阿拉善荒漠特有珍稀濒危植物绵刺克隆生长构型研究   总被引：13，自引：1，他引：13  

高润宏  金洪  张巍  董智  庄光辉  谢君仁 《干旱区资源与环境》2001,15(4):92-96

绵刺是阿拉善荒漠特有珍稀濒危植物 ,其具有独特的克隆生长构型 :由枝条下垂形成长间隔物的典型的游击型克隆生长构型和由根茎处形成的典型的密集型克隆生长构型。本文以环境塑造与克隆生长构型的可塑性关系研究绵刺的克隆生长构型 ,揭示其对环境表现出生态对策的高度适应性和可塑性  相似文献   

天水毛白杨种源试验的研究   总被引：2，自引：2，他引：0  

姚秀玲  雷有福 《甘肃农业大学学报》1994,29(1):76-82

本文介绍了毛白杨８个种源、２２０个无性系，在甘肃天水地区开展的种源选择试验及优良无性系筛选结果。经过７年的研究，摸清了毛白杨的变异规律及模式，筛选出３个种源，３０个优良无性系，遗传增益达２２％～２８％，为造林区别提供了科学依据。试验证明无性系有种是一种投资少，见效快，经济效益高的良种选有方法，可降低成本５～６倍。  相似文献   

弓形虫微线体蛋白MIC3基因的克隆及原核表达   总被引：11，自引：1，他引：11  

江涛  周艳琴  刘琴  聂浩  姚宝安  赵俊龙 《畜牧兽医学报》2006,37(6):587-591

根据编码MIC3的已知基因序列设计并合成一对引物,应用PCR技术从弓形虫RH株的基因组DNA中扩增编码MIC3的全长基因,克隆入pGEX-KG表达载体,转化入E.coli DH5α感受态细胞,经含氨苄青霉素琼脂平板筛选,小量抽提质粒进行酶切、PCR及DNA测序鉴定.然后阳性重组质粒转化入E.coli BL21-CodonPlus,IPTG诱导,表达产物经SDS-PAGE和Western-blot分析鉴定.结果显示,扩增的MIC3基因与GenBank中相应基因序列（AJ132530）的同源性达99.6 %,表达的MIC3融合蛋白表观分子量约为66 ku,且可被兔抗弓形虫免疫血清识别.说明所获得的表达蛋白质具有一定的反应原性,为下一步利用重组蛋白建立弓形虫的诊断方法和研制弓形虫的亚单位疫苗奠定了基础.  相似文献   

鲁西黄牛体细胞克隆保种技术的研究     

朱化彬  程金华  孙秀柱  王栋  戴蕴平  龚国春  万荣  郝海生 《畜牧兽医学报》2006,37(12):1287-1292

以体外培养的鲁西黄牛耳皮肤成纤维细胞作核供体，研究利用体细胞克隆技术保存我国地方黄牛优良品种的技术方法。通过组织块培养法建立的鲁西黄牛（1♂，4♀）成纤维细胞系，作为核移植供体细胞，利用屠宰场母牛卵巢卵母细胞经体外培养成熟后作为核受体进行核移植，试验结果表明：重构胚的融合率为62．5％（242／387），分裂率为63．6％（154／242），体外培养第7天囊胚发育率为42．9％（66／154）。体外培养第7天的囊胚的内细胞团细胞（ICM）与滋养层细胞数平均为37和47，ICM占44．2％。体外发育到7d的囊胚新鲜胚胎的移植妊娠率（新鲜胚胎）移植受体10头，60d妊娠率为20％（2／10）。  相似文献   

哺乳动物的克隆技术——哺乳动物克隆的原理、方法、影响因素及存在的问题   总被引：1，自引：0，他引：1  

张荣昌  岳福杰  李森远  张廷龙 《中国畜牧兽医》2006,33(10):55-58

哺乳动物细胞克隆是20世纪末生命科学领域最引人注目的高新技术,该技术对于优良种畜的复制、减少试验用动物数目、动物遗传多样性保存及濒危动物挽救、转基因动物培育等方面具有重要意义。近年来克隆技术发展迅速,多种哺乳动物相继克隆成功,但也存在克隆效率太低、克隆动物表型正常而实质异常的问题。作者阐述了动物克隆的基本原理、操作方法及其相关影响因素,提出了解决相关问题的关键。  相似文献   

表达猪瘟兔化疫苗株E0蛋白的PK-15细胞系构建     

亢文华  郝俊峰  潘春刚  宁宜宝 《中国畜牧兽医》2007,34(11):63-65

将克隆到pGEM T-easy载体中的E0基因双酶切回收后，连接到增强型绿色荧光蛋白（EGFP）中，利用Lipofectamine^TM2000将重组子转染PK-15、BHK-21、VERO 3种细胞，直接在荧光显微镜下用蓝光激发进行观察，在3种细胞中都可以观察到绿色荧光，而且在转染后的24、48、72 h 3个时间点上，观察到的荧光细胞数量逐渐增多，在72 h时荧光细胞的数量在3种细胞中都达到最多，总的来看，在PK 15中荧光细胞的数量最多。通过对细胞荧光的定位发现，重组质粒的荧光主要分布在胞浆内，而且细胞核周围的荧光较强，胞核与胞浆的界限明显，尤其是在PK-15细胞和VERO细胞中这种现象尤为明显。未携带E0目的DNA的pEGFP-N1 Vector转染3种细胞后，都可以观察到绿色荧光，但是整个细胞中是均匀出现荧光的。经酶切、PCR、单抗间接免疫荧光检测，PK-E0细胞中有大量的HCLV的E0表达，单纯的PK-15细胞中没有E0的表达。HCLV株在PK-E0细胞中从48h开始到72h的滴度比在PK-15细胞中的滴度要高。证明PK-E0细胞中E0蛋白的大量表达增加了HCLV在细胞中的复制。  相似文献   

猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白Nsp9基因的克隆与原核表达   总被引：2，自引：0，他引：2  

沈张奇  郭鑫  杨汉春  盖新娜  陈艳红  查振林 《中国兽医杂志》2007,43(10):3-5

通过PCR方法从重组质粒pSK-B2扩增得到非结构蛋白Nsp9的基因片段。将基因克隆至原核表达载体pET-28a( ),得到重组表达载体pET-28-Nsp9,转化Escherichia coliBL21(DE3)细胞。经IPTG诱导,Nsp9蛋白以包涵体形式表达,SDS-PAGE分析表明重组蛋白的分子量约为27.3 kD,表达量占菌体蛋白的43.2%。Western-Blotting结果表明重组蛋白可被PRRSV阳性血清所识别。表达的重组蛋白为进一步研究PRRSV的免疫特性和分子生物学功能奠定了基础。  相似文献   

PCV2感染性分子克隆的制备及体内外感染性试验     

韩凌霞  刘建华  陈艳  仇华吉  王云峰  童光志 《中国预防兽医学报》2006,28(3):241-247,270

将猪圆环病毒2型（Type2 porcine circovirus，PCV2）JXL株cDNA插入到载体pMD18-T中，获得的pMDT-PCV转染猪肾细胞PK15细胞系，盲传4代后，利用PCV2阳性猪血清进行间接免疫荧光抗体试验（IFA），能检测到特异性荧光。将pMDT-PCV质粒DNA腹股沟淋巴结注射40日龄仔猪2头，分别接种2、3次，接种剂量500μg／次，首次注射35d心脏放血致死。在体内感染性试验期间，动物未出现明显临床症状。试验结束，病理切片结果显示，不同淋巴组织中分别存在淋巴细胞缺失或增多的现象；肾小球、扁桃体、空肠淋巴结和股前淋巴结等冰冻组织切片中存在大量PCV2病毒抗原；血清中PCV2特异性的ELISA抗体效价迭1：2560，IFA效价为1：1280；通过聚合酶链式反应（PCR）可以分别从体外感染PK15细胞和体内感染动物及同圈饲养的空白对照猪的淋巴组织中扩增到病毒特异性基因片段。本研究证明含有单拷贝PCV2的重组质粒pMDT—PCV在体内、外均具有感染性，能衍生出病毒，并产生符合自然感染PCV2的大体病变和组织病理学变化，并激发较强的体液免癌应答。  相似文献   

大鼠BDNF基因真核表达载体的构建     

陈晓慧  刘明春  石娇  杨群辉  焦阳 《畜牧与兽医》2006,38(10):18-20

从23日龄大鼠脑组织中抽提总RNA,应用RT-PCR技术扩增脑源性神经营养因子(BDNF)基因片段,将此片段克隆入T载体,酶切反应鉴定。然后双酶切BDNF-T载体和空质粒pEGFP(N1),将所获目的片段和线性空载体用T4 DNA连接酶连接,构建真核表达载体pEGFP(N1)-BDNF,并进行酶切反应鉴定及DNA测序。序列测定的结果与GenBank比较,所克隆的BDNF基因从起始密码子ATG到终止密码子TAG全长共750 bp序列完全相同。结果表明成功构建真核表达载体pEGFP(N1)-BDNF,为进一步研究BDNF基因表达,神经系统疾病治疗和生物制药奠定基础。  相似文献   

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)诊断DNA微阵列的构建     

肖驰  曹三杰  文田 《中国兽医学报》2007,27(1):6-12

为构建猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）诊断DNA微阵列，应用RT—PCR从猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）C14—2分离株和欧洲型弱毒疫苗株VP046扩增并克隆获得戋洲型重组质粒C14P9（基因号：AY775132）、PRRS—PS9（基因号：AY775134）、Ulb（基因号：AY775135）、Y11（基因号：AY775133）、Y12（基因号：AY775136）和欧洲型基因重组质粒E6和E8。PCR法制备的靶基因和探针纯化后，质量浓度分别为300～600mg／L和200-400mg／L。芯片杂交动力学研究表明，杂堑信号强度随靶基因和探针浓度的增加而增强，最佳靶基因质量浓度为200mg／L，探针适宜范围为3～3000μg／L，系统灵敏性为3μg／L。靶基因杂交特异性研究表明，除个别靶基因在某一温度下存在交叉反应和杂交信号弱外，大多数靶基因在40～56℃下杂交信号强。采用AY775133、AY775134、E6和E8靶基因构建PRRS诊断DNA微阵列在40℃下预杂交1h、48℃湿盒避光杂交6h后经洗涤和扫读分析，杂交信号强、斑点明显、特异性高，按SNR≥1．5为标准能够区分PRRSV蔓洲型和欧洲型。应用PRRS诊断DNA微阵列检测了AMERVAC-PRRS、PRRSV弱毒疫苗、C14—2株、SCU株和临床样本，能正确区分PRRSV基因型。研究结果表明构建的PRRS诊断DNA微阵列可用于PRRS临床诊断和基因分型。  相似文献