荧光探针PCR检测牛嵴病毒的方法建立     

师志海  王文佳  孟红丽  王亚州  闫祥洲  邱祥琦  程燕  滑留帅  施巧婷  徐照学 《中国兽医学报》2022,(4):657-661

牛嵴病毒(bovine kobuvirus, BKoV)是与犊牛腹泻密切相关的病原,试验针对BKoV 3D基因设计特异性引物和探针,建立快速检测BKoV的实验室方法。该方法仅能特异性扩增BKoV,对其他犊牛腹泻病原无扩增,特异性较强;对BKoV质粒标准品的最低检出限为11.0拷贝/μL,灵敏性较强;且组内与组间变异系数均小于2%,重复性较好。对采集自河南省的221份犊牛腹泻临床样本进行检测,BKoV的核酸检出率为9.05%(20/221)。本研究建立的检测方法为BKoV的临床快速检测和流行病学调查提供了有效手段。  相似文献   

双针结构土壤水分传感器探针最优长度分析与试验     

赵燕东  聂铭君 《农业机械学报》2011,42(11):39-43

在两针平行式探针结构的阻抗模型的基础上,进一步理论推导了终端开路式和终端短路式两种类型土壤水分传感器探针长度与阻抗特性的关系.借助高频分析软件HFSS确定了两针平行式土壤水分传感器的最佳探针结构,并采用有机溶液模拟土壤体积含水率进行了试验,试验结果表明:终端开路式和终端短路式土壤水分传感器探针长度在0 ～8.3 cm时,其土壤体积含水率测量范围达到0～100％.  相似文献   

非洲猪瘟病毒锁核酸探针荧光定量PCR检测方法的建立     

李艳  郭怡德  勾红潮  卞志标  孙铭飞  蔡汝健  宋帅  蒋智勇  楚品品  徐民生  杨东霞  李春玲 《中国兽医学报》2021,(2):208-212,230

根据非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)P72基因核苷酸序列设计特异性引物和锁核酸(locked nucleic acid,LNA)-TaqMan探针,建立了基于P72基因的LNA-TaqMan探针的ASFV荧光定量PCR方法.结果显示,所建立的LNA-TaqMan探针荧光定量P...  相似文献   

肠道传播的非甲非乙型肝炎病毒(ET-HEV)核酸探针制备及临床诊断研究初报     

许键  喻梅辉  李新芳  李林  周伟一  何冰  仲英娜  赵素元 《新疆农业大学学报》1992,(4)

病毒性肝炎给人类造成的危害是众所周知的。传统的分类法将肝炎病毒分为甲型、乙型、非甲非乙型和丁型四类。近年发现,非甲非乙型病毒(NANBHV)有两种类型:一类经血液传播(致输血后肝炎),另一类经肠道传播,1989年,Choo和Rcycs等分别将二者克隆,并命名为丙肝病毒(HCV)和戊肝病毒(HEV)。因此,新命名法特别是在1989年9月东京会议正式命名法确定后,将肝炎病毒分为HAV、HBV、HCV、HDV、HEV。在世界范围内,HEV肝炎流行多发地见于中国(特别是新疆)、缅甸、墨西哥、  相似文献   

中草药青蒿(Artemisia annua L.)的实时荧光PCR检测   总被引：1，自引：0，他引：1  

赵玥  赵文军  吕国忠  朱水芳 《沈阳农业大学学报》2006,37(4):648-650

中草药青蒿,学名黄花蒿(Artem isia annuaL.),属于中国独有的抗疟药用植物资源之一。根据蒿属植物rDNA ITS序列多态性设计TaqM an探针及引物,通过实时荧光PCR方法对黄花蒿进行检测。结果表明:该组探针-引物对黄花蒿有很强的特异性,除黄花蒿外,其余8种对照蒿属材料均未检测到荧光信号。该方法快速、简便、安全、准确,适用于黄花蒿的出入境检验。  相似文献   

葡萄茎痘伴随病毒cDNA探针检测技术研究   总被引：3，自引：1，他引：3       下载免费PDF全文

牛建新  李西平  张强  赵英  马兵钢 《西北农业学报》2007,16(3):239-243

选取经RT-PCR检测确认带葡萄茎痘伴随病毒的全球红葡萄品种,以葡萄叶片、皮层作为试材,采用SDS法提取高质量总RNA作为模板,以GRSPaV的特异互补引物引导,反转录合成cDNA,通过PCR扩增,获得830 bp的预期目的片段,并将其克隆测序,其同源性与NCBI中的相关序列的同源性达96%.利用克隆质粒合成了生物素标记的GRSPaV的cDNA探针,在此基础上,研究了影响GRSPaV斑点杂交的因素,结果表明当探针浓度为200 ng/mL,甲酰胺浓度为45%,42℃杂交反应4h,可获得较高灵敏度.  相似文献   

同源重组探针在暂时转化的烟草原生质体内的重组和缺失     

徐璧文  Paul F.Lurquin 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》1991,(3)

通过电激法(electroporation)将同源重组探针pBC 7导入烟草原生质体,再从转化的烟草原生质体中提取DNA,并将其转化到E.coli DH 1细胞.结果在E.codi DH 1细胞中获得了一种新的质粒分子,该质粒含有功能的neo基因,与重组探针pBC 7相比有较大的缺失、倒位,并出现了新的限制酶切部位,重组探针pBC 7的主要特征为含有Tn5的neo基因两个截短的不等部份,只有通过重排才可能产生完整的neo基因,这表明了暂时转化的原生质体在外源DNA整合以前具有这样的基因重排功能。  相似文献   

库尔勒香梨的苹果茎痘病毒cDNA探针检测技术研究     

牛建新  朱军  马兵钢  覃伟铭  王小兵  吴忠华 《中国农业科学》2004,37(1):99-99

 以库尔勒香梨叶片和皮层为材料 ,对 2种总RNA提取方法进行了比较研究 ,从中行筛选出了适合库尔勒香梨的提取方法 ;并利用RT PCR反应体系成功合成了生物素标记的cDNA探针 ,在此基础上 ,对影响杂交灵敏度的主要因素进行了试验研究 ,结果表明 ,当探针浓度为 4 0 0ng·ml-1,甲酰胺浓度为 4 5 % ,4 2℃杂交反应 6h ,可获得最高灵敏度。进口硝酸纤维素膜的灵敏度最好 ,基本无背景。Tween2 0的封闭效果比牛血清白蛋白好。对不同组织和不同提取方法提取的总RNA进行了杂交检测 ,结果表  相似文献   

黄土高原半干旱区人工林刺槐展叶期树干液流动态分析   总被引：8，自引：0，他引：8  

于占辉  陈云明  杜盛 《林业科学》2009,45(4)

应用热扩散式树干茎流计(TDP)于2008年4月26日至5月31日,在黄土高原半干旱区安塞县对人工林刺槐展叶期树干液流及其气象、土壤水分等6个指标进行连续测定.结果表明:刺槐展叶期可分为芽期、展叶初期、中期和全叶期.在芽期,刺槐树干液流速率日变化无明显昼夜波动;在展叶初期至全叶期日变化呈现出从微弱波动逐渐增大到趋于平稳的剧烈波动;在展叶中期以后液流速率表现为上升快、下降缓慢的单峰曲线;在全叶期平均峰值约为0.002 7 cm·s-1;树干液流速率与光合有效辐射强度、大气温度、水蒸气压亏缺和风速呈极显著正相关,与相对湿度呈负相关,其相关程度依次为光合有效辐射强度>大气温度>水蒸气压亏缺>相对湿度>风速,且可用光合有效辐射强度和大气温度线性表达式来估测;土壤水分在展叶期呈逐渐减少趋势,但对树干液流的胁迫不显著;在展叶期刺槐单株日蒸腾耗水量随直径的增大而增大并与胸径呈良好的线性关系,可用来估算展叶期刺槐人工林蒸腾耗水量.  相似文献   

TaqMan探针实时荧光定量PCR检测番茄黄化曲叶病毒   总被引：2，自引：0，他引：2  

阮美颖  叶青静  王荣青  周国治  姚祝平  李志邈  万红建  杨悦俭 《浙江农业学报》2012,24(5):842-845

根据番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellow leaf curl virus,TYLCV)外壳蛋白(CP)基因序列上的保守序列,设计特异性的引物和Taqman探针,建立荧光定量PCR方法。结果表明,试验建立的标准曲线循环阈值(Ct值)与模板浓度具有良好的线性关系,相关系数为0.9941;能检测到1 000个病毒拷贝,灵敏度比普通PCR高100倍;与番茄花叶病毒和黄瓜花叶病毒无交叉反应,特异性强、重复性佳,为TYLCV检测提供了一种特异、灵敏、快速的定量检测方法。  相似文献