刺梨及其近缘种PCR实验体系的建立与优化   总被引：13，自引：2，他引：13  

文晓鹏  邓秀新 《果树学报》2003,20(1):35-39

以刺梨及其近缘种月季为试材,进行了RAPD-PCR实验参数的确立和优化试验。结果表明,刺梨及月季25μL反应体系的最优组成为2.5μL10×反应缓冲液,2mmol/LMg2+,0.2mmol/LdNTP,1.6mg/L模板DNA,0.4μmol/L随机引物和1.2UTaqDNA多聚酶。经PCR扩增验证,此反应体系亦适宜于刺梨的部分近缘种,可有效用于RAPD分析;通过将退火温度提高至50℃或采用“Touchdown”扩增程序,并在50μL反应体系中适当增加特异引物对浓度(1.0μmol/L),模板DNA(4.0mg/L)和TaqDNA多聚酶(3.0U/管)的使用量,建立起适合于刺梨特异DNA片段检测及回收的特异PCR扩增实验体系,为刺梨的分子克隆奠定了技术基础。  相似文献   

利用RT-PCR检测库尔勒香梨苹果茎痘病毒的研究   总被引：3，自引：0，他引：3  

刘连科  牛建新  王小兵  覃伟铭 《植物病理学报》2003,33(3):286-288

 以库尔勒香梨新鲜、冷藏、冷冻叶片和皮层为材料,对提取双链RNA (dsRNA)的2种方法和提取总RNA的3种方法进行了分析比较,并对总RNA的提取方法进行了改进,获得了纯度较高、完整性较好的dsRNA和总RNA,在此基础上进行了反转录(RT)和PCR扩增。在国内首次完成了对苹果茎痘病毒(ASPV)的RT-PCR检测,建立了ASPV有效RT-PCR反应体系。用此体系扩增到ASPV一个长约316 bp的片段。实验表明以dsRNA和总RNA为模板均能成功进行RT-PCR检测,且dsRNA优于总RNA。  相似文献   

从海南省杂草胜红蓟和假马鞭上检测到粉虱传双生病毒   总被引：9，自引：0，他引：9  

范三薇  周雪平 《植物病理学报》2003,33(6):513-516

 利用三抗体夹心ELISA(TAS-ELISA)及PCR检测的方法对采自海南的胜红蓟(Ageratum conyzoides)和假马鞭(Stachytarphetajamaicensis)的5个病样进行了检测,表明均为粉虱传双生病毒。PCR扩增产物克隆后进行序列测定,结果表明存在2类双生病毒,其中样品Hn2存在2类病毒的复合侵染。这是在海南首次报道存在有粉虱传双生病毒。  相似文献   

梨火疫细菌实时荧光PCR和诱捕PCR-ELISA检测方法的建立   总被引：8，自引：1，他引：8  

朱建裕  廖晓兰  高必达  朱水芳  陈红运  戴富泉 《植物检疫》2003,17(1):7-10

根据梨火疫细菌中独特而保守存在的质粒pEA29，设计了1对引物和3条探针，建立了实时荧光PCR检测方法和诱捕PCR-ELISA检测方法。实时荧光PCR采用带荧光标记的核酸杂交探针，边扩增边检测，步骤简单，不需PCR后处理，可避免假阳性和交叉污染；诱捕PCR-ELISA检测方法只需简单处理的样品就能检测，减少了核酸不纯出现的漏检，由于增加了核酸杂交探针，可不需凝胶电泳EB染色检测，不会出现假阳性问题。  相似文献   

不同引物对植原体的检测灵敏度比较研究   总被引：3，自引：0，他引：3  

葛泉卿 《植物检疫》2003,17(3):133-136

用常规PCR和巢式PCR对目前常用的各种植原体引物(fPl/rP7、fU5/rP7、fU5／rU3、fAY/rEY和fFD9/rFD9)的检测灵敏度进行了比较研究。研究发现，它们的检测灵敏度并不相同。最灵敏的引物(fAY/rEY)要比最不灵敏的引物(fFD9/rFD9)的灵敏度至少高出数千倍。因此，按照不同的检测目的选择所用的检测引物是明智的，特别是当待测样品中的植原体浓度极低时，比如葡萄组织样品中植原体的检测。据此提出了用于不同检测目的时的最佳引物。  相似文献   

Multi#ex—CAPS技术及其在番茄遗传鉴定中的应用   总被引：6，自引：1，他引：6  

王孝宣  杜永臣  朱德蔚  Luigi Monti  S.Grandillo 《园艺学报》2003,30(6):673-677

 ：应用Multiplex—PCR和CAPS(Cleaved amplified polymorphic sequence)原理研究建立了Mutiplex—CAPS技术。该技术包括：(1)在PCR扩增反应体系加入2对、3对或多对核苷酸引物，经30～40个扩增循环后得到每对引物的特异扩增片段；(2)应用同一种限制性内切酶消化这些不同引物经扩增后获得的特异片段；(3)琼脂糖凝胶电泳溴化乙锭染色检测酶切片段长度的多态性。利用该技术对番茄(Lycopersicon es—cdentum)TA517及其近等基因系的分析表明，Multiplex—CAPS能同时检测2个、3个或多个CAPS标记的多态性，其效果等同于每个CAPS标记的多态性的叠加，重复性好，分析效率高，降低成本数倍。  相似文献   

利用PCR技术同时鉴定番茄抗根结线虫和抗斑萎病毒基因   总被引：7，自引：1，他引：7  

李君明  宋燕  徐和金  周永健  Carole Caranta  冯兰香 《园艺学报》2003,30(6):678-682

 利用同一PCR反应体系，对分别与番茄抗根结线虫的 基因和抗斑萎病毒(1w V)的Sw一5基因紧密连锁的SCAR标记进行了同时扩增筛选，扩增的特异性片段与单引物扩增片段完全吻合，其中与基因紧密连锁的SCAR1标记为共显性标记，抗感试材均产生750 bp的特异片段，纯合和杂合抗病基因型试材存在 I酶切位点，酶切后分别产生了570 bp、160 bp和750 bp、570 bp、160 bp的不同特异性片段，而感病基因型试材无 I酶切位点；与Sw一5基因紧密连锁的SCAR2标记为显性标记，只有抗病试材扩增出400 bD的特异性片段。经反复验证，结果稳定准确可靠，可用于在同一PCR反应体系中对两个抗病基因进行同时筛选鉴定。  相似文献   

Production and characterization of a monoclonal antibody specific to the M serotype of plum pox potyvirus     

D. Boscia  H. Zeramdini  M. Cambra  O. Potere  M.T. Gorris  A. Myrta  B. Di Terlizzi  V. Savino 《European journal of plant pathology / European Foundation for Plant Pathology》1997,103(5):477-480

A monoclonal antibody to an Albanian isolate of plum pox potyvirus (PPV) was obtained (MAbAL), that specifically recognized strain M of this virus. The specificity of MAbAL, assessed by comparative ELISA on 130 PPV isolates of different geographical origin, 22 of which were also tested by comparative IC-PCR, gave consistent and highly reproducible results. MAbAL seems to be elicited by a stable surface determinant that makes it particularly suitable for successful use under a wide range of conditions. MAbAL is an useful addition to the panel of PPV-specific MAbs available to date.  相似文献   

应用聚合酶链式反应鉴定新疆棉花落叶型黄萎病菌   总被引：9，自引：0，他引：9  

张莉  段维军  李国英  宋蓓 《植物检疫》2004,18(5):266-268

用一对棉花落叶型黄萎病菌的特异性引物D1和D2进行PCR扩增,对于落叶型黄萎病菌,该对引物可特异性地扩增产生一段550bp的产物,而非落叶型黄萎病菌则不能被扩增.供试的35个新疆黄萎菌系中,有3个菌系扩增出550bp大小的落叶型黄萎病菌特异性片段,表明目前新疆已存在落叶型黄萎病菌,用此技术可快速、准确地检疫和鉴定落叶型黄萎病菌.  相似文献   

Duplex PCR 快速检测松材线虫   总被引：2，自引：0，他引：2  

赵立荣  钟国强  廖金铃 《植物检疫》2004,18(6):324-326

利用duplex PCR技术对松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)与拟松材线虫(B. mucronatus)的rDNA部分核苷酸序列扩增.根据松材线虫与拟松材线虫的ITS1序列区别,设计出特异性引物,检测松材线虫的存在;在5.8S,28S保守序列区设计通用引物,检测伞滑刃线虫的存在.  相似文献