多重RT-PCR快速检测禽流感病毒的研究   总被引：6，自引：0，他引：6  

陈思怀  乔宪凤  华文君  郑新民  魏庆信  张涌 《湖北农业科学》2006,45(1):20-23

参考H1-H15亚型禽流感病毒(AIV)的核蛋白(NP)基因序列以及H5、H6、H9亚型AIV血凝素(HA)基因,共设计4对引物,建立了2对引物扩增AIV的NP、HA基因的多重RT-PCR方法.应用此法分别对H5、H6、H9亚型AIV尿囊液RT-PCR,电泳,回收预期片段进行测序,并同Genebank的注册序列进行同源性分析.也对NDV、IBV、IBDV尿囊液以及3种亚型AIV尿囊液的2倍系列稀释样品进行检测.结果表明,3种亚型AIv尿囊液均出现2条特异性条带,经测序确证为目的扩增片段,BLAST的同源性初步判断3种AIV的亚型为H5N1、H6N2、H9N20对NDV、IBV、IBDV的RNA扩增未见2条目的条带,判断为阴性,说明该法特异性强:能对3种亚型AIV尿囊液64～128倍稀释的样品检测出AIV,表明其灵敏度高.该检测法检测的整个过程仅需4h,实现了AIV的快速检测.  相似文献   

禽流感、新城疫、传染性支气管炎病毒多联RT-PCR诊断方法的建立   总被引：1，自引：0，他引：1  

黄淑坚  龚中贵  陈秀玲  梁小英  冼琼珍  顾万军  王林川  辛朝安 《广东农业科学》2006,(10):62-65

利用分子生物学方法,选择禽流感病毒的M基因、新城疫病毒的F基因以及传染性支气管炎病毒的N基因,分别在基因序列的保守区域设计1对特异性引物,利用所合成的3对引物对相应靶基因进行RT-PCR扩增,在优化单项RT-PCR条件的基础上,建立禽流感、新城疫、传染性支气管炎病毒多联RT-PCR的检测方法,同时对该检测方法进行敏感性及特异性试验。结果表明:这3对引物分别能特异性地扩增出禽流感病毒的M基因片段、新城疫病毒的F基因片段及传染性支气管炎病毒的N基因片段,大小分别为385 bp、520 bp和748 bp,初步建立了快速、敏感、特异鉴别检测禽流感、新城疫、传染性支气管炎病毒的分子诊断方法。  相似文献   

草莓植株中病毒dsRNA的分离和鉴定   总被引：1，自引：0，他引：1  

李贺  代红艳  张志宏  高秀岩  杜国栋  张馨宇 《中国农业科学》2006,39(1):145-152

 【目的】病毒核酸分离是病毒基因组解析的基础，本研究旨在建立草莓病毒的dsRNA分离方法，获得草莓主要病毒的部分基因组序列。【方法】采用改进的dsRNA分离方法，对草莓病毒指示植物和栽培品种中的病毒dsRNA进行分离，通过琼脂糖凝胶电泳和RT-PCR来鉴定。【结果】不同草莓品种中病毒dsRNA的含量不同，试管苗叶片中dsRNA含量高于露地苗幼叶，而露地苗幼叶中dsRNA含量明显高于完全成熟叶。dsRNA对DNase Ⅰ具有很强的耐性；当酶解缓冲液中含0.5 mol·L-1 NaCl时，dsRNA对RNase A具有较强的耐性。利用DNA凝胶回收试剂盒，能够有效回收凝胶中的dsRNA片段。应用RT-PCR技术，从凝胶回收的dsRNA及DNase Ⅰ/RNase A两酶酶解处理后的dsRNA中分别扩增出草莓斑驳病毒和草莓轻型黄边病毒的特异片段。【结论】建立了从草莓植株中分离和鉴定病毒dsRNA的完整技术体系，为草莓病毒中国分离物的基因组解析奠定了重要基础。  相似文献   

应用半套式RT-PCR技术诊断番鸭呼肠孤病毒病   总被引：1，自引：0，他引：1  

林锋强  胡奇林  陈少莺  欧阳岁东  陈仕龙  朱小丽  程晓霞 《华南农业大学学报》2007,28(2):107-109

参考GenBank中番鸭呼肠孤病毒(muscovy duck reovirus,MDRV)S1基因序列设计并合成3条引物C1、HP11和HP12,组成半套式RT-PCR,扩增片段为300 bp.应用该半套式RT-PCR对MDRV、禽呼肠孤病毒(ARV)、番鸭细小病毒(MPV)、鹅细小病毒(GPV)、鸡胚成纤维细胞(CEF)和番鸭胚成纤维细胞(MDEF)培养物进行扩增.结果仅能从MDRV中扩增出300 bp特异片段,而不能从ARV、MPV、GPV、CEF和MDEF细胞培养物中扩增出特异片段;该方法检测灵敏度为1 fg核酸,重复性好.对人工感染和临床疑似病例用病毒分离和半套式RT-PCR进行检测,2种方法符合率为100%.因此,该半套式RT-PCR可以用于番鸭呼肠孤病毒病的临床快速检测.  相似文献   

实时荧光定量PCR构建奶牛生殖系统PrP基因标准品质粒和标准曲线     

张太翔  宁章勇  赵德明  周向梅  杨建民  尹晓敏 《中国农业大学学报》2007,12(2):1-4

为阐释PrP基因在奶牛生殖系统的正常表达和正常的生理功能,以及为确定生殖系统在疯牛病垂直传播中的地位和其分子机理奠定基础,采用实时荧光定量RT-PCR的方法构建了奶牛生殖系统PrP基因的标准质粒和标准曲线。对含有目的基因质粒的EcoRⅠ酶切鉴定表明所插入的片段大小为302 bp,与预期的结果一致。所构建的标准曲线的相关系数r2=0.999,系统生成的回归方程为y=-0.29x 9.48,说明成功构建了奶牛生殖系统PrP基因的标准质粒和标准曲线,为研究PrP基因在奶牛其他组织的定量奠定基础。  相似文献   

实时实地氮肥管理对水稻产量和稻米品质的影响   总被引：38，自引：7，他引：38  

贺帆  黄见良  崔克辉  曾建敏  徐波  彭少兵  BURESH R J 《中国农业科学》2007,40(1):123-132

【目的】探讨实时实地氮肥管理对水稻产量和品质的影响。【方法】试验于2004和2005年在大田条件下，以两优培九、汕优63为材料研究了不同叶绿素仪（SPAD）预设阈值指导下的实时实地氮肥管理方式的产量与产量形成以及相应的稻米品质特性。【结果】在实时氮肥管理（RTNM）模式下，两优培九和汕优63各施氮处理比不施氮处理增产幅度分别达21.12%～57.65%和15.00%～31.18%。在实地氮肥管理（SSNM）模式下，两优培九和汕优63 SSNM处理比不施氮小区增产幅度分别达45.44%～50.71%和28.53%～32.40%。两优培九SPAD阈值分别由34～45的RTNM模式下，当SPAD阈值介于38～41之间时（氮肥用量120～165 kgN•ha-1）可以改善稻米的外观品质和加工品质；汕优63则以SPAD阈值36～39（氮肥用量：120～165 kgN•ha-1）范围内有利于改善米质。SSNM模式下以SPAD施肥阈值为37-39（氮肥用量130 kgN•ha-1）进行氮肥运筹能显著改善两优培九的加工品质、外观品质和营养品质；SSNM模式下汕优63以SPAD阈值为35～37时稻米品质相对较好，同时产量也比较高。【结论】实时实地氮肥管理能较好地协调水稻产量和品质的关系，关键措施是依据品种特性确定适宜的预设SPAD阈值。在本试验条件下，实时实地氮肥管理模式两优培九以SPAD 38～39、汕优63以SPAD 35～37左右时能获得较高的产量和部分地改善米质，可以作为生产上应用实时实地氮肥管理时的推荐阈值。  相似文献   

蜡梅花cDNA文库构建及其高频出现脂转移蛋白cDNA的表达   总被引：3，自引：0，他引：3  

眭顺照  李名扬  蒋安  王洋  秦华  皮伟  任琛 《中国农业科学》2007,40(3):644-648

【目的】构建蜡梅花cDNA文库，分析蜡梅脂转移蛋白基因的表达，为探索蜡梅冬季开花分子机理，分离克隆特色基因奠定基础。【方法】以蜡梅花器官为材料，用SMART cDNA Library Construction Kit 构建文库，RT-PCR分析基因表达。【结果】经测定原始文库滴度达到1.4×106 pfu/ml，扩增总文库滴度约为1010pfu/ml，重组率达到96%，插入片段在0.5 kb 以上，平均约1.1 kb，通过PCR 检测，从总文库中检测到了表达丰度不同的蜡梅PI、AP3和LTP基因的特异片段，说明所构建的文库覆盖度高、代表性强，LTP基因具有内含子，而总文库中扩增出的LTP基因不含内含子，说明所构建的cDNA文库无基因组DNA污染， LTP基因在蜡梅开花各个时期均表现较高的转录水平，与EST分析时高频率出现LTP序列的情况相符，证实所构建的文库能够反映蜡梅开花过程基因表达的基本情况。【结论】已获得高质量的蜡梅花cDNA文库，可以用于进一步的基因克隆或EST测序分析，这是首次正式报道蜡梅cDNA文库的构建。LTP基因在蜡梅开花过程中可能具有重要的生物学功能，为探索蜡梅冬季开花分子机理提供了线索。  相似文献   

gp64基因相应dsRNA对家蚕核型多角体病毒（BmNPV）增殖的抑制   总被引：2，自引：0，他引：2  

夏定国  张国政  王文兵  赵巧玲  唐顺明 《中国农业科学》2007,40(12):2882-2887

 【目的】研究gp64基因相对应的多个dsRNA对家蚕核型多角体病毒增殖的抑制效果。【方法】体外合成dsRNA，通过病毒滴度试验、实时定量RT-PCR法研究gp64基因的不同区域、不同长度与RNAi干扰效果的关系。【结果】供试的6个dsRNA的最大抑制效果相当（滴度TCID50的最大抑制差值为4.00左右）；经RNAi的不同时间点的gp64 mRNA 表达水平均明显下调(P<0.01)，其中48 h的gp64 mRNA的表达量约为对照的1/300。【结论】6个dsRNA均能有效地抑制病毒的基因表达和增殖；gp64 ORF第1 390～1 499位点（G3-3）是RNAi的较佳靶位点。  相似文献   

我国鸡传染性支气管炎病毒地方分离株的形态观察和S1基因的RT-PCR扩增     

游洪  王林川 《江西农业大学学报》2000,22(4)

参照已发表的IBVBeaudette株全基因组序列 ,自行设计合成了 3条引物 (youl 、you2 -、youM ) ,引物you1 和you2 -在S1基因两侧 ,跨幅约 16 10bp ,引物you2 -和youM 在S1基因的 3’端 ,跨幅约 5 30bp。用这两对引物对 5个IBV地方分离株 (HN2 ,HN4,JX1,SC2和SC1)进行RT -PCR ,均成功地扩增出相应大小的目的片段。病毒在电镜下观察可见到形态多变的冠状病毒粒子  相似文献   

牙鲆早期发育和变态期间Pitx2基因的表达(英文)     

张俊玲  施志仪  鲍宝龙 《上海水产大学学报》2003,(Z1)

Pitx2基因被认为是脊椎动物中调节内脏器官左右不对称的关键转录因子。为进一步探讨牙鲆变态期间的左右不对称是否也受Pitx2的左特异活性调节,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR),拟在变态的牙鲆的头部组织中克隆编码Pitx2基因的部分cDNA序列,并通过以18s rRNA为内标的半定量RT-PCR研究其在牙鲆早期发育和变态期间的表达情况。克隆和测序的结果表明Pitx2在牙鲆早期发育和变态期间也存在基因表达;而半定量的结果表明它的左特异性功能很可能在变态的早期阶段发挥作用。但是,牙鲆变态期间的右眼移动是否受Pitx2的左特异活性调控,以及变态期间的左右不对称和内脏器官的左右不对称是否拥有相同的分子机制,仍需进一步研究。  相似文献