过表达NR4A1促进山羊皮下脂肪细胞分化     

崔胜  王永  朱江江  熊燕  林亚秋 《畜牧兽医学报》2021,52(5):1258-1266

旨在克隆山羊NR4A1基因的CDS区序列,明确其组织和细胞表达模式,以及探究过表达NR4A1基因对山羊皮下脂肪细胞分化的影响。本试验利用双酶切法构建山羊过表达载体pcDNA3.1-NR4A1。以1周岁简州大耳羊（n=5）为试验动物。利用RT-PCR方法和实时荧光定量PCR（real-time quantitative PCR, qPCR）技术克隆NR4A1基因编码区序列并明确其时空表达特性,再将山羊pcDNA3.1-NR4A1载体转染皮下脂肪细胞使NR4A1过表达,利用形态学方法检测过表达后脂滴聚集的变化,同时采用qPCR方法检测脂肪分化标志基因相对表达水平的变化。结果获得山羊NR4A1基因的编码区序列是1 797 bp,编码598个氨基酸;NR4A1在山羊各组织中广泛表达,且在山羊背最长肌中的相对表达水平最高（P<0.01）,在山羊皮下脂肪细胞分化60 h表达量最高（P<0.01）;过表达NR4A1基因显著促进山羊皮下脂肪细胞的脂滴积累,并且显著提高C/EBPα、C/EBPβ、PPARγ、LPL、SREBP1和AP2的相对表达水平（P<0.05）。NR4A1基因可能是山羊皮下脂肪细胞分化的正调控因子,且可能是协同脂肪分化标志基因的表达量来实现的。  相似文献   

猪ADAR2基因全长cDNA克隆、序列特征及表达模式分析     

张跃博  王立刚  侯欣华  刘欣  颜华  张龙超  王立贤 《畜牧兽医学报》2021,52(3):620-629

旨在克隆猪作用于RNA的腺苷脱氨酶2基因（ADAR2）全长cDNA序列,同时对该基因在猪不同组织中的表达规律进行探索。利用RACE （rapid-amplification of cDNA ends）对大白猪ADAR2基因mRNA全长序列进行克隆,并进行生物信息学分析;用荧光定量PCR方法检测35日龄大白猪心、肝、肺、肾、脾、脑、小肠、背最长肌和背部脂肪9种组织中ADAR2的表达水平。结果表明,猪ADAR2基因cDNA全长6 305 bp,共包含12个外显子,编码704个氨基酸,与人、黑猩猩、猕猴、长臂猿、黄牛、山羊和绵羊的CDS区核酸序列和氨基酸序列的一致性均在84%以上。该基因编码的蛋白含有2个双链RNA结合基序和一个脱氨酶结构域。猪ADAR2在检测的各组织中均表达,其中在肺中的表达量最高。综上所述,本研究成功克隆了猪ADAR2基因全长cDNA序列,并且发现其在猪体内广泛表达,为深入研究ADAR2的功能奠定了良好的基础。  相似文献   

Production and Identification of Clone Sheep Using Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells as Donor Cell     

GUO Yuan  LIU Zong-zheng  LIU Le  MENG Fan-hua  ZHANG Yan-ru  ZHOU Huan-min  LIU Chun-xia 《中国畜牧兽医》2016,43(11):3011-3018

In order to obtain the cloned sheep using bone marrow mesenchymal stem cells（BMSCs）as the donor cells,the BMSCs of sheep were chosen and reconstructed embryos were built to transfer.10 published microsatellite markers were chosen,and the DNA samples from clone sheep,donor cells and surrogate ewes were amplified,and the relationship of father-son（RCP）was analyzed using the Quantity One for genotyping.The results showed that the reconstructed embryos were successfully built for electric fusion using sheep BMSCs as nuclear donor,and making nuclear transplantation into enucleated mature oocytes of which the fusion rate was 80.62%.20 surrogate ewe were chosen to be implanted with the reconstructed embryos at morula stage by implant surgery,and 5 lambs were born and only 3 were survived.The genotype of cloned sheep was in line with the dornor cell and the RCP were more than 99.999%.In conclusion,the first clone sheep were obtained successfully by using BMSCs as a nuclear donor in this experiment.  相似文献   

二化螟dsRNA降解酶基因的克隆与表达分析     

彭英传  江婷  朱玉麟  张万娜  张晶  韩召军  肖海军 《植物保护学报》2023,50(3):610-619

为解析二化螟Chilo suppressalis体内参与降解双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)的关键核酸酶的功能,克隆二化螟不同的非专一性核酸酶（non-specific nuclease,NUC）基因,并对这些基因进行生物信息学分析和组织定量表达分析,同时对dsRNA降解酶（dsRNA degrading nuclease,dsRNase）活力的组织分布进行研究。结果显示,共克隆获得5个NUC基因,其中有4个编码dsRNase亚家族基因（CsdsRNase1～CsdsRNase4）和1个编码Endonuclease G亚家族基因（CsEndoG）。5个NUC基因的开放阅读框核苷酸序列长度范围为828～1 338 bp,编码275～445个氨基酸残基,其分子量大小为31.68～49.57 kD,预测等电点为5.48～9.42。CsdsRNase1和CsdsRNase2含有信号肽序列,两者相似度极高,且与家蚕Bombyx mori和斜纹夜蛾Spodoptera litura中具有dsRNA降解酶活力的dsRNase同源聚类;CsdsRNase1和CsdsRN...  相似文献   

新城疫病毒La Sota株HN基因的克隆与序列分析     

刘颖  金丽颖  申燕  高冬妮  平文祥  葛菁萍 《中国农学通报》2015,31(14):89-95

旨在从分子生物学角度进一步研究新城疫病毒La Sota株HN基因,探究NDV La Sota HN基因的遗传变异情况。研究以试验室冻存的p NDV-HN为模版,根据Gen Bank中登录的NDV La Sota株序列设计引物扩增HN基因,将其克隆到pMD18-T载体后进行鉴定,对鉴定正确的重组质粒p MD-NDV-HN进行测序分析。应用生物信息学软件对新城疫病毒Lasota株HN基因进行系统进化树分析、氨基酸序列同源性分析、糖基化位点、蛋白结构跨膜区分析及磷酸化位点预测分析。核苷酸序列测定结果表明:HN基因的序列长度为1743bp,该基因的开放阅读框(Open Reading Frame,ORF)总长为1716 bp,编码571个氨基酸。生物信息学表明:试验获得的HN基因具有6个潜在糖基化位点及12个半胱氨酸残基,第5个潜在糖基化位点(508-510 aa)发生缺失及第123位半胱氨酸残基被色氨酸残基取代。La Sota株HN基因编码的蛋白质中有29个丝氨酸、10个酪氨酸和16个苏氨酸可能成为蛋白激酶磷酸化位点。将试验获得的La Sota株HN基因序列和推导的氨基酸序列与新城疫毒株的HN基因相应序列比较后发现,它们的核苷酸序列同源性和氨基酸序列同源性最高均可达到99%,表明HN基因在种属间具有较高的保守性。研究为新城疫病毒的分子病毒学研究奠定了基础。  相似文献   

鸡白介素-6(ChIL-6)基因的克隆与序列分析   总被引：7，自引：1，他引：7  

孙建和  陆苹  蒋静 《华中农业大学学报》2003,22(1):1-3

分别用鸡传染性法氏囊病病毒感染和用ConA免疫刺激健康鸡，无菌取处理鸡的脾脏，匀浆后用Tr-izol抽提细胞总RAN，应用随机引物反转录获得cDNA，设计引物，经PCR扩增获得鸡白介素-6（ChIL-6)基因，应用pGEM-T载体克隆该基因，经测序，表明其与Gene Bank中公布的唯一的一个ChIL-6基因为同源基因。  相似文献   

新牧一号苜蓿MvP5CS基因的克隆和功能分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

张桦  张富春  曾光  张博  陈全家 《草业科学》2012,29(1):51-58

为研究苜蓿（Medicago sativa）耐盐分子机制，为抗逆分子育种提供依据，通过同源克隆和RT PCR技术克隆了新牧一号杂花苜蓿（M.varia Xinmu 1）的MvP5CS基因， MvP5CS全长2 148 bp，Genbank登录号为：EU371644。荧光定量PCR分析发现，在盐胁迫下MvP5CS基因表达明显上调，说明 MvP5CS与苜蓿的耐盐性相关。利用农杆菌介导的叶盘转化法，将MvP5CS基因成功转入烟草（Nicotiana tabacum），盐胁迫下转MvP5CS基因T1代烟草萌发率和根长均高于非转基因烟草。表明新牧一号苜蓿P5CS基因能够提高转基因烟草的耐盐性。  相似文献   

生长抑素基因疫苗质粒pEGS/2SS的构建及表达   总被引：7，自引：0，他引：7  

曹少先  杨利国  张文伟  茆达干  何晓红 《中国兽医学报》2005,25(5):499-502

将pcS／2SS中的乙肝表面抗原（HBsAg）S基因及插入S基因中的生长抑素（somatostatin，ss）基因亚克隆到pUC19中，构建成pUSS／S质粒；PCR扩增pcS／SS中SS基因，调整阅读框，融合到pUSS／S质柱S基因后，构建成pUS／2SSG质粒；最后将S／2SSG融合基因克隆到pEGFPN1中EGFP基因的5’端，构建S／2SS-EGFP融合表达质粒pEGS／2SS。酶切、测序鉴定后脂质体包裹法将pEGS／2SS转染HeLa细胞，荧光显微镜下检测荧光，ELISA检测表达产物的SS免疫反应原性。酶切和测序鉴定表明，重组质粒pEGS／2SS构建成功。pEGS／2SS转染24h后的HeLa细胞检测到绿色荧光，72h检测到强烈荧光，表明融合基因在HeLa细胞获得高表达；ELISA证实融合蛋白具有SS的抗原抗体反应原性。质粒pEGS／2SS的成功构建及表达为生长抑素基因免疫的机理及安全性研究奠定了基础。  相似文献   

猪流行性腹泻病毒中国地方流行株LJ/B03 M基因的克隆与序列分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

范京惠  郎景华  吴凌  张海峰  李一经 《中国兽医杂志》2005,41(7):7-9

从黑龙江某猪场疑似猪流行性腹泻猪的粪便中提取总RNA，采用RT—RCR方法扩增，首次获得中国地方流行株PEDVM全基因序列，将其克隆到pMD18-T载体中进行测序，克隆的M基因核苷酸序列由681个核苷酸组成，含有一个完整的开放阅读框架，编码226个氨基酸。与国外已发表的其他毒株进行基因进化分析，GenBank中的6PEDV形成的基因进化树具有3个分支。其中分离株LJB／03形成一个独立的分支，说明LJB／03的M基因序列与其他毒株相比，发生了一定的变异。  相似文献   

阿拉善荒漠特有珍稀濒危植物绵刺克隆生长构型研究   总被引：13，自引：1，他引：13  

高润宏  金洪  张巍  董智  庄光辉  谢君仁 《干旱区资源与环境》2001,15(4):92-96

绵刺是阿拉善荒漠特有珍稀濒危植物 ,其具有独特的克隆生长构型 :由枝条下垂形成长间隔物的典型的游击型克隆生长构型和由根茎处形成的典型的密集型克隆生长构型。本文以环境塑造与克隆生长构型的可塑性关系研究绵刺的克隆生长构型 ,揭示其对环境表现出生态对策的高度适应性和可塑性  相似文献