油茶SRAP-PCR反应体系的建立和优化     

孙佩光  奚如春  钮世辉  骈瑞琪  陈晓阳 《广西农业生物科学》2010,(6):1192-1199

为了建立油茶SRAP-PCR扩增体系,本研究使用单因素试验设计,对反应体系的Taq酶、Mg2＋、模板DNA、dNTP和引物浓度5个主要影响因子各设10个不同的水平梯度,筛选出适宜的因子范围;在此基础上,进一步采用L16（45）正交设计,对影响油茶SRAP-PCR反应体系的5个因素在4水平上进行优化,建立了油茶SRAP-PCR最佳反应体系,即25μL体积中包含模板DNA30ng,Mg2＋2.8mmol/L,引物0.44μmol/L,dNTP0.2mmol/L和Taq酶1.0U。该SRAP-PCR体系的建立为油茶种质资源遗传多样性分析、品种鉴定及指纹图谱构建等研究提供了一个标准化的程序。  相似文献   

PCR技术基本原理教学方法   总被引：1，自引：1，他引：0  

高贵田  李冰  张宝善  孙翔宇 《农产品加工．学刊》2012,(1):127-129,132

分析了PCR第1至第6反应周期"长产物片段"与"短产物片段"类型、数量的变化,再用数学归纳法推导出第n个反应周期各种分子的数量。分析表明,PCR反应体系中的"长产物片段"有P,Q两种类型,"短产物片段"只有R一种类型;当循环数N=n时,Pn=2,Qn=Qn=2(n-2),Rn=2n-2n。将本分析方法用在教学中,有利于学生理解PCR的基本原理,教学效果理想。  相似文献   

苔藓植物matK基因PCR反应体系的建立和优化     

郑红建  张安世 《安徽农业科学》2012,40(4):1961-1962,2069

[目的]建立和优化适合于苔藓植物matK基因的PCR反应体系。[方法]以鳞叶藓为材料,利用改良CTAB法提取了基因组DNA,利用单因素试验分析了DNA模板、引物和2×Taq MasterMix的浓度对苔藓植物matK基因PCR反应的影响,对适合苔藓植物的matK基因PCR反应条件进行了优化。[结果]适合苔藓植物的matK基因PCR反应体系为10.0μl,其中含DNA模板0.5μl,正反引物各0.2μl,2×Taq MasterMix 5.6μl。[结论]为苔藓植物的分子系统学等研究奠定了基础。  相似文献   

珍稀植物攀枝花苏铁ISSR扩增条件的优化     

张颖  雷泞菲  徐莺  陈放 《勤云标准版测试》2007,(4)

在利用ISSR技术对攀枝花苏铁(Cycas panzhihuaensis)种质资源遗传多样性进行研究的实验过程中,对影响PCR扩增效果的一些因素如DNA的提取、模板DNA质量浓度、Taq酶用量、引物用量、dNTP的用量以及退火温度等指标进行筛选和优化。试验结果表明,20μl的反应体系中采用15～25ng的模板DNA、2.0～2.5mmol/L的Mg2 浓度、0.2mmol/L的dNTPs、0.2μmol/LISSR引物、0.2UTagDNA聚合酶、48℃～55℃(退火温度随引物不同而定)的复性温度,以及35个循环数为攀枝花苏铁ISSR—PCR扩增条件的最佳选择。攀枝花苏铁ISSR-PCR扩增条件的优化为进行攀枝花苏铁种群间遗传分化的研究奠定了基础。  相似文献   

烟草RAPD反应体系的建立与优化研究     

杨友才  周清明  尹晗琪 《勤云标准版测试》2005,(5)

以烤烟品种为材料,研究了烟草RAPD分析过程中的影响因素,包括模板浓度、Mg2 、dNTP、引物、Taq酶、循环次数、退火温度等,建立了适于烟草RAPD分析的PCR反应体系:即在25μl反应体系中,模板用量为40ng;引物浓度为0.4μM;Mg2 浓度为2.5mM;dNTP浓度为0.2mM;TaqDNA聚合酶用量为1U。扩增程序为94℃预变性5min;然后94℃变性1min,38℃复性1min,72℃延伸1.5min,39个循环;最后72℃延伸5min。  相似文献   

热重法研究木材热解反应动力学   总被引：13，自引：0，他引：13  

阎昊鹏  陆熙娴 《木材工业》1997,11(2):14-18

本文应用热重分析法研究了木材热解过程，结果表明：１．失去水分后的试样木粉，α－纤维素热解反应分两阶段进行，克拉松木素热解反应只有一个阶段，２．热解反应的表观活化能α－纤维素〉试样木粉〉克拉松木素，在低温阶段热解时α－纤维素表以活化能远大于试样木粉，而在高温阶段热解时α－纤维素和试样木粉反应表观活化能基本相同，３．试样木粉和α－纤维素各阶段反应级数均为１，克拉松木素的热解反应级数因树各种的不同而有较  相似文献   

食用向日葵SSR-PCR反应体系的优化   总被引：1，自引：0，他引：1  

胡小利  马庆  包海柱  范瑞  孙希利  马蓉 《华北农学报》2015,(2)

为建立食用向日葵分子标记反应体系,以食用向日葵四叶期叶片为DNA模板提取材料,采用单因素试验和正交试验设计,对SSR-PCR反应体系中的6因素(10×PCR Buffer、Mg2+、d NTPs、引物、Taq DNA聚合酶和DNA模板)在5水平上进行正交优化试验,并比较了不同浓度Mg2+、Taq DNA聚合酶、模板DNA对扩增效果的影响,结果表明,各因素水平变化对反应体系的影响为Mg2+Taq DNA聚合酶(引物)DNA模板10×PCR Bufferd NTPs。最终建立食用向日葵SSR-PCR最佳反应体系为:在总体系为20μL的SSR-PCR反应体系中包括10×PCR Buffer 0.2mmol/L、Mg2+2.0 mmol/L、d NTPs 1.8 mmol/L、Taq DNA聚合酶0.2 U、DNA 50 ng、引物1.5 mmol/L。  相似文献   

Long-term fluctuation of the soil fauna (Collembola and Oribatida) at groundwater-near sites in an alder wood   总被引：1，自引：0，他引：1  

Ulrich Irmler 《Pedobiologia》2004,48(4):349-363

Collembola and oribatid mites were investigated at four sites along a cross section in an alder wood at a lake margin (northern Germany) over a period of 7 years. Monthly samples of the litter and the mineral layer were taken. Additionally, fluctuations of groundwater level, soil moisture, precipitation and soil temperature at 2 cm depth were measured. The alder wood was characterised by a depression between the lake margin and the foot of a hill slope, where waterlogged periods occurred. Groundwater level was the main environmental factor influencing the composition of collembolan and oribatid mite assemblages. Climatic factors, e.g. July temperature and July precipitation were also found to be significant factors, but with a much lower influence. Collembola predominantly showed higher variation in time than in space indicating that more collembolan species migrate within the investigated cross section or react with higher abundance fluctuations on the groundwater level changes, while Oribatida had a higher part of space variation, indicating that migration potential is lower and the environmental gradient is of higher influence on the distribution. Reaction time of soil fauna species on the groundwater fluctuation varies between 1 and 12 months. Retreat of Collembola from the waterlogged situation was between 4 and 6 months in the litter layer and 3 months in the mineral layer. Recolonisation of the waterlogged site lasted approximately 12 months. A positive reaction by precipitation was observed in four collembolan species that was 1 month in the edaphic species and between 9–10 months in the larger litter dwelling species. Only few oribatid mites reacted on the waterlogged situation.  相似文献   

长叶榧RAPD反应条件的研究   总被引：1，自引：1，他引：0  

陈由强  叶冰莹  庄振宏  朱锦懋 《福建林业科技》2001,28(3):11-13

以长叶榧为材料 ,研究了RAPD的各种影响因素。确定了长叶榧的最佳的RAPD反应体系为 :15 μl反应体系中含5 0mmol·l-1KCl、10mmol·l-1Tris-HCl(pH9.0 )、0 1%Triton - 10 0、2nmol·μl-1MgCl2 、0 6nmol·μl-1dNTPs、0 .75UTaq酶、30ng引物以及 10 0ng左右的长叶榧DNA。  相似文献   

小麦条锈菌AFLP体系的优化   总被引：1，自引：0，他引：1  

张妍  康晓慧 《安徽农业科学》2008,36(6):2227-2228

[目的]优化小麦条锈菌AFLP体系。[方法]以小麦条锈菌大田混合菌系为材料,采用改良CTAB法提取DNA,探索酶切、PCR过程,优化小麦条锈菌AFLP体系,并从64对引物中筛选出稳定、高效的引物组合。[结果]改良CTAB法有较好的破壁效果,所提DNA纯度高,条带清楚,无污染,适合AFLP操作。酶切3.0、3.5 h的效果相同,扩出的片断在100~2 000 bp,可进行预扩。TaqDNA聚合酶为0.5 U时,电泳图中出现了较亮的条带,片断大小在100~2 000 bp。16对引物组合可以扩增出较稳定的条带。[结论]优化的小麦条锈菌AFLP体系为:25.0μl酶切体系,37℃酶切3.0 h,10.0μl连接体系在22℃条件下连接过夜,连接产物、预扩产物分别按1∶10、1∶30的比例用ddH2O稀释后用于预扩和选择性扩增。  相似文献