用生物合成的长链开环探针进行SNP分型     

赵松子  沈向群 《江苏农业学报》2011,27(1):52-56

由于化学合成长链开环探针面临许多困难,因此需要开发一种长链开环探针的生物合成方法.该研究利用生物合成的146 bp长链开环探针进行单核苷酸多态性(SNP)分型,以验证长链开环探针生物合成的可行性.结果表明:长链开环探针能够特异地与目的DNA结合,完美配对的长链开环探针能够被DNA连接酶连接,形成环状单链DNA分子,不能...  相似文献   

牛产气荚膜梭菌荧光定量PCR检测方法的建立及应用     

杨金鑫  肖分雪  朱奕霏  宋延来  孙兴忠 《特种经济动植物》2023,(11):11-15

为建立特异性强、灵敏度高、重复性好的产气荚膜梭菌荧光定量PCR检测方法，本试验根据产气荚膜梭菌的plc基因保守序列设计合成特异性引物探针，摸索其最佳反应条件，进行灵敏性、特异性、重复性以及临床样本验证。结果表明：建立的方法具有较好的灵敏性、特异性及重复性，最低检出限度为8.26×10¹拷贝/μL，在8.26×10³～8.26×10⁸拷贝/μL的范围内具有良好的线性关系，同时不与其他致病菌发生交叉反应，组间及组内的变异系数均小于4%，应用比方法在采集的300份临床样品中检出24份阳性样品，与常规细菌分离鉴定方法结果符合率为94.12%。说明试验成功建立了牛产气荚膜梭菌荧光定量PCR检测方法，这将为牛产气荚膜梭菌的快速诊断提供技术支持。  相似文献   

现代生物技术在水产养殖中的应用     

田文涛 《养殖技术顾问》2011,(5):269-269

核酸探针技术通过分析病原生物的遗传结构。根据这段基因结构的序列，就可以设计可与其互补的DNA探针，与病原生物的DNA进行杂交，以此来确定病原携带者和传播者的分子生物学技术。该技术具有灵敏度高、特异性强等优点，近年来在对虾病毒病的检测中倍受青睐。  相似文献   

Development of Nucleic Acid Lateral Flow Immunoassay Detection Method for Foot-and-mouth Disease Virus     

GONG Zhen-li  JIANG Tao  QI Shu-yun  CHEN Guo-dong  LIU Yan-hong  LI Yong 《中国畜牧兽医》2015,42(9):2292-2297

In this article, through the combination of nucleic acid probes and immune chromatography, a simple, sensitive and specific detection system——nucleic acid lateral flow immunoassay (NALFIA) for amplifing foot-and-mouth disease virus (FMDV) 3D RT-PCR products was established.An ultrasensitive nucleic acid biosensor (NAB) based on streptavidin-labeled gold nanoparticles dual labels and lateral flow strip biosensor (LFSB) were used in this system.The biotinylated goat anti-rabbit IgG was marked to the NC membrane as the alleged strip and the anti-digoxin antibody was labeled to the NC membrane to capture the digoxin probe.After assemblying gold-labeled strip and detecting RT-PCR products, the detection limit of NALFIA was 0.3×10^-3 to 3×10^-3 μg/μL.The NALFIA was compared with agar gel electrophoresis analysis, the results showed that the sensitivity of NALFIA was higher than agar gel electrophoresis.There was an excellent agreement between the two methods.NALFIA was a method with high sensitive, low cost and short time.In conclusion, this method provided a good alternative to detect FMDV.  相似文献   

Establishment of a Duplex Real-time RT-PCR Assay for the Differential Detection of Nipha Virus and Highly Pathogenic Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus     

WANG Jian-hua  DONG Zhi-zhen  WANG Yu-ling  XIAO Yan  ZHAO Xiang-ping 《中国畜牧兽医》2016,43(2):348-355

To establish a rapid,sensitive and specific assay for the differential detection of Nipah virus (NiV) and highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus (HP-PRRSV),a duplex Real-time RT-PCR was developed with specific primers and probes targeting to the special sequences of NiV M gene and HP-PRRSV nsp2 gene by optimization of reaction conditions.The performance of the assay was linear ranging from 4.6×10¹ to 4.6×10⁷ copies/μL for RNA standard control of NiV M (NiV-M-RNA) and from 4.1×10¹ to 4.1×10⁸ copies/μL for RNA standard control of HP-PRRSV nsp2 (HP-PRRSV-nsp2-RNA),and detection limits of the assay was 46 copies for the NiV-M-RNA and 4.1 copies for the HP-PRRSV-nsp2-RNA,respectively.The coefficients of variation (CVs) of both inter-assay and intra-assay repeatability were less than 2.0%,showing good repeatability.The assay was able to specifically detect NiV and HP-PRRSV simultaneously without cross-reaction with classical swine fever virus (CSFV),porcine epidemic diarrhea virus (PEDV),swine influenza virus (SIV),porcine parvovirus (PPV),pseudorabies virus (PRV) and porcine circovirus type 2 (PCV2).Of the 236 samples from pigs for both NiV and HP-PRRSV detection by the established assay,all the samples were negative for NiV,8 samples were HP-PRRSV positive.In conclusion,this assay offers a useful approach for the differential detection of NiV and HP-PRRSV in clinical specimens from the pigs.  相似文献   

薄壳山核桃疮痂病菌TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立及应用     

赵玉强  卓可儿  郭云  朱灿灿  王行军  陆小美  田艳丽  胡白石 《植物保护》2023,49(3):193-198

疮痂病是薄壳山核桃上最具毁灭性的病害,带菌植物材料是传播疮痂病的重要来源。准确、灵敏、快速的检测方法可为该病害流行规律调查和防控提供有力的依据。本文通过比较薄壳山核桃疮痂病菌Venturia effusa及其近似种之间的ITS序列差异,设计了特异性引物和TaqMan探针,建立了薄壳山核桃疮痂病菌的荧光定量PCR检测方法。特异性检测结果表明,该方法可以检测不同地区的薄壳山核桃疮痂病菌菌株,而对其近似种以及薄壳山核桃上的其他真菌均没有信号。本研究建立的检测方法对薄壳山核桃疮痂病菌DNA的最低检测限可达0.5 pg/μL。该方法用于田间样品检测时,检测时间仅需1 h,远快于常规的分离培养法。本研究建立的基于TaqMan探针的荧光定量PCR检测方法为薄壳山核桃疮痂病菌的快速检测和监测提供了有力工具。  相似文献   

基于磁性纳米探针的莠去津残留荧光检测方法     

《南京农业大学学报》2021,44(6)

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量子点荧光探针在食品安全检测中的应用     

姚鑫  刘晓宇 《农产品加工．学刊》2009,(5)

量子点荧光探针是近几年发展起来的一种新型荧光标记物,量子点在生命科学的应用已成为人们研究的热点。但将量子点荧光探针用于食品安全检测的研究还处于起步阶段。简要综述量子点的光学特性、制备方法及其在食品安全检测方面的研究进展和应用前景。  相似文献   

轴流泵叶轮进出口流场的测量   总被引：5，自引：0，他引：5  

张德胜  施卫东  关醒凡  曹卫东  冷洪飞 《排灌机械》2009,27(4):210-214

为了获得轴流泵内部流动的真实情况,设计了内部流动测量装置.运用五孔球形探针,对高效轴流泵在0.8Qopt,1.0Qopt和1.2Qopt工况下的叶轮进口和出口速度矢量分布、静压分布和总压分布进行了测量,并分析了不同工况下的轴面速度、环量、圆周方向分速度和压力分布等.测量结果表明：轴流泵模型进口在0.8Qopt至1.2Qopt工况范围内,流动稳定,进口轴向速度从轮毂到轮缘逐渐减小,且进口预旋很小,不同径向位置的静压基本相等.在最优工况下,轮毂与可调叶片间无间隙时,轴流泵叶轮出口基本呈现等环量流型,轴面速度呈现抛物线分布,且效率高.若轮毂侧存在间隙,间隙处的环量、轴面速度、压力和效率均明显下降.  相似文献   

猪瘟病毒与非洲猪瘟病毒双重荧光定量PCR方法的建立与应用     

刘婉宁  李世念  倪民婷  苏霖  师庆伟  王金涛 《黑龙江畜牧兽医》2022,(19):80-85

为了建立能够猪瘟病毒(Classical swine fever virus, CSFV)和非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)双重荧光定量PCR方法,试验比对了CSFV与ASFV的基因组序列,针对CSFV 5′-UTR和ASFV B646L保守靶序列,分别设计2条特异性引物及1条TaqMan探针,通过优化扩增体系和程序,建立可同时检测CSFV和ASFV的双重荧光定量PCR方法,并建立该方法的标准曲线,同时用敏感性试验、特异性试验和重复性试验对该方法进行评价,最后检验该方法的应用效果。结果表明：CSFV和ASFV标准曲线的相关系数(R²)分别为0.999和1,线性关系良好;CSFV与ASFV的最低检测浓度分别为1.3×10⁰ copies/μL和2.4×10⁰ copies/μL;与其他常见猪只病原检测无交叉反应;批间与批内变异系数均小于2%,稳定性良好。试验建立的方法对44份临床样本的检测结果与《猪瘟病毒实时荧光RT-PCR检测方法》(GB/T 27540—2011)和《非洲猪...  相似文献