抗水稻黑条矮缩病毒和南方水稻黑条矮缩病毒的双价RNA沉默载体的构建     

徐秋芳  张金凤  张晓霞  熊如意  周益军 《江苏农业学报》2012,28(2):290-295

为利用RNAi技术获取抗水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)和南方水稻黑条矮缩病毒(SRBSDV)植株,分别针对两种病毒的S6和S10基因构建RNA沉默载体。采用重组PCR方法将RBSDV S6基因片段(R6)和SRBSDVS6基因片段(SR6)进行融合,获得600 bp的R6-SR6融合基因;将RBSDV S10基因片段(R10)和SRBSDV S10基因片段(SR10)进行融合,获得600 bp的R10-SR10融合基因。融合基因以反向重复的方式连入pBS载体,并定向插入到pCAMBIA1301载体上,获取了含有发夹结构的植物表达载体pCAMBIA1301-hp(R6-SR6)和pCAMBIA1301-hp(R10-SR10)。抗RBSDV和SRBSDV RNA沉默载体的构建为利用RNA沉默进行植物抗病毒研究奠定了基础。  相似文献   

RNAi技术在植物改良中的应用     

喻时周  秦信蓉  韩宏仕  杜才富 《热带农业科学》2012,32(3):37-43

RNA干扰是一种高效的、序列特异的基因沉默现象。文章介绍RNAi技术的研究简史及作用机制,以及在改良植物的体系结构、培育不育系、调控植物的颜色和香味、延长果实的货架期和在无核果实中的研究进展供这一领域的研究者作参考。  相似文献   

适宜于实验教学的动物组织总RNA提取的操作方法   总被引：1，自引：0，他引：1  

李银聚  张春杰 《河南农业科学》2010,(8)

为探索适宜于实验教学的动物组织总RNA的提取方法,采用氯仿处理实验器皿、耗材和水以降低外源性RNA酶对RNA的降解作用。结果表明,操作过程中合理利用氯仿能够有效降低外源性RNA酶的污染;与DEPC水处理效果相比,提取的总RNA均可用于分子生物学研究和RT-PCR扩增,但使用氯仿处理更为安全。  相似文献   

粳型短光敏核不育系5021S育性基因的定位     

黄胜东  赵志刚  江玲  翟虎渠  万建民 《江苏农业学报》2010,26(4)

以育性转换表现为"长光高温下可育,短光低温下不育"反(向)光、温敏核不育种质5021S为材料,5021S与轮回422杂交组合F2作为遗传群体进行育性相关基因的QTL定位,利用124对SSR标记构建了一张全长1 912.3 cM平均图距为14.98 cM的饱和分子连锁图谱。利用Windows QTLCartographer2.5软件,在全基因组范围内检测到4个控制育性相关性状的QTLs位点,分别位于第2、第3、第5、第7染色体上,单个QTL可解释4.5%～32.5%表型变异。其中位于第2染色体上RM5804与RM425之间的qpms-2贡献率为32.5%,第3染色体RM130与RM3405之间的qpms-3贡献率为16.1%。表明5021S的核不育性受2对隐性主基因控制,同时受微效基因调控。  相似文献   

木薯块根总RNA提取方法的比较和改进     

余洁  郭运玲  郭安平  贺立卡 《安徽农业科学》2008,36(12):4872-4874

[目的]为更好地利用基因操作手段改良木薯品质和提取高质量的木薯总RNA提供科学依据。[方法]采用4种方法提取木薯块根RNA,筛选一种最简单、有效的方法,并利用RT-PCR技术克隆木薯淀粉分支酶,分析所提取RNA的质量。[结果]结果表明,用改进的CTAB法和plant RNAReagent kit均能提取高质量的RNA,用plant RNAReagent更能节省时间,而且纯度比较高。对plant RNAReagent提取的RNA进行RT-PCR克隆,克隆出了与木薯淀粉合成有关的SBEII基因。[结论]plant RNAReagent kit提取的RNA,其质量可以满足基本的试验要求。  相似文献   

CLONING AND ANALYSIS OF THE cDNA OF SIKA β-defensins-1 ( siBD-1 )     

LI Tao  CHEN Rong  CHENG Lan-ling  ZHAO Peng-wei  YANG Yin-feng 《内蒙古农业大学学报(自然科学版)》2008,29(4)

  相似文献   

褐飞虱Kruppel homolog-1基因对FAMeT和JHE表达的影响     

金敏娜  姚云  孙冰  王博  林欣大 《安徽农业科学》2013,(12):5299-5301

[目的]探究褐飞虱Kruppel homolog-1(Nlkr-h1)基因的锌指结构特点以及对FAMeT和JHE表达的影响,了解Nlkr-h1的调控作用。[方法]通过MEGA5.0分析Nlkr-h1的功能功域每个锌指结构的进化树,并采用qPCR技术测定Nlkr-h1干扰后FAMeT和JHE的表达情况。[结果]Nlkr-h1的功能区域主要包括8个锌指结构,其中Zn1和Zn8的保守性相对较低。在褐飞虱Nlkr-h1基因被敲除的褐飞虱中,发现保幼激素合成酶基因FAMeT和代谢酶基因JHE表达量升高。[结论]为了解保幼激素信号通路分子机理以及褐飞虱的生物防治提供了理论依据。  相似文献   

RNA二级结构预测算法的研究进展     

黄伊子  李都悦  刘伟  周玮 《湖南农业科学》2014,(18)

在简要介绍了RNA的基础知识之后,对RNA二级结构的定义、表示方法、数据库等内容进行了详细阐述,并重点探讨了RNA二级结构预测方法的原理、适用范围及优缺点。目前,传统的RNA二级结构预测方法有比较序列分析法和最小自由能算法;新进发展的算法有支持向量机算法、基于堆积协变信息与最小自由能算法、基于局部茎搜索的算法、基于快速动态权重匹配算法、免疫粒子群算法、基于茎区的自由能算法、质心法。经过预测精度、复杂度、预测假节能力的对比,发现基于堆积协变信息与最小自由能算法和基于快速动态权重匹配算法,预测结果比较理想。  相似文献   

RNA二级结构预测算法的研究进展     

黄伊子  李都悦  刘伟  周玮 《湖南农业科学》2014,(9):3-8

在简要介绍了RNA的基础知识之后,对RNA二级结构的定义、表示方法、数据库等内容进行了详细阐述,并重点探讨了RNA二级结构预测方法的原理、适用范围及优缺点.目前,传统的RNA二级结构预测方法有比较序列分析法和最小自由能算法;新进发展的算法有支持向量机算法、基于堆积协变信息与最小自由能算法、基于局部茎搜索的算法、基于快速动态权重匹配算法、免疫粒子群算法、基于茎区的自由能算法、质心法.经过预测精度、复杂度、预测假节能力的对比,发现基于堆积协变信息与最小自由能算法和基于快速动态权重匹配算法,预测结果比较理想.  相似文献   

水牛RNA聚合酶Ⅲ启动子的克隆与鉴定     

张晓溪  刘庆友  邓彦飞  罗婵  崔奎青  石德顺 《广西农业科学》2014,(5):858-863

[目的]获得有效的水牛RNA聚合酶Ⅲ启动子序列,为开展水牛源细胞的基因特异沉默研究奠定基础.[方法]通过启动子上、下游保守序列对水牛源启动子7SK、U6进行克隆和启动子关键顺式作用元件识别,利用一段针对EGFP的shRNA片段（shEGFP）对水牛7SK、U6启动子进行功能性分析,然后分别在水牛源及鼠源细胞中与pEGFP-N1共转染,转染48h后用荧光显微镜检测EGFP的表达情况,并用流式细胞仪和荧光实时定量PCR检测EGFP沉默表达情况.[结果]克隆获得水牛7SK、U6启动子序列分别为430和357 bp,其OCT-1（或CACCC盒）及TATA盒高度保守.连接shEGFP后与pEGFP-N1共转染细胞,通过荧光显微镜可观察到细胞发生了明显的荧光表达沉默现象;通过流式细胞分析,发现水牛7SK和U6启动子引导的shEGFP在水牛源细胞中沉默效率高达93.82％和87.45％;荧光实时定量PCR检测结果显示,在转染bu7SK-shEGFP和buU6-shEGFP的水牛源BFF细胞中,EGFP表达水平均显著低于其他物种启动子的细胞转染组（P＜0.05）,而在鼠源PT67细胞中,水牛启动子的启动效率与其他物种启动子差异不显著（P＞0.05）.[结论]水牛7SK和U6启动子可高效启动shRNA表达,且具有一定的物种特异性.  相似文献