miR-449b对绵羊早期胚胎发育的影响     

任秀美奥  姚旭东  蒙亚琦  郭延华  唐红  张译元  赵兴旺  王立民  周平 《中国畜牧兽医》2022,49(7):2661-2668

【目的】研究miR-449b对绵羊早期胚胎发育的影响。【方法】采用Percoll密度梯度离心法获得纯化绵羊精子，将绵羊卵丘-卵母细胞复合体（COCs）在培养箱中培养16~18 h获得成熟卵母细胞，从1月龄纯种萨福克绵羊耳组织分离成纤维细胞，通过实时荧光定量PCR比较绵羊精子、成熟卵母细胞与成纤维细胞中miR-449b的相对表达量；给成熟卵母细胞分别显微注射0.9 %生理盐水（Con组）、miR-449b模拟物对照（NC mimic）与miR-449b模拟物（miR-449b mimic），注射后进行孤雌激活，分别于激活的第2、7天统计胚胎卵裂率与囊胚率；将成熟卵母细胞进行体外受精（IVF），收集IVF、Con、NC mimic与miR-449b mimic组2-细胞胚胎，采用免疫荧光法比较组蛋白H3K9me3的变化。【结果】miR-449b在精子中的表达显著高于成熟卵母细胞和成纤维细胞（P＜0.05）；与Con组相比，miR-449b mimic和NC mimic组胚胎的卵裂率均显著降低（P＜0.05），NC mimic组胚胎卵裂率显著低于miR-449b mimic组（P＜0，05）；miR-449b mimic组胚胎囊胚率提高，但差异不显著（P＞0.05）；IVF、Con、NC mimic与miR-449b mimic组2-细胞胚胎均表达组蛋白H3K9me3，且都在细胞核表达。与Con组相比，NC mimic组2-细胞胚胎组蛋白H3K9me3的表达水平显著增加（P＜0.05），miR-449b mimic组显著降低（P＜0.05）；NC mimic组2-细胞胚胎组蛋白H3K9me3的表达水平显著高于miR-449b mimic组（P<0.05），miR-449b mimic与IVF组无显著差异（P＞0.05）。【结论】miR-449b能显著提高绵羊早期胚胎的发育率，且降低早期胚胎中H3K9me3的表达水平。  相似文献   

小鼠miR-151-3p靶基因筛选和鉴定          下载免费PDF全文

魏欢  李仲文  沈清武 《西北农业学报》2014,23(5):23-31

采用生物信息软件系统分析miR-151-3p的保守性,并筛选出与小鼠肌肉发育和肿瘤发生相关靶基因:蛋白激酶3(serine/threonine kinase 3,Akt 3),Twist碱性螺旋-环-螺旋转录因子(twist basic helix-loophelix 1,Twist 1)和T型电压依赖性钙通道α1g亚基(calcium channel,voltage-dependent,T type,alpha 1g subunit,Cacna1g)。采用实时定量PCR及双荧光素酶报告基因检测技术对以上靶基因进行初步验证,结果表明,超表达miR-151-3p显著抑制Akt 3mRNA表达,而Twist 1和Cacna1g mRNA表达变化不显著;双荧光素酶报告系统分析发现,miR-151-3p显著抑制野生型Akt 3报告载体相对荧光素酶活性,突变Akt 3 3′UTR与miR-151-3p结合的位点后,相对荧光素酶活性得到恢复,而Twist 1和Cacna1g基因双荧光素酶报告载体无此现象,结果证实Akt 3是miR-151-3p的靶基因。  相似文献