表达分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

张爱芬  李英  刘同坤  史公军  侯喜林 《园艺学报》2009,36(2):273-278

 以白菜自交不亲和系为材料,采用RT-PCR技术,用特异引物对SLG基因进行克隆,获得SLG基因cDNA序列长度为1 324 bp,命名为BcSLG。序列分析表明：所获得的白菜BcSLG基因cDNA序列包含一完整的编码框,编码432个氨基酸,含有12个保守的半胱氨酸残基和7个N-糖基化位点。序列比对和系统进化分析表明：BcSLG与其它植物的SLG基因氨基酸序列具有较高的同源性,与大白菜和甘蓝亲缘关系最近。荧光定量PCR分析表明：BcSLG基因在自交不亲和系的柱头中表达量最高,其次是花蕾,叶片中表达最低, 在自交亲和系的柱头、花蕾和叶片中相对表达较低。  相似文献   

中国大菱鲆虹彩病毒(TRBIV)PCR检测方法的建立及其应用     

史成银  黄倢  杨冰  刘莉 《中国水产科学》2008,15(5)

大菱鲆红体病虹彩病毒(turbot reddish body iridovirus,TRBIV)是中国工厂化养殖大菱鲆的主要病毒性病原之一.本研究提取了该病毒DNA,依据其主要衣壳蛋白基因序列设计了PCR引物,优化了PCR反应参数,建立了TRBIV的PCR检测方法,测试了该方法的特异性和灵敏度,并应用该方法开展了TRBIV的流行情况调查及研究了大菱鲆的外观症状(红体)与TRBIV感染的关系.结果显示,本研究建立的TRBIV PCR检测方法可以从相当于100ng病鱼组织中或103数量级的病毒粒子中检出TRBIV,也可以在不杀死被测鱼的情况下,仅从鱼体中抽取少量血液即可在1天的时间内完成大量样品的TRBIV检测,但不能从健康大菱鲆脾组织和患淋巴囊肿牙鲆的囊肿组织中扩增出任何产物,说明该方法具有很高的灵敏性和特异性;在所调查的山东半岛5家大菱鲆养殖场的19尾大菱鲆中,7尾为TRBIV阳性或弱阳性;具有"红体"症状的大菱鲆应当划分为"病毒性红体病"、"细菌性红体病"和"非病原性红体症"3种不同的类型.本研究为TRBIV的流行情况和传播途径调查、疾病的快速诊断和控制提供了技术手段;调查结果显示TRBIV已遍布山东半岛沿海地区的大菱鲆主产区,在地域上相距较远的多个大菱鲆养殖场流行,今后需要密切关注该病毒的传播和流行.  相似文献   

Relationship between stable carbon isotope discrimination and water use efficiency under regulated deficit irrigation of pear-jujube tree   总被引：2，自引：0，他引：2  

Ningbo Cui  Taisheng Du  Shaozhong Kang  Fusheng Li  Xiaotao Hu  Mixia Wang  Zhijun Li 《Agricultural Water Management》2009,96(11):1615-1622

To investigate the relationship between stable carbon isotope discrimination (Δ) of different organs and water use efficiency (WUE) under different water deficit levels, severe, moderate and low water deficit levels were treated at bud burst to leafing, flowering to fruit set, fruit growth and fruit maturation stages of field grown pear-jujube tree, and leaf stable carbon isotope discrimination (Δ_L) at different growth stages and fruit stable carbon isotope discrimination (Δ_F) at fruit maturation stage were measured. The results indicated that water deficit had significant effect on Δ_L at different growth stages and Δ_F at fruit maturation stage. As compared with full irrigation, the average Δ_L at different growth stages and Δ_F at fruit maturation stage were decreased by 1.23% and 2.67% for different water deficit levels, respectively. Δ_L and Δ_F among different water deficit treatments had significant difference at the same growth stage (P < 0.05). Under different water deficit conditions, significant relationships between the Δ_L and WUE_i (photosynthesis rate/transpiration rate, P_n/T_r), WUE_n (photosynthesis rate/stomatal conductance of CO_2, P_n/g_s), WUE_y (yield/crop water consumption, Y/ET_c) and yield, or between the Δ_F and WUE_y and yield were found, respectively. There were significantly negative correlations of Δ_L with WUE_i, WUE_n, WUE_y and yield (P < 0.01) at the fruit maturation stage, or Δ_L with WUE_i and WUE_n (P < 0.01) over whole growth stage, respectively. Δ_F was negatively correlated with WUE_y, WUE_n and yield (P < 0.05), but positively correlated with ET_c (P < 0.01) over the whole growth stage. Thus Δ_L or Δ_F can compare WUE_n and WUE_y, so the stable carbon isotope discrimination method can be applied to evaluate the water use efficiency of pear-jujube tree under the regulated deficit irrigation.  相似文献   

近红外玉米品种鉴别系统预处理和波长选择方   总被引：1，自引：1，他引：0  

郭婷婷  邬文锦  苏谦  王守觉  安冬 《农业机械学报》2009,40(Z1):87-92

以7个品种玉米籽粒的鉴别系统为研究对象,对比研究了6种预处理方法和波长选择对模型鉴别能力的影响.结果表明,在被比较的6种预处理方法中,一阶导数方法能够使模型有更好的鉴别性能.使用一阶导数预处理和全光谱区的模型平均正确识别率和正确拒识率最高,分别为98.6%和98%,有5个品种的模型的正确识别率和正确拒识率都达到了100%.波长选择对一阶导数模型没有明显作用,但能使标准正态变量变换和矢量归一化模型鉴别准确度得到较大提高.  相似文献   

Identification and genetic characterization of Streptococcus iniae strains isolated from diseased fish in China     

Zhou SM  Xie MQ  Zhu XQ  Ma Y  Tan ZL  Li AX 《Journal of fish diseases》2008,31(11):869-875

  相似文献   

木薯遗传图谱16号连锁群与其细胞学图谱的整合     

王婧菲  高和琼  庄南生  李开绵  王英 《热带作物学报》2013,34(6):1018-1023

利用荧光原位PCR技术体系整合木薯的分子遗传图谱,将16号连锁群上的NS376和SSRY86标记定位到华南6号木薯的染色体上,结果表明:这2个标记均能在华南6号不同时期的细胞上检测到1个信号.结合核型分析,将NS376标记定位在华南6号的第4号染色体的短臂上,扩增位点到着丝粒的百分距离是31.25,将SSRY86标记定位在第4号染色体的长臂上,扩增位点到着丝粒的百分距离是75.86.NS376和SSRY86 2个标记位于木薯的同一对染色体上,并且分别位于该染色体的两端,进一步揭示了16号连锁群对应的是木薯的4号染色体.  相似文献   

甘蔗叶片宿根矮化病的PCR检测     

赵婷婷  王俊刚  杨本鹏  冯翠莲  熊国如  蔡文伟  王文治  伍苏然  张树珍 《热带作物学报》2011,32(5):870-873

采用PCR方法对甘蔗植株不同生长时期(幼苗期、分蘖期、拔节期、成熟期)、同一植株的不同叶片及同一叶片的不同部位(叶尖、叶中、叶基)分别取样进行宿根矮化病检测。结果表明:在不同甘蔗生长时期常规PCR方法都可以检测出宿根矮化病阳性植株;对呈阳性植株的不同叶片及同一叶片的不同部位检测均呈阳性,说明被检测甘蔗品种植株不同位置叶片对甘蔗宿根矮化病检测效率影响差异不明显。  相似文献